“双一流”建设背景下地方高校研究生培养模式探索

一流的研究生教育是“双一流”建设的重要基础。从健全导师责权机制、深化课程体系改革、强化共享平台建设、完善培养质量评价机制等方面，探讨我校在“双一流”建设中研究生教育改革与创新的具体举措，展示了研究生培养模式改革的初步成效，为地方高校推进“双一流”建设提供有益借鉴。     

梅毒螺旋体溶血素生物信息学分析

目的本研究旨在对梅毒螺旋体(Tp)的5种溶血素进行进一步的生物信息学分析,为后续研究溶血素家族蛋白在Tp致病过程中的致病机制提供依据。 方法通过使用NCBI、BLAST、CDD、BioEdit、ExPASy、SignalP、TMHMM、MEGA、PSORTb 3.0、ABCpred等生物信息学分析方法分析梅毒螺旋体溶血素家族蛋白的一般性质、信号肽、糖基化、磷酸化位点、亚细胞位置、二级结构、功能结构域及抗原表位。 结果预测了Tp中5个溶血素家族蛋白一般性质,Tp1037功能结构域不同于其余4种,Tp0028含有1个信号肽,Tp0027含有1个糖基化位点,Tp0027和Tp1037有多个跨膜结构域,5个溶血素家族蛋白均含有多个磷酸化位点和B细胞、T细胞表位。 结论Tp含有5个溶血素家族蛋白基因,提示Tp入侵宿主时这些基因产物极有可能通过其膜成孔毒性损伤靶细胞,从而致病。     

针对gyrA基因突变的反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的研究

目的 建立快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的反向斑点杂交(reverse dot blot hybridization,RDBH)技术,并观察其效果。方法 针对结核分枝杆菌gyrA基因序列及常见的突变位点,分别设计1条野生型和7条突变型探针,建立RDBH技术,对临床分离结核分枝杆菌菌株进行喹诺酮耐药性检测,以比例法药敏试验和DNA测序做对照。结果 应用比例法药敏试验、DNA测序、RDBH三种方法分别检测59株喹诺酮耐药株和51株喹诺酮敏感株,与比例法相比,RDBH试验灵敏度和特异度分别为69.49%(41/59)、100%(51/51),符合度为83.63%;而RDBH与DNA测序结果比较,敏感度和特异度分别为97.56%(40/41),98.55%(68/69),符合度达98.18%。结论 RDBH技术检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药具有良好的灵敏度、特异度和符合度。     

福建省肺非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定

目的 对2005-2011年间,福建省福州市胸科医院分离获得的非结核分枝杆菌临床菌株进行菌种鉴定.方法 分别使用传统鉴别培养基法和多位点PCR、hsp65-PRA与rpoB-PRA,以及hsp65、rpoB、16s rRNA和ITS基因测序等分子生物学方法,对全部菌株进行菌种鉴定.结果 450株被初步鉴定为非结核分枝杆菌的临床分离菌株中,有45株被鉴定为结核分枝杆菌,其余405株被鉴定为23种不同的非结核分枝杆菌和1株支气管戈登菌.结论 在该地区有多种非结核分枝杆菌传播和流行,其中,6种非结核分枝杆菌和支气管戈登菌为在福建省内首次发现.     

肺炎嗜衣原体感染的诊断研究现状

肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)是于1989年确定的一种严格真核细胞内寄生的原核细胞型微生物,常引起呼吸道疾病的暴发流行[1]。Cpn感染遍及全球,据统计,包括美国、日本、匈牙利等在内的许多国家,人群Cpn抗体阳性者超过全国人口的一半以上,且Cpn感染因时间、地区、     

EB病毒gp350/220抗原T-B联合表位生物信息学预测

为预测EB病毒(EBV)gp350/220抗原T-B联合表位,采用在线软件IEDB和SYFPEITHIT分别预测gp350/220抗原B细胞表位和T细胞表位,寻找该抗原B细胞和T细胞共同的区域即T-B联合表位。gp350/220抗原存在潜在的T-B联合表位区域:28-43、49-55、59-64、69-79、85-91、99-111、119-129、135-144。本文运用生物信息学方法确定了gp350/220分别存在5个T细胞抗原表位﹑6个B细胞表位和3个T-B细胞联合表位区域,为进一步研发gp350/220高价优势表位疫苗奠定基础。     

沙眼衣原体质粒蛋白pORF5生物学特性初步研究

目的 分析沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)隐蔽性质粒编码的质粒蛋白pORF5在感染细胞中的定位并初步探讨其生物学特征.方法 PCR扩增pORF5质粒蛋白编码基因,构建pORF5原核表达重组体并诱导表达融合蛋白;融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫小鼠,制备单克隆抗体和多克隆抗体,间接免疫荧光技术及免疫印迹鉴定抗体的特异性;分析pORF5质粒蛋白在感染细胞中的分布及表达模式特征.采用ELISA分析pORF5质粒蛋白在自然感染状态下的表达情况及免疫原性.结果 pORF5主要分布于宿主细胞质,但也少量分布在原体(EB)和网状体(RB)上,在细胞质中的分布模式与衣原体分泌蛋白酶样活性因子(CPAF)基本相似,激光共聚焦结果显示两者并不重叠;pORF5能与Ct生殖道感染患者血清发生强烈的免疫应答.结论 pORF5为衣原体分泌蛋白,并具有很强的免疫原性;在自然感染状态下,pORF5质粒蛋白基因被激活产生内源性靶蛋白.

Abstract：

Objective To localize and characterize the plasmid protein pORF5 in the Chlamydia trachomatis(Ct) infected cells. Methods The open reading frame encoding for pORF5 protein from the Ct plasmid was amplified and cloned into the pGEX-6p vector. The recombinant plasmid pGEX-pORF5 was transformed into XL1-blue E. coli to express fusion protein with the glutathione-s-transferase (GST). After purified with Glutathione Sepharose 4B beads, the pORF5 fusion protein was used to immunize mice to make monoclonal and polyclonal antibody. The antibodies were used to localize the endogenous pORF5 protein and detect the expression pattern in Chlamydia-infected cells using an indirect immunofluorescence assay (IFA). At the same time, ELISA was used to determine whether pORF5 plasmid protein was expressed and immunogenic during Ct infection in humans. Results pORF5 was detected a dominant signal in the cytosol of the Chlamydia-infected cells with a pattern similar to that of anti-CPAF. pORF5 also appeared in the RBs and EBs in small quantity. Athough pattern was similarly, pORF5 did not overlap with CPAF. pORF5 protein was strongly recognized antiserum in an ELISA. Conclusion The pORF5 plasmid protein was identified as a secreted protein with good immunogenicity, pORF5 gene was to express the endogenous target protein during human infection.     

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白单克隆抗体2H4的纯化及其免疫学特性研究

目的 纯化抗沙眼衣原体pORF5单克隆抗体2H4并鉴定其免疫学特性.方法 大量培养pORF5单克隆抗体阳性杂交瘤细胞株并收集培养上清,采用G蛋白免疫亲和层析法纯化2H4单克隆抗体;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定2H4效价及抗体亚类;Western blot鉴定其特异性;免疫荧光试验(IFA)检测2H4单克隆抗体的衣原体种属特异性.结果 纯化后2H4抗体的纯度高达93％;效价为1:1024,免疫球蛋白类型为IgG2a;2H4抗体不仅能特异性识别pORF5融合蛋白,而且能特异性识别Ct血清型A、D、L2、鼠农原体(MoPn)、鹦鹉热嗜农原体(6BC)质粒所编码的内源性pORF5蛋白,但不识别衣原体其他质粒蛋白和肺炎嗜衣原体(Cpn).结论 获得了高纯度的能特异识别pORF5质粒蛋白的单克隆抗体,为进一步研究pORF5蛋白结构和功能以及沙眼衣原体诊断试剂盒的研制奠定了良好的基础.     

质粒蛋白pORF5在沙眼衣原体感染细胞中的定位及免疫原性研究(英文)

目的分析沙眼衣原体隐蔽性质粒编码的质粒蛋白pORF5在感染细胞中的定位并初步探讨免疫原性特征。方法 PCR扩增pORF5质粒蛋白编码基因,构建原核表达重组体pGEX-6p/pORF5,重组体转化大肠杆菌XL1-blue中诱导表达融合蛋白;融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫小鼠,制备单克隆抗体和多克隆抗体,间接免疫荧光技术及免疫印迹鉴定抗体的特异性,并分析pORF5质粒蛋白在感染细胞中的分布特征。采用ELISA方法分析pORF5质粒蛋白的免疫原性。结果 pORF5原核表达重组体成功构建,融合蛋白在大肠杆菌中可溶性表达;pORF5主要分布于宿主细胞胞浆,但也少量分布在EB、RB上;pORF5能与衣原体患者血清及鼠免疫血清发生强烈地免疫反应。结论 pORF5为衣原体分泌蛋白,并具有很强的免疫原性。     

生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2

目的观察生殖支原体脂质相关膜蛋白(LAMP)能否诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2(hBD-2),并探讨其可能的调控机制。方法体外培养End1/E6E7人宫颈上皮细胞,用不同浓度的LAMP作用细胞48 h,反转录PCR检测hBD-2 mRNA的表达,Western blot法检测hBD-2蛋白的表达;用Toll样受体2(TLR2)和TLR6中和抗体孵育End1/E6E7细胞,并用TLR2、TLR6和MyD88负显性突变体转染细胞,以明确TLR2、TLR6和MyD88在介导hBD-2表达中的作用;Western blot法检测核因子κB(NF-κB)p65亚基核转位情况,电泳迁移率实验(EMSA)分析LAMP处理前后NF-κB的DNA结合活性;采用NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)处理,观察对hBD-2表达的影响。结果生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2mRNA和蛋白。TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后,能降低hBD-2表达;MyD88负显性突变体也能显著抑制LAMP诱导的hBD-2表达。Western blot结果显示,LAMP处理后可诱导p65核转位,并能增强NF-κB的DNA结合活性。而NF-κB抑制剂PDTC处理后,hBD-2表达降低。结论生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2,可能受TLR2、TLR6/MyD88/NF-κB调控。