青蒿素衍生物DHA/ARTS诱导肾癌细胞系786-0发生铁死亡的机制

目的 探讨双氢青蒿素（DHA）/青蒿琥酯（ARTS）诱导肾癌细胞系786-0发生铁死亡的机制。方法 将DHA/ARTS刺激肾癌细胞系786-0，确定DHA/ARTS所诱导的肾癌细胞死亡即为铁死亡；利用RT-qPCR、Western blot等实验技术，观察NCOA4和FTH1在DHA/ARTS作用后的变化；两种不同siRNA敲减NCOA4后，观察DHA/ARTS对786-0作用的变化；构建pmCherry-EGFP-FTH1质粒和荧光显色，过表达该质粒，观察DHA/ARTS作用后荧光颜色及亮度变化，判断FTH1的自噬降解情况；敲减NCOA4后再转染pmCherry-GFP-FTH1质粒，检测DHA/ARTS作用后荧光颜色及亮度变化，探索NCOA4调节FTH1的自噬降解。 结果 786-0细胞系在DHA和ARTS作用后，从显微镜观察和CCK-8检测，显示细胞发生了明显死亡，并且随着药物浓度的增大存活细胞数越少。而且由DHA和ARTS所产生的致死作用可以被铁死亡抑制剂DFO和Fer-1所抑制。DHA和ARTS作用下786-0细胞内ROS的荧光强度明显高于对照组，差异有统计学意义（q=2.894，2.342；P＜0.05）。在铁死亡抑制剂DFO和Fer-1干预下，DHA+DFO组、DHA+ Fer-1组、ARTS+DFO组、ARTS+ Fer-1组786-0细胞内ROS的荧光强度明显低于DHA组和ARTS组（P＜0.05）。从自噬结果来看，DHA组和ARTS组的细胞自噬率明显高于对照组（P＜0.05），并且50μM的DHA和ARTS组细胞的自噬率明显高于20 μM的DHA和ARTS组（P＜0.05）。在siRNA-NCOA4沉默NCOA4表达后，细胞自噬率明显降低（P＜0.05）。 结论 青蒿素衍生物DHA和ARTS可诱导786-0肾癌细胞系发生铁死亡，其致铁死亡的发生是通过NCOA4介导FTH1特异性自噬降解而实现的。     

circVMA21靶向miR-665对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响北大核心

为探讨环状RNA VMA21(circular RNA VMA21,circVMA21)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及分子机制,用25 mmol/L葡萄糖处理肾小管上皮细胞株HK-2作为高葡萄糖(high glucose,HG)组,以5.5 mmol/L葡萄糖处理的细胞作为对照组。用qRT-PCR检测circVMA21和miR-665的表达水平;ELISA检测IL-6、TNF-α水平;FACS检测细胞凋亡情况;Western blotting检测蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因试验检测circVMA21和miR-665的靶向关系。结果显示,高糖诱导的肾小管上皮细胞中circVMA21表达水平降低,miR-665表达水平升高,IL-6、TNF-α水平升高,细胞凋亡率升高,B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)表达水平降低,Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达水平升高(P<0.05)。circVMA21过表达或抑制miR-665表达后,高糖诱导的肾小管上皮细胞中IL-6、TNF-α水平降低,细胞凋亡率降低,Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低(P<0.05)。circVMA21可靶向调控miR-665;miR-665过表达逆转了circVMA21过表达对高糖诱导的肾小管上皮细胞的作用。该研究提示,circVMA21过表达可通过靶向下调miR-665保护肾小管上皮细胞免受高糖诱导的损伤。