胞外体的多重作用

Exosome又称胞外体，是由细胞多泡体（MVB）与质膜融合并把其内含小泡排泌到细胞外而形成的一群膜性小囊泡。Exosome参与多种生理、病理过程。特别是抗原提呈细胞（APC）分泌的Exosome富含MHCⅠ／Ⅱ类分子、协同刺激分子、热休克蛋白70～90等抗原提呈相关分子，具有抗原提呈功能；肿瘤细胞来源的Exosome含有多表位肿瘤抗原，能诱发特异性的细胞毒性T细胞。Exosome有望作为新一代生物医学基础研究和应用开发的技术平台，近年来引起了学者的广泛关注。现就Exosome的起源、生物学特征与功能作一综述。     

肾髓质癌临床病理特征

目的:探讨肾髓质癌临床病理学及分子生物学特征,提高对该肿瘤的诊断和鉴别诊断水平。方法:对1例肾髓质癌进行临床、病理组织学和免疫组化观察,并复习国内外相关文献。结果:肾髓质癌好发于青少年,组织结构多样,常见卵黄囊样、网状、微囊状、腺管腺泡状、实性巢状等7种排列;间质明显纤维化及大量中性粒细胞浸润;癌细胞高级别,胞浆嗜酸性,泡状核,核仁明显;免疫组化同时表达Cam5.2、EMA和Vim,局灶表达CK7,其余标记均为阴性,高分子量CK(34βE12)阴性有助于同肾集合管癌鉴别。结论:肾髓质癌是一种罕见的侵袭性强的恶性肿瘤,以细胞核高级别和组织结构多样性为特点,需与乳头状肾癌、肾集合管癌、肾横纹肌样瘤、肉瘤样肾细胞癌鉴别,早期诊断早期治疗是提高其疗效的关键。     

H22源exosomes瘤苗在小鼠体内的抗肿瘤及免疫调节作用

目的:探讨exosomes瘤苗对小鼠免疫功能及肝癌移植瘤生长的影响.方法:从培养的小鼠肝癌H22细胞上清中分离exosomes瘤苗,以H22细胞接种BALB/e小鼠建市动物模型,随机分为exosomes瘤苗接种组及PBS对照组.15 d后处死小鼠,测量移植瘤体重量,计算抑瘤率;分别称取脾重、胸腺重,检测荷瘤小鼠脾脏指数和胸腺指数;用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况和细胞毒活性;酶连免疫吸附试验(Enzyme-linked immunoabsorbent assay,ELISA)检测脾淋巴细胞产生IL-2、INF-γ的能力.结果:接种exosomes瘤苗能显著抑制肿瘤生长,抑瘤率达42.26%;与对照组比较,实验组荷瘤鼠胸腺指数、脾指数显著提高(P<0.05);exosomes促进脾淋巴细胞增殖并增强其细胞毒活性,同时脾淋巴细胞培养上清中IL-2、INF-γ的水平升高.结论:exosomes瘤苗可能通过增强小鼠的免疫功能抑制小鼠肝癌移植瘤生长.     

顺铂联合exosomes抗小鼠肝癌效应的实验研究

目的:评价顺铂(DDP)与exosomes联用的抗肿瘤效果,研究其可能机制.方法:采用MTT法检测顺铂对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响,用H21源exosomes瘤苗免疫小鼠,3 H-TdR释放法检测exosomes诱导产生的CTL活性及顺铂对CTL杀伤的增敏作用,RT-PCR检测顺铂作用后H22细胞中Fas及exosomes免疫后脾淋巴细胞FasL的mRNA表达水平,Western blot检测顺铂对H22细胞Fas的蛋白表达水平的影响.以小鼠肝癌H22细胞接种BALB/c小鼠建立动物模型,观察顺铂联合exosomes治疗对小鼠生存期的影响.结果:顺铂抑制H22细胞生长呈量效关系;exosomes免疫小鼠可诱导产生针对H22细胞的CTL反应,经2.5 mg/L顺铂预处理24 h的H22细胞对CTL杀伤的敏感性增强(P＜0.05).顺铂在mRNA和蛋白水平,显著增强H22Fas的表达;exosomes免疫小鼠后,脾淋巴细胞FasL表达增加.顺铂联合exosomes组小鼠生存期较单独治疗组及对照组明显延长(P＜0.05).结论:顺铂与exosomes联合治疗有协同抑制肿瘤的作用,产生协同作用的机制与增强CTL活性有关.     

热应激小鼠肝癌细胞(H22)源Exosomes的抗肿瘤免疫机制

 目的 制备小鼠肝癌细胞（H₂₂）源Exosomes及热应激小鼠肝癌细胞（H₂₂）源HS-Exo （heat stressed Exosomes,HS-Exo）,研究其对小鼠可能的抗肿瘤免疫机制。方法 用超速分级离心和蔗糖密度梯度离心纯化获得Exosomes及HS-Exo,透射电镜观察其形态。以Exosomes为对照,观察HS-Exo的蛋白组分、产量及其激发宿主抗肝癌免疫应答效应,用Western blot方法检测两者所含有的相关蛋白情况。用MTT法检测免疫小鼠脾细胞增殖和脾淋巴细胞的细胞毒活性。用免疫组化法检测经两者免疫后小鼠肿瘤组织中CD4+、CD8+淋巴细胞浸润情况。结果 HS-Exo与Exosomes形态相似,HS-Exo所含的重要免疫蛋白表达增加（P<0.05）,用HS-Exo免疫小鼠后比用Exosomes免疫小鼠能更有效地抑制肿瘤生长,更好地诱导淋巴细胞增殖,更显著增强小鼠脾淋巴细胞的细胞毒活性以及更明显的肿瘤治疗作用（P<0.05）。结论 热应激制备HS-Exo的方法具有可行性,HS-Exo比Exosomes具有更强的免疫活性和肿瘤治疗作用。     

UO-126对HeLa细胞增殖及对FBW7表达的影响

目的:观察UO-126对人类宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖及对F-盒和含蛋白7的WD重复结构域FBW7表达的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的UO-126对HeLa细胞增殖的影响;免疫荧光法检测FBW7在HeLa细胞中的定位和表达;RT-PCR、Western blot检测FBW7 mRNA及蛋白在UO-126阻断丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein ki-nases,MAPK)信号通路前后的表达情况。结果:MTT结果显示各浓度UO-126具有抑制HeLa细胞增殖的作用,且具有剂量依赖性和时间依赖性(P0.05)。免疫荧光检测显示UO-126处理HeLa细胞后FBW7阳性表达增强。RT-PCR及West-ern blot结果显示,UO-126作用后HeLa细胞FBW7 mRNA及蛋白表达水平较未处理HeLa细胞明显增高(P0.05)。结论:MAPK信号通路阻断剂UO-126抑制HeLa细胞增殖,FBW7位于MAPK信号通路的下游。     

三氧化二砷诱导小鼠肝癌细胞H22外泌exosome及相关机制研究

目的 探讨三氧化二砷在小鼠肝癌细胞H22外泌exosome中的影响. 方法 MTT法筛选二氧化二砷的合适药物浓度;密度梯度离心和超速离心法提纯exosome,Bradford法对exosome总蛋白进行定量分析;Western blot检测影响小囊泡vesicle分泌的复合体SNARE的重要组成及凋节蛋白Syntaxin的表达;结合钙荧光探针Fura-2、荧光倒置定量显微镜测定细胞内游离钙的相对浓度.结果维持小鼠肝癌细胞H<22>90%存活48 h的药物浓度为1.25 μmmol/L;药物作用前后,细胞数为5×104ml-1的H22细胞常规培养48 h所得细胞悬液200 ml,经密度梯度离心和超速离心所得exosome的总蛋白浓度分别为(0.85±0.13)、(0.96±0.10)mg/ml,差异具有统计学意义(P<0.05);三氧化:砷作用前后,H22细胞均有Syntaxin蛋白表达,三氧化二砷处理后,其表达明显增加(P<0.05). 结论 SNARE复合体假说也适用于小鼠肝癌细胞H22的exosome外泌过程,三氧化二砷在exosome的外泌过程中有一定的促进作用.     

阿司匹林联合氯吡格雷对急性脑梗死患者神经功能及血小板活化的影响

目的:探讨阿司匹林结合氯吡格雷对急性脑梗死病人神经功能和血小板活化的影响.方法:选84例该院就诊病人随机分组,全数病人均进行阿司匹林治疗,观察组病人在此基础上联合氯吡格雷,对比两组病人血小板指标改变,神经功能损伤(NIHSS),Barthe1指数以及不良反应.结果:观察组病人NIHSS和Barthe1指数均明显由于对照组(P＜0.05);两组病人血小板水水平指标治疗后均得到改善,且观察组优于对照组(P＜0.05);观察组5例并发症明显优于对照组10例(P＜0.05).结论:通过阿司匹林和氯吡格雷联合治疗急性脑梗死效果较佳,可降低并发症和神经损伤,改善病人生活能力以及血小板活化对疾病的影响,临床可推广应用.