HO-1、HO-1 mRNA在肝硬化病人肝组织中的表达及与门静脉压力的关系

目的　观察HO CO系统在肝硬化病人肝组织中的表达及与门静脉压力的关系 ,以探讨其在肝硬化门脉高压中的作用。方法　随机选取 2 0例正常志愿者及 2 0例肝硬化患者 ,在B超引导下经皮经肝穿刺分别测定门静脉压力、抽取门静脉血和外周血并留取肝组织 ,测定血液中CO浓度 ,用免疫组化和RT PCR方法观察肝组织HO 1及其HO 1mRNA的表达。结果　肝硬化病人下腔静脉及门静脉血中CO浓度、肝组织HO 1、HO 1mRNA的表达及门静脉压力均分别显著高于正常对照组 ,正常对照组的外周血和门静脉血中CO浓度水平接近 ,无明显差异 ;但肝硬化患者的门静脉血CO浓度显著高于外周血CO浓度。结论　门脉血CO浓度、肝组织中HO 1以及HO 1mRNA表达与门静脉压力密切相关     

中西医结合抗肝纤维化

中医药在抗肝纤维化治疗中的优势 肝纤维化为诸多慢性肝病发展至肝硬化过程中所共有的病理组织学变化,是影响慢性肝病预后的重要环节.在对其原发疾病(如我国最常见的慢性乙型肝炎)尚无有效病因治疗方法的情况下,减缓或阻止肝纤维化进程是一相当重要的治疗对策,但迄今为止,尚无实质意义上抗肝纤维化的药物或方法投入临床应用.今后一段时期内,国外研究的重点仍集中在基础研究(细胞信号传导),以期从阐明肝纤维化形成机制方面寻找突破口.目前现代生物医学抗肝纤维化治疗研究是着眼于发病机制的某个关键环节,这种寻求单环节阻断的治疗方法难与肝纤维化的复杂病理机制相适应;而相关细胞因子的双刃剑样作用及结缔组织的全身分布与脏器特异性之间也存在着尚难以克服的矛盾.     

RNA干扰技术抑制类风湿关节炎成纤维细胞COX-2合成

目的 体外合成针对人环氧化酶-2（hCOX-2）的小分子干扰RNA（siRNA）,并转染人人滑膜成纤维细胞,通过比较不同siRNA抑制COX-2 mRNA表达、COX-2蛋白合成以及下游产物PGE2水平,旨在确定特异性阻断人滑膜成纤维细胞COX-2的siRNA.方法 分离、培养和传代人类风湿关节炎（类风关）滑膜成纤维细胞.设计合成4条针对hCOX-2 mRNA siRNA（1#-4#siRNA）,1条随机序列siRNA.设立1#-4#siRNA和随机序列siRNA组（NC）及未转染对照组（CTL组）.应用Lipofect AMINE 2000将上述siRNA分别转染人滑膜成纤维细胞,4 h后各培养孔加入终浓度为100 nmol/L的佛波酯.转染36 h、48 h后,各组提取蛋白质和总RNA,应用RT-PCR检测hCOX-2 mRNA表达水平,通过Western Blot检测hCOX-2蛋白表达水平.采用ELISA方法检测各组上清液PGE2的水平.结果 转染36 h,PCR结果显示,CTL、NC、1#siRNA、2#RNA、3#RNA、4#siRNA、阳性对照HeLa细胞组hCOX-2 mRNA电泳条带密度值分别为1、0.72、0.3、0.25、0.4、0.04、2.1.Western Blot结果提示上述各组hCOX-2蛋白密度值分别为1、1.04、0.52、0.39、0.9、0和2.48.转染48 h后,各组hCOX-2蛋白条带密度值分别为0.05、0.52、0.51、0.9和0.15.转染24 h、48 h和72 h后,4#siRNA组培养上清液PGE2的水平较其他各组低.结论 4#siRNA能有效抑制人滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达和COX-2蛋白的合成,且上清液中PGE2水平最低,证实4#siRNA能特异性阻断COX-2在滑膜成纤维细胞表达.     

幽门螺杆菌感染对胃粘膜病变作用的五年随访观察

目的 评价5年随访根除幽门螺杆菌（Hp)感染对胃粘膜病变的作用。方法 采用前瞻性队列研究方法,病例为上海7家企业单位在我院定点体检进行胃镜检查的病人。入选时间为1993年7月至1994年6月,部分病人有中上腹不适,胃镜及病理检查确诊为慢性胃炎的病人作为入选病例。入选时确定Hp感染状态,阳性病人根据自愿原则或采用根除Hp感染治疗,或采用对症治疗。阴性组仅在有消化不良症状时采用对症治疗。全部对象跟踪随访5年。结果 入选时30例Hp阴性,45例Hp阳性。结束随访时,24例阴性无变化（另3例失访,1例变为阳性,2例可疑）,作为对照组,45例Hp阳性。结束随访时,24例阴性无变化（另3例失访,1例变为阳性,2例可疑）,作为对照组。45例阳性病人中,1例失访,16例经抗Hp感染治疗结束4周后转阴,作为Hp阴性观察组;28例仍为Hp阳性,作为Hp阳性观察组。对照组仅17％－33％的病人炎症有进展,Hp阳性观察组,炎症加重的病人占43％－57％,Hp阴性观察组,50％的病人肠化生加重,但50％－67％的病人无明显变化;Hp阳性观察组肠化生加重的病人增至43％－57％,而Hp阴性观察组无一例加重,75％的病人维持原状。结论 根除Hp感染不仅可减轻病人的炎症程度,同时能阻止肠上皮化生的发展。     

慢性乙型肝炎血清病毒载量水平与肝硬化的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎患者病程中血清乙型肝炎病毒(HBV)-DNA水平的变化与肝硬化发生的关系.方法 收集2001至2007年经肝穿刺确诊的239例慢性乙型肝炎患者.中位随访时间28个月,检测入选和随访终点的血清HBV-DNA水平,观察肝硬化发生情况.结果 发生肝硬化者较无肝硬化者年龄更大,随访终点HBV-DNA水平更高,但两组入选时HBV-DNA水平差异无统计学意义(P=0.531).Kaplan-Meier法生存分析显示,随访终点HBV-DNA水平越高,发生肝硬化比例亦越高(X2=11.736,P=0.019).Cox比例风险模型显示,随访终点HBV-DNA水平、入选时的肝组织纤维化分期、乙型肝炎病毒e抗原阴性和γ-谷氨酰转肽酶水平为预示肝硬化发生的危险因素,风险比分别为1.898、1.918、8.976、1.006.结论 随访终点HBV-DNA和慢性乙型肝炎肝硬化的发生密切相关.     

反义金属蛋白酶抑制因子-1对肝星形细胞的影响

目的　探讨体外构建的反义金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP 1)表达质粒在大鼠肝星形细胞 (HSC)中的表达情况及对HSC活化后Ⅰ、Ⅲ型胶原量的影响。方法　双酶灌注和梯度离心法分离正常大鼠HSC ,培养 7～ 10d后活化为肌成纤维样母细胞表型。应用巢式RT PCR和基因重组技术构建能在真核细胞中表达的反义TIMP 1质粒并测序鉴定。应用脂质体介导重组质粒和 pcDNA3空质粒转染HSC ,经含 40 0 μg/mlG418的DMEM培养液筛选 3～ 4周 ,另设立空白对照组。Northernblot和Westernblot检测筛选后的HSC中TIMP 1表达情况 ;用FITC标记的Ⅰ型胶原为底物测定培养上清液内间质胶原酶活性 ;应用Westernblot方法对HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原进行半定量分析。结果　外源重组质粒能较大程度地抑制活化HSC中TIMP 1的表达 ,而pcDNA3空质粒和空白对照组则无类似结果。TIMP 1/GAPDH比值分别为 0 .67,2 .41和 2 .97(mRNA水平 ,P <0 .0 5)。TIMP 1/ β actin比值分别为0 .3 1,0 .98和 1.3 2 (蛋白质水平 ,P <0 .0 5)。外源重组质粒转染显著提高了间质胶原酶活性 ,酶活性分别为 0 .3 0 49,0 .14 11和 0 .1196(P <0 .0 5)。HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原量明显减少。Ⅰ型胶原 / β actin比值分别为 0 .63 ,1.78和 1.92 (P <0 .0 5)。Ⅲ型胶原 / β actin比值分别     

预防食管静脉曲张破裂再出血的药物研究

食管静脉曲张破裂出血是肝硬化的主要并发症之一.第一次出血后的最初6周内再出血的发生率约为50%,一年内再出血的发生率为70%～80%.预防食管静脉曲张破裂再出血的机理是通过减少门脉侧枝血流和降低肝内、门体侧枝阻力使门脉压力降低.缩血管药物和扩血管药物可以达到以上目的.缩血管药物直接或间接地引起内脏动脉血管收缩,减少门脉血流;扩血管药物通过扩张肝内和侧枝的阻力血管来降低门静脉系统的阻力,还可通过减少静脉回流和心脏前负荷,使心输出量减少,致使动脉血压下降,激活压力感受器,引起内脏血管反射性收缩,使门脉侧枝血流减少,降低门脉阻力.这两类药物最终是通过胞浆内的钙离子作用于平滑肌的肌球蛋白的轻链,而细胞内的钙离子浓度是由电位依赖的钙通道或ATP依赖的钾通道决定的.因此也有学者研究钾通道抑制剂和钙离子持抗剂对降低门脉压力的作用.     

大鼠间质胶原酶哺乳动物表达质粒的构建和体外转基因表达

目的构建大鼠间质胶原酶哺乳动物细胞表达质粒并进行体外转基因研究。方法采用ＰＣＲ及基因重组技术构建融台有Ｆｌａｇ多肽的大鼠间质胶原酶哺乳动物表达质粒,用脂质体介导该表达质粒体外转染培养的ＮＩＨ３Ｔ３细胞,通过ＲＴ－ＰＣＲ方法在转染细胞中检测间质胶原酶融合蛋白的ｍＲＮＡ表达,采用ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法在转染细胞的培养上清液中检测间质胶原酶融台蛋白的分泌,采用明胶酶谱法检测表达的间质胶原酶的明胶降解活性。结果构建的融合Ｆｌａｇ的大鼠间质胶原酶哺乳动物表达质粒经脂质体介导体外转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞后能够转录、表达并分泌间质胶原酶融合蛋白,并且,这一表达产物具有降解明胶的酶活性。结论我们成功构建了融合Ｆｌａｇ的大鼠间质胶原酶哺乳动物细胞表达质粒,体外转染研究证实该质粒能够在ＮＩＨ３Ｔ３细胞中表达活性问质胶原酶,为进一步运用该质粒进行体内转基因等研究奠定了基础。     

肝平胶囊治疗慢性乙型肝炎及其对血清纤维化指标的影响

观察 34例慢性乙型肝炎患者应用肝平胶囊治疗后血清纤维化指标 (ＨＡ、ＰⅢＮＰ、Ｃｏｌ Ⅳ )和肝功能指标 (ＴＢ、ＡＬＴ)的变化及部分患者治疗后门脉压力 (Ｈ/Ｌ)比值的变化。口服肝平胶囊 5片 ,每日 3次 ,6个月后测定血清ＨＡ、ＰⅢＮＰ、Ｃｏｌ Ⅳ及ＴＢ、ＡＬＴ等指标 ,治疗组 11例和对照组 10例患者治疗前后均行同位素门脉压力 (Ｈ/Ｌ)检查。结果表明 ,肝平胶囊不但能有效地改善慢性乙型肝炎患者的肝功能 ,且能降低ＨＡ、ＰⅢＮＰ、Ｃｏｌ Ⅳ的含量 ,尤其是门脉压力 (Ｈ/Ｌ)比值也有明显下降。与对照组相比 ,除ＰⅢＮＰ外 ,改善程度均以治疗组为著。肝平胶囊对慢性乙型肝炎有较好的治疗效果 ,在一定程度上抑制了肝纤维化的进展 ,降低了门脉压力。肝平胶囊治疗慢性乙型肝炎及其对血清纤维化指标的影响@佘为民!200032$上海复旦大学附属中山医院消化科 @胡德昌!200032$上海复旦大学附属中山医院消化科 @周朝晖!200032$上海复旦大学附属中山医院消化科 @顾伟光!200032$上海复旦大学附属中山医院消化科 @王吉耀!200032$上海复旦大学附属中山医院消化科