免疫调节剂SE抗血吸虫性肝病变的CD+4细胞因子调节动态

目的　进一步研究免疫调节剂SE(含SE - 1和SE - 2 )对感染小鼠诱导的抗肝内血吸虫卵肉芽肿调节效应的动态变化和分子机制。方法　BALB/c小鼠 30只 ,均分 3组 ,2组分别用SE - 1和SE - 2皮下免疫共 3次 ,每次间隔 1w ,总剂量 10 5 μg和 16 0 μg/鼠 ,另为对照组。末次免疫后 10d ,3组每鼠攻击感染尾蚴 30± 2条。在感染后 7～ 11w时 ,剖杀小鼠 :取肝组织 ,制成石腊切片 ,观察和计算肉芽肿大小 ;无菌分离脾淋巴细胞 ,进行培养 ,取上清液测定IL - 2、IL - 4和IL - 10含量水平 (pg/ml)。 结果　小鼠感染后 7～ 11wk时 ,实验鼠肉芽肿的平均面积和体积均显著小于感染对照鼠 (P均 <0 0 1) ,实验组之间无显著性差异 (P均 >0 0 5 ) ;在感染后 7w时 ,实验鼠的IL - 2和IL - 4水平均显著高于对照鼠 ;3组均显示相当高水平的IL - 10 ;在感染后 11w时 ,实验鼠的IL - 10水平显著高于对照鼠 (P均 <0 0 5 )。结论　免疫调节剂SE能诱导明显的抗肝内血吸虫卵肉芽肿效应和血吸虫性纤维化作用 ,其分子机制与Th1型 (IL - 2 )和Th2型 (IL - 4和IL - 10 )细胞因子应答的调节动态密切相关。     

日本血吸虫感染可诱导共刺激分子（ICOS）转基因小鼠的免疫应答及其病理反应

目的 观察ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后的免疫应答及其免疫病理反应。 方法 收集ICOS转基因小鼠及对照组野生型小鼠分别感染30条日本血吸虫尾蚴后4～8周的血清及脾淋巴细胞培养上清，用ELISA双抗体夹心法检测血清抗体IgG、IgG1、IgG2a的水平和培养上清中的Th1细胞因子γ干扰素（IFN-γ），Th2细胞因子白细胞介素-4（IL-4）水平。取小鼠感染后6、8周肝脏，常规石蜡连续切片，HE染色，在光镜观察单个虫卵肉芽肿病变。 结果 转基因小鼠IFN-γ的表达水平无显著变化，而6、8周时转基因小鼠的IL?鄄4水平呈显著上调表达，分别为（20.8±1.6）pg/ml和（25.3±3.4）pg/ml（P<0.01）。转基因小鼠血清IgG、IgG1表达水平也均高于对照组。在转基因小鼠，反映Th1/Th2免疫平衡的Th2分化指数和IgG1/IgG2a比值也明显呈Th2优势应答，分别为2.20±0.68和5.59±0.31。感染6、8周转基因小鼠肝虫卵肉芽肿反应比对照组更为显著。转基因小鼠肝虫卵肉芽肿体积显著大于同期对照组的肉芽肿，增大率分别为24.48%和26.37%（P<0.01）。 结论 ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后表现出Th2优势应答的免疫学特征，表明ICOS在血吸虫病免疫病理中具有重要作用。     

减毒日本血吸虫尾蚴免疫BALB/c小鼠血清IgG水平动态及其被动转移保护力研究

以紫外线照射减毒血吸虫尾蚴免疫动物已证明可获得较高的保护力，尤其是重复免疫更可使免疫小鼠获得更高的保护力；人们普遍认为其诱导的保护性机制可能是细胞免疫与体液免疫共同作用的结果。本文以紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫BALB／c小鼠，动态观察IgG抗体水平并将免疫小鼠血清转移至另一组小鼠体内测定保护力，以同种品系来源的血清抗体来进一步探讨抗体在血吸虫保护性免疫机制中的作用。     

日本血吸虫病免疫酶染色试验、双面胶纸条法环卵沉淀试验和常规法环卵沉淀试验的现场比较

应用免疫酶染色试验(IEST)、双面胶纸条法CO-PT(DGS-COPT)和常规法COPT(CV-COPT),以单盲法比较试验了120例粪便检查阳性血吸虫病人、120例经用吡喹酮治疗3～4年及≥5年血吸虫病人和120名健康人。IEST的敏感性和特异性为91.7和95.8％.两种COPT的敏感性和特异性分别为81.7～82.5％和96.7～97.5％,无显著性差异。三种血清学方法比     

免疫酶染色试验和双面胶纸条法环卵沉淀试验诊断血吸虫病的进一步研究

采用免疫酶染色试验(IEST)和双面胶纸条法环卵沉淀试验(DGS—COPT),并以单盲法对比检测153例血吸虫病人,49例经吡喳酮治疗后5年以上的血吸虫病人,22例华支睾吸虫病人和76名健康人的血清。两种方法的敏感性和特异性:IEST 分别为89.5%和89.5%;DGS—COPT 分别为86.3%和97.4%;交叉反应率分别为13.6%和9.1%;已治疗后血吸虫病人的转阴率分别为59.2%和77.6%。两法的经治疗后血吸虫病人未转阴,假阳性及交叉反应者的阳性血清滴度(1∶20—1∶80)或平均环沉率(≥3%)可达所占总数的12.5%—25%或62.7%,这些病例未进行追查,故很难排除其有血吸虫感染的可能性。试验结果进一步证明IEST 及DGS—COPT 均具有较高的诊断和考核疗效的价值。     

日本血吸虫感染动物红细胞上非游离性循环抗原水平的检测和动态研究

应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原的多克隆抗体（抗ＳＥＡ－ＰｃＡｂ）检测感染５０～２００条尾蚴后不同时间的兔红细胞（ＲＢＣ）上非游离性循环抗原（ＮＦ－ＣＡｇ）。结果表明，感染兔ＲＢＣ上存有ＮＦ－ＣＡｇ，而正常家兔ＲＢＣ上则无；ＧＭＲＴ，前者为２．８３±０．１７～１０２４．００±０．００，后者为１．００±０．００～３．３６±０．１５，两者有显著性差异（均Ｐ＜０．０１）：感染家兔后４～７周内，ＧＭＲＴ呈现低水平，８～９周时显著升高，１０周时均为高峰（ＧＭＲＴ达１０２４．００±０．００），１０周后，均明显下降，１８周时为低水平。结果表明．ＮＦ－ＣＡｇ检测优势仅在感染早期（１０周内）。本文报告感染兔ＲＢＣ上存有ＮＦ－ＣＡｇ，尚未见类似报道，为今后研究ＣＡｇ的新途径和新内容提供了依据，也为感染宿主体液内ＣＡｇ的归宿问题提供了重要依据。     

协同刺激分子B7-1/2对日本血吸虫感染小鼠Th1/Th2细胞因子表达水平的影响

目的：观察协同刺激分子B7-1／2(CD80／CD86)对日本血吸虫感染小鼠后Th1／Th2细胞因子水平的影响，探讨B7-1／2介导Thl／Th2，免疫偏移对控制血吸虫虫卵肉芽肿的作用。方法：取小鼠感染后6、8、10和12w的脾淋巴细胞用抗CD80mAb和抗CD86mAb处理后培养。72h，用ELISA双抗体夹心法测定培养上清中IFN-γ和IL-4的表达水平的动态变化。结果：抗CD80mAb和抗CD86mAb对IFN-γ的抑制作用不明显，但二者均能显著抑制IL-4的表达水平，尤其是抗CD86mAb对IL-4抑制作用非常显著。结论：通过干预B7：CD28协同刺激途径可以调节Thl／Th2细胞因子的表达水平，而且B7-2分子对Th2反应的影响作用大于B7—1分子。B7：CD28协同刺激途径可以调节Th1／Th2免疫偏移，为控制日本血吸虫肉芽肿病变提供了一种新途径。     

日本血吸虫感染小鼠肝肉芽肿与Th1／Th2细胞因子水平的动态变化

目的 观察小鼠感染日本血吸虫后急、慢性期肝肉芽肿病变与Th1/Th2细胞因子的动态变化,探讨Th1/Th2在肉芽肿形成及调节中的作用。方法 采用石蜡切片,HE染色后观察感染小鼠肉芽肿病变,用ELISA双抗夹心法测定小鼠感染后0、4、6、8和12周血清及脾淋巴细胞IL-2、IFNr和IL-4水平的动态变化。结果 小鼠感染后6周出现明显肉芽肿病变,8周肉芽肿反应达高峰;12周则明显缩小;感染小鼠血清及脾淋巴细胞的Th1细胞因子IL-2和IFNr在感染后4～6周开始上升,8周达高峰,随后下降;而Th2细胞因子IL-4在感染后8周时迅速上升且随感染时间延长而明显升高。结论 Th1细胞因子IL-2和IFNr与血吸虫卵肉芽肿的诱导和形成密切相关。而Th2细胞因子ILL-4可抑制Th1细胞因子在血吸虫病慢性期虫卵肉芽肿自发性免疫调节中起重要作用。     

弓形虫SAG1可溶性融合蛋白在大肠埃希菌中的表达及纯化

目的在大肠埃希菌中高效表达及纯化弓形虫SAG1抗原,为研制新型弓形虫病基因工程诊断试剂盒奠定基础。方法将重组pGEX-SAG1表达载体转化大肠埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RP菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达融合蛋白,并通过SDS-PAGE凝胶电泳分析表达产物的表达形式。通过降低培养温度和升高LB培养基的pH,诱导融合蛋白在上清中表达,表达产物以硫酸铵沉淀、GST亲和层析和Sephadex G-150凝胶过滤层析进行纯化。Western blot检测纯化融合蛋白的免疫反应性。结果37℃条件下,SAG1以融合蛋白(SAG1-GST)的形式在大肠埃希菌中高效表达,表达蛋白以包涵体形式存在。在27℃和升高LB培养基pH条件下,融合蛋白在上清中得到表达,经纯化后其SAG1可溶性蛋白纯度可达90%以上。Western blot分析纯化蛋白能被弓形虫感染者血清所识别。结论SAG1可溶性蛋白在大肠埃希菌中得到了表达,经纯化后能被弓形虫感染者血清所识别,可用于制备弓形虫感染诊断试剂盒。     

细胞信号转导抑制剂对日本血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫偏移的调控

目的　观察酪氨酸蛋白激酶 (TPK)、蛋白激酶 C(PKC)和磷酯酰肌醇 - 3-激酶 (PI- 3K)特异性抑制剂(Tyrphostin- 2 5、D- sphingosine和 Wortmannin)分别特异性抑制 TPK、PKC和 PI- 3K后 ,对小鼠脾 CD4 + T淋巴细胞经虫卵可溶性抗原 (SEA)诱生 IFN- γ和 IL- 4的表达水平及对 Th1/Th2免疫偏移的影响。　方法　分别于小鼠感染日本血吸虫后 0、4、8和 12周 ,用单克隆抗体分离脾 CD4 + T淋巴细胞体外培养 ,并进行细胞信号转导抑制试验 ,用 EL ISA夹心法和硝酸还原酶法分别测定小鼠脾 CD4 + T淋巴细胞体外培养上清 IFN-γ、IL - 4和一氧化氮 (NO)表达水平。　结果　Tyrphostin- 2 5对 IFN-γ和 IL - 4水平的抑制作用均非常显著 (P<0 .0 1) ,D- sphingosine主要影响 IL - 4的表达 (P<0 .0 1) ,而 Wortmannin则主要影响 IFN-γ的表达 (P<0 .0 1) ,对反映 Th1/Th2免疫平衡的 Th2分化指数分析表明 ,D-sphingosine可使 Th2免疫应答优势减弱 ,而 Wortmannin则可使 Th2免疫应答优势增强。对脾 CD4 + T淋巴细胞培养上清 NO水平检测结果显示 ,NO水平动态与 IFN-γ相一致 ,NO水平主要受 TPK抑制剂 Tyrphostin- 2 5和 PI- 3K抑制剂Wortmaninn的影响 ,结合该两种信号分子抑制剂对 Th1/Th2细胞因子表达水平的作用结果分析 ,