Ⅲ型中国株HCV E2/NS1基因的扩增及其哺乳动物细胞表达质粒克隆构建

Ⅲ型中国株ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因的扩增及其哺乳动物细胞表达质粒克隆构建吴朝栋陶其敏杜绍财常锦红（北京医科大学人民医院肝病研究所，北京１０００４４）Ｅ２／ＮＳ１基因被认为是丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组的结构区基因，具有较大的变异性［１］，而且在不同的...     

丙型肝炎病毒NS3蛋白单克隆杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

应用国产基因工程表达的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３区抗原免疫小鼠，然后取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系ＳＰ２／０融合，筛选出４株稳定分泌抗ＨＣＶＮＳ３区蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，分别命名为２Ｂ６，２Ｆ３，３Ｄ８，３Ｄ９，经初步研究表明这４株单抗与ＮＳ３抗原具有良好的反应性，与ＨＣＶ核心区多肽及乙型肝炎病毒表面抗原和ｅ抗原均无反应。抑制实验表明这４株抗体分别针对ＮＳ３抗原分子上的２个不同的抗原决定簇。     

丙型肝炎研究进展 丙型肝炎病毒分子变异及其临床意义

从1989年Choo等首次克隆丙型肝炎病毒(HCV)cDNA成功以来,世界已对数十株HCV进行了克隆和测序,发现HCV变异较大存在多种亚型,HCV变异对肝炎发病机制、病原学诊断、疫苗研制及疾病治疗诸方面均有重要影响。1993年5月10-14日在日本东京召开第八届国际病毒性肝炎暨肝病研讨会,会上举行了"HCV分子变异及共临床意义”的专题研讨,这足以说明研究HCV变异的重要性,现就这次专题研讨内容综述如下:     

HCV E2和HBV preS融合蛋白真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)E2和乙型肝炎病毒(HBV)preS融合蛋白的真核表达载体.方法:用PCR方法扩增HBV preS和HCV E2蛋白基因,并将二者克隆到真核表达载体pcDNA3中,用脂质体转染试剂将其转入COS7细胞,通过免疫荧光检测细胞瞬时表达的融合蛋白.结果:E2-preS融合蛋白基因包括了全长的HBV preS和HCV E2蛋白基因,嵌合基因长度约1.6 kb.表达载体在COS7细胞表达出了E2-preS融合蛋白.结论:构建的E2-preS融合蛋白表达载体能在哺乳动物细胞中表达融合蛋白,为获得真核表达的融合蛋白及研究此蛋白的免疫原性打下基础.     

82例 HCV RNA 阳性血清聚合酶链反应产物的酶切分析

为了探讨广州地区ＨＣＶ感染的基因型，作者对广州地区不同人群中１０５例抗－ＨＣＶ阳性血清用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）进行了ＨＣＶＲＮＡ的检测，对其中８２例ＨＣＶＲＮＡ阳性患者血清做了ＰＣＲ产物的限制性内切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析，结果显示：ＨＣＶⅡ型感染７８例（９２．１％），ＨＣＶⅢ型１例，ＨＣＶⅡ／Ⅲ型混合感染３例，４例ＨＣＶⅢ型感染均是肝病患者，初步表明广州地区ＨＣＶ感染大多数属Ⅱ型。     

~3H乙肝病毒DNA探针在分子杂交检测血清中乙肝病毒DNA的临床应用

自从1983年本所建立斑点分子杂交方法检测血清乙肝病毒DNA以来,(以下简称斑试)有数篇报导应用~(32)P乙肝病毒DNA探针进行临床检测。说明斑试敏感、特异,并证实了乙肝病毒DNA与HBeAg、Dane颗粒、DNAP之间有良好的相关性,一些资料表明将~(32)P乙肝病毒DNA探针应用SouthernBlot法检测肝组织内乙肝病毒DNA状态。~3H乙肝病毒DNA探针过去多用于肝组织内病毒的原位杂交。我们应用缺刻转移标记制     

乙型肝炎血源疫苗的使用

血源性乙型肝炎疫苗已为人们所熟知,对预防乙型肝炎的感染起着决定性作用。预测将来世界上消灭乙型肝炎之唯一途径即依靠疫苗。血源性疫苗虽然来源较困难,但在近几年内国内最可实施的也就是这种疫苗。众多的流行病学调查结果表明,亚洲地区母婴传播率很高,日本早年有个估计,每年有15万婴儿,约有1万名婴儿要通过母婴传播变成携带者,如作全球性计算,每年出生的婴儿约有60万以上在1岁以内即变成携带者。这个数字是惊人的。但近几年来由于采取了乙肝疫苗及高效价免疫球蛋白(HBIG)的联合阻断,在日本1岁以内婴儿的乙肝感染率降至0.1%,有的地区为0.05%左右,显示了     

恒温核酸扩增方法的建立及其扩增产物的鉴定

目的建立一种快速、简便的恒温核酸扩增（ＮＡＳＢＡ）方法。方法用由ＡＭＶＲＴａｓｅ、ＲＮａｓｅＨ、Ｔ７ＲＮＡ聚合酶以及相应的缓冲成分组成的恒温扩增系统，对４例丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ区ＲＮＡ序列进行扩增，并通过Ｎｏｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交及限制性内切酶对扩增产物进行鉴定。结果经９０分钟或１８０分钟反应后均可扩增出预期大小的产物，放射自显影在预期位置出现阳性杂交信号。扩增产物经聚合酶链反应（ＰＣＲ）及内切酶ＳｍａⅠ消化后产生预期大小的１４４ｂｐ和３５９ｂｐ的片段，第１次ＰＣＲ产物经转录实验后与ＮＡＳＢＡ直接扩增的产物具有较好的同源性。结论ＮＡＳＢＡ法是一种快速简便的核酸扩增方法，此法扩增出的产物具有良好的特异性。     

丙型肝炎病毒的分子生物学研究与实验室诊断

丙型肝炎病毒的分子生物学研究与实验室诊断郭建平，陶其敏经过十几年的努力研究，终于弄清楚了丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是引起输血后非甲非乙肝炎的主要病因。这一突破性的进展首先应归功于以Ｈｏｕｇｈｔｏｎ为首的美国Ｃｈｉｒｏｎ公司研究小组。１９８９年他们用重组ｃ...