细胞膜表达的HLA-G诱导免疫耐受性树突状细胞的产生

为了探讨体外诱导免疫耐受性树突状细胞（dendritic cell,DC）产生的方法及其机制,利用人HLA-G1真核表达载体转染K562细胞并与DC共培养后,用流式细胞术检测DC表面CD80、CD86、ILT3和ILT4分子表达情况,同时采用氚胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法检测DC对T细胞功能的影响。结果表明,膜表达的HLA-G1分子与树突状细胞作用后,DC表面免疫共刺激分子CD80、CD86表达下调,而抑制性分子ILT3、ILT4表达上调。HLA-G1作用后DC异基因抗原诱导淋巴细胞增殖的活性明显下降。结论：HLA-G1分子可以在体外条件下,下调DC表面免疫共刺激分子水平,促进ILT3、ILT4表达,诱导免疫耐受性树突状细胞产生。     

反义寡核苷酸对人淋巴瘤细胞系Namalwa细胞血管内皮生长因子表达影响的体外研究

为了研究硫代磷酸化修饰的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,ASODN）对人淋巴瘤细胞系Namalwa细胞VEGF表达的影响,将终浓度分别为5、10、20μmol/L的VEGFASODN和错义序列与人淋巴瘤细胞系Namalwa细胞分别孵育24、48小时,采用RT-PCR检测VEGFmRNA的表达,采用链酶菌抗生素蛋白-过氧化酶免疫组织化学法（streptavidin/peroxidase,SP法）检测VEGF的表达。结果表明：VEGFASODN3个浓度组（5、10和20μmol/L）处理的Namalwa细胞VEGFmRNA的表达分别为1.38、0.96、0.57,错义序列组和对照组分别为1.79、1.84。当加入20μmol/LVEGFASODN作用48小时后,细胞内VEGF蛋白水平显著减少,而错义序列组Namalwa细胞VEGF蛋白水平未见明显改变。结论：VEGFASODN在体外能够抑制Namalwa细胞VEGF的表达。     

氟马替尼与伊马替尼治疗初发慢性髓性白血病慢性期患者的有效性及严重血液学不良反应发生率比较

目的比较氟马替尼与伊马替尼治疗初发慢性髓性白血病(CML)慢性期患者的治疗反应、结局以及严重血液学不良反应发生率。方法回顾性收集来自国内76个中心自2006年1月至2022年11月期间确诊、年龄≥18岁、确诊后6个月内接受氟马替尼或伊马替尼作为一线治疗且临床资料相对完整的CML慢性期病例。通过倾向性评分匹配(PSM)减少一线酪氨酸激酶抑制剂(TKI)药物选择偏倚, 比较两种TKI的治疗反应及结局。结果研究最终纳入4 833例接受伊马替尼(4 380例)和氟马替尼(453例)作为一线治疗的成人CML慢性期患者。伊马替尼治疗组中位随访54(IQR:31～85)个月, 7年完全细胞遗传学反应(CCyR)、主要分子学反应(MMR)、分子学反应4(MR4)和分子学反应4.5(MR4.5)累积获得率分别为95.2%、88.4%、78.3%和63.0%。7年无治疗失败生存(FFS)率、无进展生存(PFS)率和总生存(OS)率分别为71.8%、93.0%和96.9%。氟马替尼治疗组中位随访18(IQR:13～25)个月, 2年CCyR、MMR、MR4和MR4.5累积获得率分别为95.4%、86.5%、...     

抗Fas锤头状核酶阻抑小鼠急性粒-单核白血病细胞免疫逃逸的研究

为了研究抗Fas锤头状核酶对T细胞Fas表达及其凋亡的影响和探讨增强供者淋巴细胞输注时移植物抗白血病（GVL）效应的新策略，构建可有效切割Fas mRNA的锤头状核酶真核质粒，用电穿孔法将其导入小鼠CTL细胞株CTLL-2之后，借助RT—PCR和Western blot检测其Fas的表达，同时检测转染前后其胱冬酶-3（Caspase-3）活性和凋亡（Annexin V—FITC法）的改变，并用MTT法检测空白对照组、空载体转染组及pU6-RZ596转染组CTLL-2细胞的增殖情况和体外杀伤小鼠急性粒-单核白血病细胞（WEHI-3）的活性。结果表明：构建的U6嵌合型锤头状核酶RZ596在细胞内能有效切割Fas，明显降低小鼠活化CTLL-2的Fas水平，与高表达Fas配体的WEHI-3孵育后，其存活率和体外杀伤WEHI-3活性明显高于对照组。结论：抗Fas核酶能显著降低小鼠活化CTLL-2的Fas表达，使其免于WEHI-3的膜Fas配体经Fas途径所致的凋亡，并提高CTL对小鼠急性粒-单核白血病细胞的杀伤力，从而阻抑小鼠急性粒-单核白血病细胞的免疫逃逸。     

Foxp3转染小鼠CD4^＋CD25^-T细胞抑制树突状细胞功能

为了研究Foxp3基因表达与CD4^＋T细胞免疫活性的关系,用逆转录病毒转染Foxp3基因,在幼稚CD4^＋CD25^-T细胞内强制性表达FOXP3蛋白,进而研究转染后的CD4^＋CD25^-T细胞对树突状细胞的免疫共刺激分子和免疫功能的影响,并通过Transwell试验研究转染Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞对树突状细胞的作用是否依赖于细胞之间的直接接触。结果表明：通过逆转录病毒载体转染,成功建立了表达Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞模型,转染后1周Foxp3阳性表达的T细胞比例为38%。强制性表达Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞可以在体外发挥免疫抑制作用,可以诱导树突状细胞表面免疫共刺激分子CD80和CD86表达水平的下调。体外淋巴细胞增殖试验结果表明,Foxp3转染小鼠CD4^＋CD25^-T细胞可以抑制树突状细胞对异基因淋巴细胞的活化。结论：转染Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞对树突状细胞发挥的作用依赖于细胞之间的直接接触。     

FLAG方案治疗难治或复发急性白血病的临床研究

目的 探讨氟迭拉宾、中剂量阿糖胞苷联合粒细胞集落刺激因子（FLAG方案）治疗难治或复发急性白血病（AL）的疗效和安全性。方法 21例难治或复发急性白血病（难治13例，复发8例）患者（19例急性髓系白血病，2例急性淋巴细胞白血病）给予由中剂量阿糖胞苷组成的FLAG方案治疗，评估其疗效。结果 2个疗程治疗后，21例患者中12例达完全缓解（57％），3例部分缓解（14％），总有效率71％。难治和复发患者，完全缓解率分剐为53％和63％（P〉0．05）。1例异基因造血干细胞移植后复发的患者经FLAG方案化疗1疗程达完全缓解。骨髓抑制是最主要的不良反应，非血液学副作用较轻，无一例治疗相关死亡。结论 中剂量阿糖胞苷组成的FLAG方案治疗难治或复发AL有效，副作用可以耐受，治疗相关病死率低，为常规化疗无效和移植后复发的AL患者提供了治疗选择和接受造血干细胞移植的时机。     

生物发光成像技术及其在血液系统恶性肿瘤研究中的应用

生物发光成像技术作为近年来新兴的活体动物体内光学成像技术,以其操作简便、直观且灵敏等特点而成为研究小动物活体成像的理想工具,最近几年已被广泛应用于多种动物模犁中示踪肿瘤细胞、造血干细胞、淋巴细胞、病原菌和病毒.此技术能以直接实时观察标记的基因及细胞在活体动物体内的活动及反应,在国外已越来越广泛地应用于造血系统恶性肿瘤的研究中.本文就生物发光成像技术的成像原理、成像系统的基小结构和特点,以及该技术在血液系统恶性肿瘤研究中的应用作一综述.     

蛋白酶激活受体-1,2在小鼠急性移植物抗宿主病模型中的表达

目的 研究蛋白酶激活受体-1,2(PAR-1,2)在小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型中的表达.方法 建立小鼠异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后aGVHD模型,并用同基因HSCT小鼠作为对照.观察小鼠aGVHD表现;实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白印迹和免疫组织化学法检测移植小鼠各种组织中PAR-1,2在基因和蛋白水平的表达.结果 allo-HSCT小鼠在移植后18～28 d出现了典型的aGVHD临床和病理表现.PAR-1基因在allo-HSCT组小鼠的皮肤、肝脏和小肠组织中的相对表达量较对照组显著增高(皮肤:0.039±0.013和0.008±0.002,P<0.01;肝脏:0.165±0.084和0.017±0.006,P<0.01;小肠:0.215±0.109和0.016±0.009,P<0.01);PAR-2基因在allo-HSCT组小鼠的肝脏和小肠组织中表达较对照组增高(肝脏:0.010±0.003和0.003±0.002,P<0.01;小肠:0.006±0.002和0.003±0.002,P<0.05);PAR-1,2基因在其余器官组织中的表达与对照组比较,差异无统计学意义.PAR-1,2在蛋白水平的表达与基因表达的检测结果一致.免疫组织化学染色显示PAR-1,2主要在aGvHD靶器官的上皮细胞和内皮细胞中表达增强.结论 PAR-1,2表达增高很有可能参与异基因造血干细胞移植后aGVHD的病理生理过程.     

流式细胞术在造血及血液肿瘤中的应用

流式细胞术 (ＦＣＭ)是本世纪 70年代发展起来的一种对细胞物理或化学性质 ,如大小、内部结构、ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白质及抗原等 ,进行快速测量并分类收集的技术。 2 0世纪 80年代中后期 ,ＦＣＭ由基础转到临床应用 ,其在血液病的诊断、分型、预后判断和耐药机制研究等方面获得广泛的应用。1　ＦＣＭ与急性白血病ＡＬ主要依靠形态学分型 ,但由于细胞的异质性和阅片者的经验不同 ,很容易造成误差。近年来提出的ＭＩＣ分型 ,即综合运用形态学、免疫学及细胞遗传学检查进行分型 ,大大提高了分型的准确性。多参数免疫分型通过检测白血病细胞表面…