OCT4在肝细胞癌中的表达及其临床意义

背景与目的:近年关于肝癌干细胞问题备受关注,已发现部分干细胞标志物在肝细胞癌中表达并与预后有关,其中OCT4基因是POU转录因子的重要组员,是维持胚胎干细胞自我更新能力和分化潜能的关键因子。本研究旨在检测OCT4A在肝细胞癌中的表达情况,并探讨其与病理因素和预后的关系。方法:用半定量RT-PCR检测5株人肝癌细胞系和1株永生化肝细胞系,以及107例肝细胞癌组织、相应的癌旁肝组织和20例正常无肝硬化肝组织中OCT4A mRNA的表达,并结合肝癌临床病理因素及预后进行分析。结果:OCT4A mRNA在人肝癌细胞系SMMC-7721、BEL-7402、Hep-G2、MHCC-97L、MHCC-97H中均表达,而在永生化肝细胞系L-02中无表达。OCT4A mRNA在肝癌组织中表达率为72.0%,明显高于癌旁肝组织的30.8%(P<0.001),在正常无肝硬化肝组织中无表达。肝癌组织中OCT4A mRNA的表达与肿瘤大小、血管侵犯及TNM分期有关(P<0.05)。OCT4A mRNA阳性肝癌患者及阴性患者的3年总生存率分别为48.0%和83.7%,3年无瘤生存率分别为34.1%和58.0%,差异均有统计学意义(P<0...     

肝细胞癌中全长型脾酪氨酸激酶的表达及其预后价值

 【目的】 脾酪氨酸激酶 (SYK) 有两种蛋白异构体的存在,全长型SYK(L)和缩短型SYK(S),两者在恶性肿瘤中功能不同;肝癌中SYK(L)功能未见报道。本研究通过定制的SYK(L)特异性多克隆抗体,检测其在肝细胞癌组织中的表达,探讨SYK(L)表达与肝癌患者临床病理因素及预后关系。 【方法】 定制SYK(L)的特异性抗体,采用免疫组化方法检测162例肝癌患者的肿瘤组织及其癌旁肝组织SYK(L)蛋白的表达情况,分析其与临床病理因素及患者术后生存的关系。【结果】 定制SYK(L)抗体的特异性良好;肝癌组织中SYK(L)阳性率为64.8% (105/162),低于癌旁肝组织98.1% (159/162)(P < 0.001);SYK(L)表达与肿瘤大小、肿瘤分化程度、有无卫星结节和血管侵犯相关(P < 0.05)。肿瘤中SYK(L)蛋白阳性表达肝癌患者的术后无复发生存与总体生存明显长于阴性表达者(P < 0.001)。多因素Cox回归模型显示,SYK(L)表达状态是肝癌患者无复发生存期与总体生存期的独立危险因素之一(P < 0.001)。【结论】 肝癌组织中SYK(L)蛋白表达减低,与肿瘤分化、侵袭转移和预后相关;SYK(L)可作为判断肝癌患者预后的有效分子标志物。     

NADPH氧化酶DUOX1在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨NADPH氧化酶DUOX1在肝细胞癌（HCC）中的表达及其与临床病理指标及预后的关系。方法选取7株人HCC细胞系及1株人正常肝细胞系、30例正常肝组织及103例肝癌标本作为研究对象,采用RT-PCR的方法研究DUOX1mRNA的表达情况,结合临床病理指标及预后进行分析。结果DUOX1mRNA在MHCC-97H、MHCC-97L及BEL7402细胞系中表达,在HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Changliver和L02中无表达。30例正常肝组织中均无表达。在肝癌和癌旁肝组织中表达阳性率分别为53．4％（55／103）和14．5％（15／103）,差异有高度统计学意义（P〈0．01）。相关性统计分析提示肝癌组织中DUOXImRNA表达状态与性别、年龄、有无卫星结节及术前AFP水平相关。单因素分析提示影响肝癌术后总体生存率的因素为性别、年龄、肿瘤直径、有无卫星结节、有无门静脉癌栓、TNM分级以及DUOX1mRNA表达状态。多因素分析提示影响肝癌术后总体生存率的因素为肿瘤直径、有无门静脉癌栓及DUOX1mRNA表达状态。结论肝癌组织DUOX1mRNA表达状态是肝癌术后总体生存的独立预后因素,DUOX1基因可能与肝癌的发生发展有关。     

稳定表达RFX6基因肝癌细胞株的建立

目的:建立稳定表达RFX6基因的肝癌细胞株。方法:构建人源RFX6基因的重组质粒(pLNCX2-RFX6),pVSV-G质粒分别与pLNCX2-RFX6和空载体pLNCX2共转染至GP2-293细胞中进行包装,并用包装的逆转录病毒感染人肝癌QGY-7703细胞株,G418筛选出阳性克隆。RT-PCR和蛋白质印迹法验证稳定细胞株RFX6基因表达情况。采用Image J软件进行灰度值分析比较两株细胞系的差异。结果:在QGY-7703-pLNCX2-RFX6和QGY-7703-pLNCX2细胞中,RFX6/18SmRNA电泳条带灰度比值分别为5.044 0±1.384 0和0.357 2±0.407 9,QGY-7703-pLNCX2-RFX6细胞RFX6/18S是QGY-7703-pLNCX2细胞的14.1倍,差异有统计学意义,t=4.143,P<0.05;而在两细胞株中,RFX6/GAPDH的蛋白质印迹条带灰度值分别为1.391 4±0.141 3和0.127 8±0.037 3,QGY-7703-pLNCX2-RFX6细胞RFX6/GAPDH是QGY-7703-pLNCX2细胞的10.9倍,差异有统计学意义,t=14.966,P<0.05。结论:成功构建稳定表达RFX6基因的肝癌细胞株,为研究RFX6基因在肝癌细胞中的功能奠定了基础。