温阳活血方有效部位促进分化抑制因子1表达及抑制内皮细胞自噬性死亡的研究

目的 探讨温阳活血方对自噬损伤内皮细胞保护作用的物质基础以及对凋亡相关因子Activate Caspase-3、自噬相关蛋白泛素结合蛋白P62以及分化抑制因子1（ID1）表达的影响。方法 将温阳活血方不同极性提取物（石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和水提取物）作用于过氧化氢诱导的自噬性损伤内皮细胞模型，应用二苯基四氮唑溴盐（MTT）法观察内皮细胞的活性，用气相色谱-质谱联用技术（GS-MS）分析有效部位的化学成分，Western blot法检测有效部位对Activate Caspase-3、P62、ID1表达的影响。结果 温阳活血方石油醚部位可提高内皮细胞活性；GS-MS检测发现石油醚部位主要成分有4-（4-羟基-3-甲氧基苯基）-2-丁酮、3-丁烯基苯酞、Z-藁本内酯、E-藁本内酯、2，10-冰片二醇、Z，Z-9，12-亚油酸、6-姜酚、8-姜酚等；Western blot检测发现，石油醚部位能上调ID1、P62的表达，抑制Activate Caspase-3的表达。结论 石油醚部位是温阳活血方对抗内皮细胞自噬性死亡的活性部位，其通过降低内皮细胞内Activate Caspase-3的表达，提高P62和ID1的表达，以对抗内皮细胞的自噬性死亡。     

基于数据挖掘技术探讨针灸治疗稳定期COPD的用穴及配伍规律＊

目的 采用数据挖掘方法探索针灸治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期的临床用穴及配伍规律。方法 收集针灸治疗稳定期慢性阻塞性肺疾病相关现代文献，建立针灸治疗稳定期慢性阻塞性肺疾病处方数据库，对所收集的数据进行关联规则和聚类分析，找寻针灸治疗稳定期慢性阻塞性肺疾病的临床用穴规律以及配伍规律特点。结果 ①共纳入文献115篇，涉及51个穴位，其中在临床上最常用的腧穴有肺俞、足三里、肾俞、定喘、膻中等；②针灸治疗稳定期慢性阻塞性肺疾病穴位选择主要以临近肺脏的背腰部、胸腹部为主，常用的经脉也主要以足太阳膀胱经、任脉、足阳明胃经为主，特定穴的使用包括背俞穴、交会穴、五输穴、募穴、八会穴等；③在关联规则方面，“肺俞-足三里”以支持度54.78%排在第一，“肺俞-肾俞”“肺俞-定喘”分别排在二、三位；④聚类分析获得4个大类主要腧穴聚类群。结论 本研究发现针灸治疗稳定期慢性阻塞性肺疾病选穴多以局部选穴、辩证选穴为主，多选取膀胱经上的背俞穴，配伍方法以前后配穴法、上下配穴法为主，推荐以肺俞、肾俞、脾俞、足三里、定喘为主要选穴，结合辩证论治选取丰隆、大椎、风门、中府、列缺等穴位进行配伍使用。     

基于CiteSpace的针灸治疗慢性阻塞性肺疾病的研究图谱分析

目的:分析针灸治疗慢性阻塞性肺疾病的临床研究现状,探索研究热点和研究趋势,为针灸疗法辅助治疗COPD的科学研究和临床应用提供借鉴和参考。方法:通过计算机检索中国学术期刊全文数据库(CNKI)建库至2022年2月的相关临床研究文献,利用Microsoft Excel和CiteSpace软件对文献基本信息、关键词、时间线谱、突现词进行可视化分析。结果:(1)共检索符合纳入标准的文献764篇,年发文量呈整体上升趋势,但高质量的临床研究文献仍缺乏,大部分文献未报道基金支持;(2)纳入分析的1378名作者中,发文量≥5篇的共计18人,187所机构中发表文章数量最多的是安徽中医药大学第一附属医院;(3)被提及的频率最高的前五位关键词是慢性阻塞性肺疾病、穴位敷贴、肺功能、临床疗效观察、稳定期,突现度前五的关键词分别为中医药疗法、穴位疗法、针灸疗法、冬病夏治、圣乔治呼吸问卷,急性加重期、痰热壅肺型、穴位按摩、炎症因子为近五年出现突现词。结论:穴位敷贴对COPD患者肺功能的改善是COPD针灸疗法的研究热点,而以COPD急性加重期痰热壅肺型患者为主体,对其炎症因子机制的研究是未来趋势。在今后的研究中应该加...     

蠲脉Ⅰ号化痰消食拆方促进蛋白激酶B表达抑制内皮细胞自噬性死亡

【目的】探讨蠲脉Ⅰ号化痰消食拆方(简称化痰消食方)对自噬损伤内皮细胞保护作用的物质基础,以及对蛋白激酶B(PKB)和自噬相关的微管相关蛋白LC3、泛素结合蛋白P62表达的影响。【方法】采用递增极性溶剂法分别分离提取化痰消食方(成分为半夏、茯苓、枳实、白术、山楂、神曲)的石油醚、乙酸乙酯、乙醇以及水部位。将4个部位的提取物分别作用于过氧化氢诱导的自噬性损伤内皮细胞,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察内皮细胞的活性,采用GC-MS(gas chromatography-mass spectrometry)分析有效部位的化学成分,并采用Western blot法观察有效部位对PKB表达及自噬的影响。【结果】石油醚部位为化痰消食方保护内皮细胞自噬性损伤的活性部位;GS-MS检测发现石油醚部位主要成分为多种脂肪酸;Western blot分析结果显示:石油醚部位能上调PKB表达、下调LC3表达,抑制LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化,并使细胞内P62表达水平升高。【结论】石油醚部位多种脂肪酸为化痰消食方有效部位,能促进细胞内PKB表达,抑制细胞内的自噬水平,从而拮抗内皮细胞的自噬性死亡。     

自噬基因Beclin1启动子细胞自噬模型的建立

【目的】构建自噬基因Beclin1启动子报告基因细胞自噬模型,为筛选出以Beclin1为靶标的中药提供新的细胞模型。【方法】采用瞬时转染双荧光素酶报告基因测定法,确定最佳转染浓度、时间等条件,及Beclin1基因启动子转录活性细胞自噬模型的建立和验证,观察血清饥饿、过氧化氢氧化损伤及自噬激活剂雷帕霉素3种自噬刺激因素对Beclin1基因启动子转录活性PC12细胞自噬模型的影响。【结果】血清饥饿诱导12 h,Beclin1基因启动子转录活性是体积分数10%血清组的1.8倍,而血清饥饿诱导18、24 h与诱导12 h比较其转录活性无明显变化;300μmol/L过氧化氢诱导9 h,Beclin1基因启动子转录活性是0μmol/L过氧化氢组的1.3倍;雷帕霉素在浓度0.1、1 nmol/L可上调Beclin1基因启动子转录活性,并呈浓度依赖性,而5 nmol/L及更高浓度的雷帕霉素可下调Beclin1基因启动子转录活性。【结论】成功建立用Beclin1基因启动子报告基因检测Beclin1基因启动子转录活性特异性的细胞发生自噬模型,血清饥饿、过氧化氢、自噬激活剂雷帕霉素3种自噬刺激因素可诱导Beclin1基因启动子的转录活性。