基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白技术检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA方法的建立

目的建立一种基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas13a)的乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)检测方法。方法提取2017年6月至2020年10月于首都医科大学附属北京佑安医院就诊的4例乙型肝炎患者肝脏总DNA后,使用HindⅢ内切酶和质粒安全性ATP依赖DNA酶(PSAD)分别进行酶切;根据松弛环状DNA(rcDNA)和cccDNA的结构差异,设计特异性扩增HBV cccDNA的引物,对酶切后的产物进行滚环扩增(RCA)和PCR扩增;并筛选crRNA,建立基于CRISPR/Cas13a技术的HBV cccDNA检测新方法。结果利用α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)和HBV表面抗原(HBsAg)引物对双重酶切后的产物进行扩增,验证产物中HBV基因组的存在;利用HBV cccDNA和HBV rcDNA引物对PSDA酶切后的产物扩增,验证了产物中只存在HBV cccDNA;利用RCA后的阳性样本作为模板梯度稀释,然后进行PCR扩增转录后使用CRISPR/Cas13a检测,计算出检测下限为10拷贝/μl。结论本研究建立了RCA-PCR-CRISPR-Cas13a的新型检测方法,可对HBV cccDNA进行高灵敏度和高特异性检测,为乙型肝炎患者抗病毒治疗评估、治疗终点的确定以及调整治疗方案提供了有效的监测手段。     

基于系统药理学分析野生真菌硬皮马勃治疗肿瘤多层次作用机制＊

目的 鉴定当地民间应用普遍的野生药用真菌，并探讨其治疗肿瘤的作用机制。方法 采用形态学和分子生物学方法对一株采自定陶仿山野生药用真菌进行鉴定，确定为硬皮马勃。通过文献检索收集硬皮马勃化学成分，利用PubChem软件和TCMSP、GCS数据库得到化学成分结构信息及其药用动力学参数和相关靶点分析，通过SysDT和WES系统鉴定潜在化学成分靶点，利用CTD数据库获得靶点功能，将潜在化合物和肿瘤相关靶点导入Cytoscape3.8.0软件构建分子-靶标网络。应用DAVID数据库对肿瘤相关靶点进行GO和KEGG富集分析，揭示有关活性成分靶点所涉及的生物学过程和通路，将肿瘤相关靶点和通路导入Cytoscape3.8.0软件构建靶点-通路网络。结果 从文献中获得硬皮马勃的化学成分59个，通过ADME计算系统筛选出5个潜在活性的化合物即活性成分，预测到38个靶点，其中与肿瘤相关靶点16个。这些活性成分主要通过Toll-like receptor、PI3K-AKT、MAPK和NF-kappa B等通路参与免疫应答，抑制肿瘤细胞生长、增殖，促进其凋亡。结论 表明硬皮马勃治疗肿瘤具有多靶点、多途径协同作用的特点，并通过多层次效应达到治疗肿瘤的效果。本研究为更好理解硬皮马勃作用肿瘤的机制和肿瘤药物开发提供理论依据。     

儿童肺炎克雷伯菌血流感染临床特征及菌株药物敏感性分析

摘要：目的 探讨儿童肺炎克雷伯菌血流感染(Klebsiella pneumoniae bloodstream infection, KPBSI)临床特征及肺炎克雷伯 菌(Klebsiella pneumoniae, KP)对常用抗菌药物的敏感性，为儿童KPBSI合理治疗提供参考。方法 回顾性分析2014年1月至2019 年12月在重庆医科大学附属儿童医院住院的KPBSI患儿临床资料。结果 共纳入110例患儿，64例(58.2%)为院内感染，72例 (65.5%)有基础疾病，以血液系统肿瘤最多见。110例患儿PRISM Ⅲ评分为16.0(7.0~20.8)，其中74例(67.3%)发生脓毒症，15例 (13.6%)发生脓毒性休克，18例(16.4%)发生呼吸衰竭，15例(13.6%)需有创机械通气，院内死亡共13例(11.8%)。KP菌株对阿米卡 星、碳青霉烯类抗菌药物敏感率＞90%，对头孢噻肟、头孢曲松和头孢他啶的敏感率分别为58.3%、60.9%和70.9%，对头孢哌 酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为59.5%和82.7%。检出ESBLs+菌株39株(39/86，45.3%)，耐碳青霉烯类肺炎克雷 伯菌(CRKP)菌株10株(10/110，9.1%)，ESBLs+KP菌株和CRKP在各年龄组间分布无统计学差异。结论 儿童KPBSI多见于有基 础疾病的患儿，脓毒症、脓毒性休克和呼吸衰竭发生率高；KP菌株对头孢他啶和哌拉西林/他唑巴坦敏感性较高，可经验性治 疗轻症KPBSI患儿。     

Demarcation of arteriopulmonary segments: a novel and effective method for the identification of pulmonary segments

ObjectiveEach pulmonary segment is an anatomical and functional unit. However, it is fundamentally difficult to precisely distinguish every pulmonary segment using the conventional pulmonary intersegmental planes from computed tomography images. Building arteriopulmonary segments is likely to be an effective way to identify pulmonary segments.MethodsThe thoracic computed tomography images of 40 patients were collected. The anatomic structures of interest were extracted in the transverse, sagittal, and coronal planes using the semi-automated segmentation tools provided by Amira software. The intrapulmonary vessels were subsequently segmented and reconstructed. The distributions of the pulmonary arteries, veins, and bronchi were observed. In patients with pulmonary masses, the mass was also reconstructed.ResultsThe three-dimensional reconstructed images showed the branches of the pulmonary artery ramified up to their eighth order covering the entire lung as well as evident intersegmental gaps without pulmonary arteries. The segmental artery was closely accompanied by the segmental bronchi in 486 pulmonary segments (90% of total number of segments). The size and spatial location of the pulmonary mass within a pulmonary segment were also clearly visible.ConclusionsDemarcation of arteriopulmonary segments can be used to precisely distinguish every pulmonary segment and provide its detailed anatomical structure before pulmonary segmentectomy.     

基于生物钟节律探讨前列腺癌的 发病机理及择时治疗策略

生物钟节律观与中医“天人一体”观相契合，生物钟节律紊乱可影响人体的生理病理状态，通过调节生物钟节律可达到提高治疗效果的目的。生物钟节律系统包括中枢生物钟节律系统与外周生物节律系统两大系统，分别在疾病发生发展中发挥不同的作用。与之相应，择时疗法是根据人体气血阴阳节律变化而选择相应药物治疗以达到最佳的疗效的一种时间医学治疗方法。临床上许多前列腺癌患者的发病与生物钟节律紊乱密切相关，通过调整生物钟节律具有预防和改善前列腺癌预后的积极作用。因此，本文将以现代生物钟节律的生理及病理机理为切入点，探讨不同生物钟节律系统紊乱在促前列腺癌中医主证形成过程中的发生机理，进而探讨择时治疗策略在不同类型前列腺癌治疗中运用的可行性，以期对前列腺癌的防治及预后产生一定的影响。     

Abnormal glucose tolerance in a pediatric cystic fibrosis cohort: Trends in clinical outcomes and associated factors in the preceding years

Background and aimsDeterioration of anthropometric and lung function parameters was shown to precede the onset of cystic fibrosis-related diabetes (CFRD) in adults. In children, studies have been conducted in small cohorts with relatively short observation period. Study objectives were to document the longitudinal trends of anthropometric, pulmonary, nutritional and metabolic parameters from cystic fibrosis (CF) diagnosis to the ascertainment of abnormal glucose tolerance and identify parameters associated with the incidence of such abnormalities in a pediatric CF cohort.Methods and resultsRetrospective cohort study of 281 children with CF. Longitudinal trends of anthropometric, lung function, nutritional and metabolic data were generated from CF diagnosis to the ascertainment of abnormal glucose tolerance defined as the presence of either impaired glucose tolerance (IGT), unconfirmed CFRD or CFRD. Cox models and Kaplan–Meier curves were used to identify factors associated with developing abnormal glucose tolerance.Forty-five percent of cohort had normal glucose tolerance (NGT), 27% IGT, 10% unconfirmed CFRD and 18% CFRD. Children who developed CFRD displayed lower height z-scores from a very early age. Conversely, HbA1c levels began to rise closer to CFRD ascertainment. Height z-scores (HR: 0.45; CI 95% [0.29–0.69]) and HbA1c (HR: 2.43; CI 95% [1.86–3.18]) in years preceding ascertainment were associated with the risk of developing CFRD.ConclusionChildren who developed CFRD display distinctive trends for height z-scores from a very early age, whereas HbA1c appears as a marker of established glucose metabolism derangements.     

“三全育人”视角下思政教育机制实践与探索——“杏林成长导师”计划的构建

“三全育人”是高校思政教育工作的关键一环，也是中医药高校推动思政教育的重要内容。以“三全育人”为视角对北京中医药大学思想政治教育举措“杏林成长导师”计划路径、内容深入分析，运用统计分析和文献研究方法，剖析该计划对中医学专业大学生的学业、思想和实践等多个层面的现实成效，从而为“三全育人”理念在中医药院校制度建构中的应用提供新的视角与方法。     

不同年龄段勃起功能障碍患者的心理状况与人格特征分析

目的探讨不同年龄段勃起功能障碍(ED)患者心理状况的差异。方法回顾性分析郑州大学第三附属医院2018年7月至2019年7月收治的401例ED患者的临床资料。年龄20~60岁。将所有患者按年龄段分为4组:A组158例,年龄20~29岁;B组182例,年龄30~39岁;C组38例,年龄40~49岁;D组23例,年龄50~60岁。基于国际勃起功能评分表(IIEF-5)评估患者的勃起功能情况。采用症状自评量表(SCL-90)评估患者的敌对、焦虑、精神病性、恐怖、偏执、强迫、躯体化、人际关系、抑郁等9项心理状况。采用状态-特质焦虑量表(STAI)区分患者是否存在状态性或特质性的焦虑情绪。采用艾森克人格问卷(EPQ)分析患者的人格类型。分析患者组与文献报道的全国常模组SCL-90、STAI和EPQ量表的差异。分析不同年龄组患者各项指标的差异。结果患者组SCL-90量表的敌对(1.64±0.67,t=4.81,P<0.001)、焦虑(1.58±0.66,t=6.83,P<0.001)、精神病性(1.62±0.68,t=11.87,P<0.001)、偏执(1.55±0.66,t=3.58,P<0.001)、强迫(1.95±0.70,t=9.56,P<0.001)、躯体化(1.43±0.58,t=2.10,P=0.036)、人际关系/敏感(1.74±0.74,t=2.79,P=0.005)、抑郁(1.66±0.74,t=4.50,P<0.001)等因子分,以及总分(1.53±0.63,t=3.07,P=0.002)均显著高于全国常模组。A、B、C、D组的人际关系/敏感得分差异有统计学意义(1.72±0.78、1.65±0.69、1.58±0.92、1.43±0.59,F=2.84,P=0.038)。患者组STAI量表的状态焦虑(t=7.35,P<0.001)、特质焦虑(t=6.31,P<0.001)等因子分和总分(t=8.41,P<0.001)均显著高于全国常模组,不同年龄组的状态焦虑(F=5.29,P=0.001)、特质焦虑(F=5.54,P<0.001)因子分和总分(F=5.66,P<0.001)差异有统计学意义。患者组的精神质(t=30.56,P<0.001)、情绪(t=45.94,P<0.001)、外倾-内倾(t=11.72,P<0.001)、掩饰性(t=29.16,P<0.001)等因子分和总分(t=30.56,P<0.001)均显著高于全国常模组。401例的人格类型分别为抑郁质183例(45.64%),胆汁质94例(23.44%),黏液质66例(16.46%),多血质58例(14.46%)。不同年龄组的抑郁质、胆汁质、黏液质、多血质人格类型分布分别为A组76、35、26、21例,B组87、40、32、23例,C组14、10、6、8例,D组6、9、2、6例,组间比较差异无统计学意义(χ^2=10.65,P=0.30)。结论ED患者存在一系列异常的情绪、躯体化的不适感,敏感的人际关系以及内向、情绪不稳定的人格特征;年龄越小的患者其焦虑情绪越严重,人际关系越敏感,可能与其内向的个性特征及情绪的不稳定性相关。