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目的利用大肠杆菌系统表达对多种禽病存在敏感性差异的B19和B21单倍型鸡NK细胞抑制性受体B-NK基因,并制备其多克隆抗体。方法分别提取B19和B21鸡外周血淋巴细胞总RNA,采用反转录PCR法扩增B-NK基因(分别命名为B-NK19和B-NK21),克隆至pET-30a原核表达载体中,经酶切和PCR鉴定构建重组质粒。转入到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析外源蛋白的表达。将含有与组氨酸(His)标签融合表达的外源蛋白胶条切下,多点皮下免疫新西兰兔,分别制备B-NK19和B-NK21特异性多克隆抗体。利用Western blot法鉴定其组织相容性复合体(MHC)单倍型特异性。结果成功构建了原核表达重组质粒pET-B-NK19和pET-B-NK21,利用IPTG在37℃诱导4 h后目的蛋白获得表达,免疫5次后收获兔多克隆抗体,Western blot表明B-NK19和B-NK21蛋白存在免疫学交叉反应和部分特异性。结论对多种禽病具有敏感性差异的MHC单倍体型B19和B21鸡的NK细胞抑制性受体B-NK蛋白存在抗原反应交叉性,其多克隆抗体具有部分特异性。 相似文献
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目的 在前期高通量测序分析的基础上,进一步利用荧光定量PCR验证miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病(MD)抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况.方法 通过经优化后确定的最佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件,进行荧光定量PCR分析.结果 miR-200b-3p和miR-200b-5p荧光定量PCR结果与高通量测序结果上下调情况基本一致,但差异表达显著性分析结果却不完全相同.结论 尽管差异表达显著性分析结果不完全一致,但两种方法的结果均提示来源于同一前体的miR-200b-3p和miR-200b-5p可能与MD抗性/易感性相关. 相似文献
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