miRNA-198靶向调控表皮干细胞内FGFR1表达诱导慢性创面形成的机制研究

目的:研究miR-198对慢性创面形成的影响,探讨miR-198靶向调控表皮干细胞内成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1表达的可能机制与相关性。方法:所有大鼠以表皮干细胞培养划分为三组,对照组20只,采用基础饲料,40只复制糖尿病模型大鼠组,共32只建糖尿病大鼠慢性创面模型成功,其中16只为慢性创面组,另外16只通过快速尾静脉注射miR-198抑制剂转染系统溶液,命名为转染抑制载体组,通过免疫组织化学检测表皮干细胞表达,计算慢性创面的愈合率。通过细胞生长曲线测试和细胞周期分析miR-198对表皮干细胞的影响,实时定量PCR检测各组表皮干细胞中FGFR1表达。用Western-blot法检测各组细胞中FGFR1及下游Ras和MAPK蛋白的表达。结果:与对照组比较,慢性创面组miR-198表达量明显增高(P0.01),转染抑制载体miR-198后,表皮干细胞中表达显著性下调(P0.01),细胞周期分析发现慢性创面组会抑制表皮干细胞增殖,转染抑制载体(Anti-miR-198)阻断miR-198后表皮干细胞增殖得到恢复。免疫组化检测显示,慢性创面培养组FGFR1阳性表达数量增加,随着转染抑制miR-198载体的影响,FGFR1在转染抑制载体组表达增加更明显(P0.01)。Westernblot检测显示,在慢性创面模型中,转染抑制载体(Anti-miR-198)后,FGFR1的蛋白表达明显增加,转染抑制载体组Ras和MAPK的蛋白表达明显降低。结论:miR-198可能负向调控表皮干细胞FGFR1,抑制miR-198可以增强表皮干细胞FGFR1表达,加快表皮干细胞增殖和分化,从而能促进慢性创面愈合。     

兔肝VX2移植瘤门静脉阻断模型的建立及其多层螺旋CT评价

背景:临床研究发现肝癌门静脉阻断有利于抑制肝癌的生长,促进未阻断肝组织的代偿性增生,并降低经门静脉途径的转移,目前尚需动物实验进一步验证。目的:探讨兔肝VX2移植瘤门静脉阻断模型的建立方法,及其多层螺旋CT评价价值。)设计:随机分组设计、动物实验。单位:解放军第三军医大学新桥医院放射科。材料:实验于2002-07/2005-01在第三军医大学新桥医院影像学实验室完成。选择新西兰大白兔40只,随机数字表法分为4组,每组10只,门静脉阻断即刻移植瘤体组、瘤体移植3周后门静脉阻断组、阴性对照组、阳性对照组。方法:采用开腹包埋接种法移植兔肝VX2肿瘤,分别进行门静脉阻断后即刻移植瘤体和移植瘤体生长3周后行门静脉阻断,同时设立阴性对照组(门静脉左外支行假手术阻断,兔肝左外叶假性包埋接种)、阳性对照组(移植瘤体未行门静脉阻断)。所有实验兔均行兔多层螺旋CT检查。主要观察指标:门静脉阻断后肝大体变化、瘤体变化、肿瘤转移情况,肝动脉、门静脉各级分支的多层螺旋CT血管成像显示率,肝血流量、血容量、平均通过时间、血管表面通透性和肝动脉灌注分数。结果:纳入动物40只,均进入结果分析。①门静脉阻断即刻移植瘤体组于门静脉分支结扎术3周后均未见瘤体生长。瘤体移植3周后门静脉阻断组动物左内叶明显萎缩,肿瘤的生长明显受抑制,其瘤体最大径明显小于阳性对照组[分别为(2.55±0.46),(3.59±0.37)cm,t=5.57,P<0.001]。瘤体移植3周后门静脉阻断组肝内转移及肺转移发生率也明显少于阳性对照组(分别为10%,40%和100%,90%);但两者的邻近转移率差异却无显著性意义。②多层螺旋CT血管成像检查对Ⅲ级以上肝动脉分支的显示率明显低于Ⅰ、Ⅱ级肝动脉分支的显示率(分别为40%,100%,70%,P<0.05)。门静脉各级分支的显示率差异无显著性意义(P>0.05)。③门静脉阻断即刻移植瘤体组、瘤体移植3周后门静脉阻断组肝血流量、血容量、平均通过时间和血管表面通透性值均较相应对照组降低,但肝动脉灌注分数值均明显增高。结论:门静脉左外支结扎是兔肝VX2移植瘤门静脉阻断的理想模型。多层螺旋CT在兔肝门静脉阻断效果的评价中起着重要作用。     

小鼠CXCR4腺病毒的构建及其转染对MSCs向受损肝脏归巢的影响

目的:观察小鼠CXCR4腺病毒(Ad-mCXCR4)转染对骨髓间充质干细胞(MSCs)受损肝脏归巢的影响。方法:分离小鼠MSCs并体外扩增、鉴定;从小鼠肝脏组织中获得CXCR4目的基因,用同源重组法构建腺病毒载体Ad-mCXCR4并鉴定;用Ad-mCXCR4转染MSCs,以转染空载体Ad-vector和未转染的MSCs为对照,然后用Western blot法检测各组细胞CXCR4蛋白的表达;小鼠注射CCl4诱导肝损伤模型后随机分为3组,分别通过尾静脉注射转染Ad-mCXCR4,Ad-vector和未转染的MSCs,48 h后用激光共聚焦观察各组MSCs归巢到受损肝组织的情况。结果:成功构建小鼠CXCR4腺病毒载体Ad-mCXCR4;MSCs转染Ad-mCXCR4后CXCR4蛋白呈高表达,而转染Ad-vector和未转染的MSCs无CXCR4蛋白表达;注射未转染MSCs组小鼠肝脏未见绿色荧光蛋白阳性细胞,注射Ad-mCXCR4-MSCs组小鼠较注射转染Ad-vector-MSCs组小鼠肝脏绿色荧光蛋白阳性细胞明显增加[(21.25±1.56)vs.(5.42±0.81)](P<0.01)。结论:基因修饰可提高MSCs的CXCR4表达,高表达CXCR4的MSCs向受损肝脏归巢增加。     

不同心肌损伤生化标志物检验的临床价值分析

目的分析不同心肌损伤生化标志物检验的临床价值。方法随机选取我院2016年1月~2017年4月收治的心血管疾病患者220例,所有患者均经临床诊断确诊为心肌损伤,对其临床资料进行回顾性分析,对比分析五种常见生化标志物检验心肌损伤灵敏度及CK-MB、Mb、cTnI标志物特异性。结果在五种常见心肌损伤生化标志物灵敏度对比中,其检测灵敏度存在一定不同,其中以pro-BNP的诊断灵敏度为100%,远高于CK-MB、Mb、cTnI和Hcy,相比于其他四种生化标志物检验灵敏度来说差异有统计学意义(P<0.05)。在CK-MB、Mb、cTnI标志物特异性对比中,Mb首次出现时间、峰值时间均明显高于CK-MB和cTnI,组间比较差异有统计学意义(P<0.05),另外,cTnI恢复时间明显低于Mb和CK-MB,经统计学对比分析差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。结论五种生化标志物在检验心肌损伤患者中,在其发生、发展过程中均起到重要作用,与治疗效果之间存在较强的关联性,只有在检测过程中有效互补,才能够最大程度上提高临床诊断价值。     

不同HBV-DNA载量乙型肝炎肝硬化患者血小板参数及D-二聚体检测的临床意义

目的 探讨不同乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)载量乙型肝炎肝硬化患者血小板参数及D-D变化情况. 方法 以2015年1月至2016年12月间我院收治的乙型肝炎肝硬化患者60例作为研究对象,所有患者均进行HBV-DNA病毒载量检测、血小板参数检测以及D-二聚体(D-D)检测.将乙型肝炎肝硬化患者按照HBV-DNA载量数量级进行分组,对各组间血小板参数及D-D表达水平进行比较.另收取同期于我院进行常规体检的健康人25例作为对照组.结果 乙型肝炎肝硬化患者血小板计数(PLT)、血小板比容(PCT)、明显低于对照组,平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)及D-D明显高于对照组;检测下限组、低载量、中载量及高载量组患者之间血小板参数及D-D均存在显著差异(P<0.05),并且下限组、低载量、中载量及高载量组患者的PLT和PCT依次逐渐减小,MPV、PDW及D-D依次逐渐增大. 结论 乙型肝炎肝硬化高HBV-DNA载量患者存在明显凝血纤溶功能失衡,提示应对患者进行早期抗病毒干预,以减少病毒复制,维持凝血纤溶平衡.     

龟板促骨髓间充质干细胞肝脏归巢的作用研究

目的 探讨龟板饲养对移植骨髓间充质干细胞(MSCs)肝脏归巢的作用.方法 密度梯度离心法分离、培养大鼠MSCs,带绿色荧光蛋白腺病毒转染标记移植MSCs,激光共聚焦检测肝脏组织MSCs分布,Western blot检测肝脏肝细胞生长因子(HGF)蛋白及MSCs c-met蛋白表达,携带siRNA腺病毒转染下调c-met表达.结果 龟板饲养较普通饮食明显增加移植MSCs肝脏归巢(P＜0.05);同时,龟板饲养增加大鼠肝脏HGF蛋白表达,阻断HGF/c-met可部分逆转龟板促MSCs归巢的作用.结论 龟板饲养可能通过HGF/c-met轴促MSCs向肝脏组织归巢.     

龟板促MSCs肝脏归巢在大鼠肝损伤后修复中的作用研究

目的探讨龟板促MSCs肝脏归巢在大鼠肝损伤后修复中的作用。方法原代培养大鼠MSCs,腺病毒(携带绿色荧光蛋白)转染标记MSCs,激光共聚焦检测归巢至肝脏组织的MSCs含量,Western blot检测肝脏肝细胞生长因子(HGF)水平,天狼星红染色法检测肝脏Ⅰ型胶原面积,胃酶酸解法检测肝组织羟脯氨酸(Hyp),全自动生化分析仪检测血清白蛋白、谷丙转氨酶(ALT)水平。结果肝损伤后肝脏HGF含量增加,向肝脏定植的MSCs增加,同时龟板饲养可进一步促进损伤肝组织表达HFG,促进移植的MSCs向肝脏定植。另外,龟板饲养可降低肝损伤模型大鼠肝脏Ⅰ型胶原面积和Hyp及血清ALT水平,增高血清白蛋白含量。结论龟板饲养可能通过促MSCs向肝脏组织归巢加速肝损伤修复。     

沉默BC047440基因对HepG2细胞侵袭能力的影响

目的:观察沉默BC047440基因后对HepG2细胞侵袭能力的影响。方法:实验分为3组,即HepG2细胞转染siRNA的沉默组,HepG2细胞转染无关质粒组及未转染的HepG2细胞组。利用前期构建的BC047440基因的小干扰RNA（siRNA）沉默BC047440基因,然后用MTT法检测细胞黏附率,细胞划痕法检测细胞迁移能力,Boyden小室法检测细胞侵袭性。结果:沉默组的细胞黏附率在20 min和40 min时与HepG2细胞组和无关质粒组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,但在60 min时沉默组显著低于后2组(P＜0.05); 划痕实验显示划痕48h后,无关质粒组和HepG2细胞组划痕区已基本长满,而沉默组划痕依然明显; 接种16 h后无关质粒组和HepG2细胞组侵袭到Boyden小室下室面的细胞数明显多于沉默(P＜0.05)。而无关质粒组与HepG2细胞组间差异均无显著性（P＞0.05）。结论:沉默BC047440基因后可明显抑制HepG2细胞其在细胞外基质上的黏附能力、运动能力和体外侵袭能力,提示BC047440基因可增加肝癌的转移侵袭性。     

经脐单孔腹腔镜胆囊切除术

目的 探讨经脐单孔腹腔镜胆囊切除术临床应用的安全性及疗效.方法 回顾性分析2008年1月至2010年5月第三军医大学新桥医院完成的16例行经脐单孔腹腔镜胆囊切除术患者的临床资料.取紧邻脐孔右侧缘行约1.5 cm的切口,入腹后置入连接好2个5 mm Trocar和1个10 mm Trocar所形成的三通道防漏气操作装置,制造气腹,以10 mm Trocar进入腹腔镜镜头,自2个5 mm Trocar各进入一把腹腔镜器械和5 mm超声刀,按常规腹腔镜操作方法完成胆囊切除术.结果 16例患者手术均获成功,手术时间为50～150 min,未放置引流管,术后无出血及胆汁漏等并发症发生.患者恢复良好,脐部无明显手术瘢痕.结论 经脐单孔腹腔镜胆囊切除术切口美观,安全可行.但操作难度较传统LC大,进一步完善脐部操作装置及手术器械,可望在一定程度上取代传统LC.