三氧化二砷及其不同浓度对角膜基质细胞增殖和移行的影响

目的:观察不同浓度三氧化二砷对体外培养的兔角膜基质细胞增殖和移行的影响。方法:实验于2004-11/2005-04在哈尔滨医科大学肿瘤研究所完成。实验动物为健康日本大耳白兔2只,取其角膜用组织块培养法培养原代及传代得兔角膜基质细胞,将传至2～3代的兔角膜基质细胞用于实验。向实验细胞中分别加入含不同浓度(100,50,25,12.5,10,6.25,5,2.5,1.25,0.625μmol/L)的三氧化二砷培养液,同时以加入不含三氧化二砷的培养液作为阴性对照,以加入含0.0025%丝裂霉素的培养液作为阳性对照。用细胞计数法和四甲基偶氮唑盐法检测三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的影响,用缺损闭合法观察三氧化二砷对角膜基质细胞移行的影响。结果:实验纳入大耳白兔2只,取其4只角膜培养传至二三代的角膜基质细胞均无污染,细胞数量足够实验所需。①细胞计数法观察不同浓度的三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的影响:低浓度的三氧化二砷(<12.5μmol/L)对角膜基质细胞增殖无明显抑制作用,而高浓度的三氧化二砷(≥12.5μmol/L)对角膜基质细胞的增殖具有明显的抑制作用,抑制率均在50%以上,且抑制作用随浓度的增加而增强。台盼兰染色显示各组细胞存活率均在90%以上,未见细胞毒性。②四甲基偶氮唑盐法观察不同浓度的三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的影响:四甲基偶氮唑盐法检测结果与细胞计数法基本一致,三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的抑制率随浓度的增加逐渐增强。与阳性对照比较,给予25,50,100μmol/L三氧化二砷的角膜基质细胞在加药后6d其增殖抑制率明显降低(56.4%,45.4%,50.2%,55.4%,P<0.05)。③三氧化二砷对角膜基质细胞移行的影响:给予低浓度的三氧化二砷(<25μmol/L)及阴性对照药的角膜基质细胞在用药后48h已有较多的细胞长入,4d后完全闭合,而给予高浓度三氧化二砷的角膜基质细胞在用药后48h只有极少数细胞长入缺损区,8d后仍未见缺损闭合,缺损闭合的时间明显延长。结论:三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的抑制率随浓度的增加逐渐增强,高浓度的三氧化二砷具有抑制兔角膜基质细胞增殖和移行的作用,而低浓度的三氧化二砷此种作用不明显。三氧化二砷的浓度在100μmol/L以下时,对角膜基质细胞无明显的毒性反应。     

白藜芦醇对大鼠急性心肌缺血的保护作用

背景:白藜芦醇是一种广泛存在于葡萄、花生和多种药用植物中的多酚类化合物。现已明确白藜芦醇具有多种生物活性,如抗肿瘤,抗炎等。许多证据表明白藜芦醇具有防治心血管疾病的作用,但其机制并不明确。目的:观察白藜芦醇对大鼠急性心肌缺血的保护作用及其作用机制。设计:随机分组平行对照实验。单位:哈尔滨医科大学药学院药理教研室和黑龙江省生物医药重点实验室。材料:实验于2005-03/07在哈尔滨医科大学药学院完成。选用健康成年Wistar大鼠60只,体质量250～300g。随机将大鼠分为5组:假手术组,空白对照组,白藜芦醇低、中、高剂量组(5,15,45mg/kg),每组12只。方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血模型。假手术组:只穿线不结扎。白藜芦醇组:按5,15,45mg/kg剂量静脉注射白藜芦醇(购自湖南华光生物制品有限公司,生产批号:20050221,纯度≥99%)10min后结扎。模型组:静脉注射等量生理盐水10min后结扎。分别观察大鼠左冠状动脉前降支结扎前及结扎后1,5,10,15,30min标准Ⅱ导联心电图ST段的变化情况。心肌缺血6h后进行心肌红四氮唑染色确定心肌梗死面积;紫外分光光度法测定血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶活力,确定心肌损伤程度。采用原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的d-UTP缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡指数;采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测凋亡相关基因Fas,Bcl-2及Bax的蛋白表达情况。计量资料差异比较采用t检验。主要观察指标:各组大鼠冠状动脉结扎后的ST段上移情况,血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶活力,心肌细胞凋亡指数,凋亡相关基因Fas,Bcl-2及Bax的蛋白表达情况比较。结果:大鼠60只均进入结果分析。①结扎后1,5,10min白藜芦醇中、高剂量组ST段抬高幅度明显低于模型组(P<0.05),结扎后15,30min白藜芦醇各剂量组ST段抬高幅度明显低于模型组(P<0.05),且该种作用呈剂量依赖性。②白藜芦醇各剂量组大鼠心肌梗死面积明显小于模型组(P<0.05),且该种作用呈剂量依赖性。③白藜芦醇组血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶水平明显低于模型组(P<0.05),且该种作用呈剂量依赖性。④模型组心肌细胞凋亡指数明显高于白藜芦醇各剂量组(P<0.05),模型组Bax和Fas蛋白阳性表达指数明显高于白藜芦醇中、高剂量组(P<0.05),Bcl-2蛋白阳性表达指数明显低于白藜芦醇中、高剂量组(P<0.05),且该种作用呈剂量依赖性。结论:白藜芦醇对结扎大鼠冠状动脉诱发的急性心肌缺血损伤具有保护作用,且该种作用呈剂量依赖性;白藜芦醇发挥心肌缺血保护作用的机制与其调节Fas,Bcl-2及Bax蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡有关。     

急性心房颤动犬缝隙连接蛋白40和43重构及胺碘酮的干预作用

目的 采用快速心房起搏致犬急性心房颤动(简称房颤)模型,观察心房肌缝隙连接蛋白40和43(Cx40、Cx43)含量的改变以及胺碘酮干预的效果.方法 18只成年杂种犬,随机等分为三组,即正常对照组、急性房颤组、胺碘酮组.快速心房起搏,对照组不起搏,胺碘酮组先静脉注射胺碘酮负荷量3 mg/kg,10～15 min内注入,后以维持量1.5 mg/kg静脉滴注进行干预,另两组给予等容量的生理盐水.连续刺激并且房颤8 h后,取右心耳组织,用Western blot 检测Cx40和Cx43的含量,用Lucifer Yellow划痕标记荧光传输技术在荧光显微镜上观察细胞缝隙连接通讯状态.结果 急性房颤组心房肌组织Cx40和Cx43含量较对照组降低(P均<0.05),胺碘酮组Cx40、Cx43含量较正常对照组低,差异有显著性(P均<0.05),较房颤组含量差异无显著性(P>0.05),胺碘酮可以改善急性房颤时细胞缝隙连接通讯的传导.结论 急性房颤犬缝隙连接蛋白40和43发生了结构重构,从而影响细胞间通讯,胺碘酮可以改善细胞间电信号传导,但不能改善缝隙连接结构重构.     

槲皮素对镉致大鼠急性肾损伤预防作用的研究

目的研究镉致急性肾损伤中肾脏的病理和临床改变及槲皮素的预防作用。方法雄性Wistar大鼠随机分成对照组和预防组。测定肾损伤指标:血尿素氮(BUN)、尿乙酰氨基葡糖苷酶(NAG)、尿γ-L-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、尿蛋白含量。光镜及透射电镜下观察肾脏病理改变。结果槲皮素预防组与对照组相比,大鼠的一般状态较好。预防组与对照组相比,肾脏病理损伤相对减轻且肾损伤指标含量显著降低,各组间比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论镉能够导致肾损伤,槲皮素对镉性肾损伤具有一定的预防作用。     

抗心律失常药物靶点——IKr/HERG通道的调控机制研究

目的探讨快速延迟整流钾电流（IKr／HERG）在缺血性心律失常发生过程中的调控作用及机制。方法新西兰兔12只，随机分为对照组和缺血组，采用酶解法分离单个心室肌细胞，应用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞IKr／HERG变化趋势；应用Western blot技术，检测转染小RNA（miRNA）后人乳腺癌（SKBr3）细胞IKr／HERG通道蛋白表达量的改变。结果IKr／HERG在实验电压＋60mV下，缺血组（2．25±0．31）pA／pF明显低于对照组（3．81±0．64）pA／pF；miRNA转染进入SKBr3细胞后，细胞膜IKr／HERG通道蛋白表达量降低，仅是对照组的10％。结论miRNA调控IKr／HERG通道蛋白的表达，进而抑制IKr／HERG，参与缺血性心律失常的发生与发展。     

流感病毒RNA聚合酶的结构和功能研究进展

流行性感冒病毒(influenzavirus) ,简称流感病毒,是引起流行性感冒(简称流感)的病原体。在2 0世纪人类遭受了4次流感大流行,致使数千万人失去了生命[1] 。近几年来禽流感等跨越种属障碍给人类健康和安全带来了更大的威胁,使人们清楚地认识到加强和完善对流感这类经呼吸道传播并有可能来源于动物的传染性疾病的预防、控制和治疗具有重大科学意义和实际应用价值[2 ] 。流感病毒表面抗原容易变异的特性导致使用疫苗预防流感效果欠佳[3 ] ,因而在不断跟踪抗原变化,加强新疫苗研制的同时,更应加大抗流感病毒药物的研制[4] 。目前应用抗流感药物主…     

三氧化二砷诱导QT间期延长及其离子靶点的实验研究

目的观察不同给药方法情况下,三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)对豚鼠心肌QT间期的影响,同时探讨As2O3诱导QT间期延长的离子靶点。方法分别采用静脉一次性注射和缓慢滴注的方法,观察As2O3对豚鼠心肌QTc(校正的QT间期)的影响;应用双微电极电压钳技术探讨As2O3对快速型延迟整流钾电流(IKr/HERG)的作用。结果静脉一次性注射As2O3后,0.8、1.6mg/kgAs2O3可以使QTc明显延长(与对照组相比,t=4.907、P<0.01),并且这种作用具有明显的剂量依赖性。但缓慢静脉滴注As2O3(2mg/kg),与对照组相比,QTc无明显变化。双微电极电压钳结果显示,50、100μmol/LAs2O3可明显抑制IKr/HERG电流,当控制电压为0mV时,分别使IKr/HERG电流值从对照组的(2.4±0.6)μA减少到(1.4±0.2)μA(抑制率为41.7%,t=7.071、P<0.01)和(1.0±0.4)μA(抑制率为58.3%,t=8.682、P<0.01)。结论缓慢静脉滴注As2O3可以减少长QT的产生;抑制IKr/HERG是As2O3诱导QT间期延长的重要离子靶点之一。     

一切为了地方病的控制——庆贺地病中心成立20周年

20年的光阴．在历史的长河中只是弹指一瞬间，但对地病中心而言，却使它经历了从诞生、成长到充满青春活力的不平凡历程。地病中心从成立起．就始终牢记我国改革开放总设计师邓小平同志的教诲“防治地方病，为民造福”，摒弃学院派做法，注重现场实践，坚持理论联系实际，解决影响我国地方病防治工作的科学问题．将“一切为了地方病控制”这句话作为地病中心的工作准则．承担起国家的地方病防治责任。20年来，地病中心在卫生部、中国疾病预防控制中心和哈尔滨医科大学的正确领导与大力支持下，在全国地方病防治、监测、科学研究、人员培训、技术咨询、健康教育等各项工作中，取得了显著成绩，完成了国家交给的各项任务。地病中心走过的20年历程，也是我国地方病近20年的防治工作缩影，现作一回顾，一是为了庆贺，二是为了记载这段历史，以示后人。     

白藜芦醇对大鼠急性心肌缺血的保护作用

背景：白藜芦醇是一种广泛存在于葡萄、花生和多种药用植物中的多酚类化合物。现已明确白藜芦醇具有多种牛物活性，如抗肿瘤，抗炎等。许多证据表明白藜芦醇具有防治心血管疾病的作用，但其机制并不明确。 目的：观察白藜芦醇对大鼠急性心肌缺血的保护作用及其作用机制。 设计：随机分组平行对照实验。 单位：哈尔滨医科大学药学院药理教研室和黑龙江省生物医药莺点实验室。 材料：实验于2005—03／07在哈尔滨医科夫学药学院完成。选用健康成年Wistar大鼠60只，体质蕈250-300g。随机将大鼠分为5组：假手术组，空白对照组，白藜芦醇低、中、高剂量组（5，15，45mg／kg），每组12只。 方法：结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血模型。假手术组：只穿线不结扎。白藜芦醇组：按5，15，45mg／kg剂量静脉注射白藜芦醇（购自湖南华光生物制品有限公司，生产批号：20050221，纯度／〉99％）10min后结扎。模型组：静脉注射等量生理盐水10min后结扎。分别观察大鼠左冠状动脉前降支结扎前投结扎后1，5，10，15，30min标准Ⅱ导联心电图ST段的变化情况。心肌缺血6h后进行心肌红四氯唑染色确定心肌梗死面积；紫外分光光度法测定血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶活力，确定心肌损伤程度。采用原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的d-UTP缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡指数；采用链霉索抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测凋亡相关基因Fas．Bcl-2及Bax的蛋白表达情况。计量资料差异比较采用t检验。 主要观察指标：各组大鼠冠状动脉结扎后的ST段上移情况，血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶活力，心肌细胞凋亡指数，凋亡相关基因Fas．Bcl-2及Bax的蛋白表达情况比较。 结果：大鼠60只均进入结果分析。①结扎后1，5，10min白藜芦醇中、高剂量组ST段抬高幅度明显低于模型组（P〈0．05），结扎后15，30min白藜芦醇各剂量组ST段抬高幅度明显低于模型组（P〈0．05），且该种作用呈剂量依赖性。②白藜芦醇各剂量组犬鼠心肌梗死面积明显小于模型组（P〈0．05），且该种作用呈剂量依耥性。③白藜芦醇组血清肌酸激酶和乳酸脱氧酶水平明显低于模型组（P〈0．05）．且该种作用呈剂量依赖性。④模型组心肌细胞凋亡指数明显高于白藜芦醇各剂量组（P〈0．05），模型组Bax和Fas蛋白阳性表达指数明姥高于白藜芦醇中、高剂量组（P〈0．05），Bcl-2蛋白阳性表达指数明显低于白藜芦醇中、高剂量组（P〈0．05），且该种作用呈剂量依赖性。 结论：白藜芦醇对结扎大鼠冠状动脉诱发的急性心肌缺血损伤具有保护作用，且该种作用呈剂量依赖性；白藜芦醇发挥心肌缺血保护作用的机制与其调节Fas，Bcl-2及Bax蛋白表达，抑制心肌细胞凋亡有关。     

体外诱导骨髓干细胞转化成心肌细胞的实验研究

目的　探讨 5 -氮胞苷 (5 -aza)浓度对骨髓基质干细胞 (MSCs)向心肌细胞转化的影响。方法　利用梯度离心法分离大鼠MSCs ;用 5 -aza对MSCs进行体外诱导转化 ,并使用心肌特异性抗体 (肌钙蛋白I和肌凝蛋白重链 )对诱导后的MSCs进行免疫组化染色 ,进行光镜和电镜观察。结果　分离培养后的MSCs生长密集 ,形态呈纺锤状 ,在 5 μmol/L和 10 μmol/L 5 -aza的诱导下分化成类心肌细胞 ,HE染色结果 :胞浆嗜酸性 ,免疫组化染色心肌特异性抗体阳性。电镜发现 :胞核居细胞中央 ,肌丝和幼稚肌结形成。结论　 5 -aza是促进干细胞向心肌细胞转化的有效诱导剂 ,以 5 μmol/L的 5 -aza对MSCs向心肌细胞转化的影响最大。