蛋白酪氨酸磷酸酶1B的研究进展

蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）是2型糖尿病相关蛋白，被认为是治疗2型糖尿病一个重要的潜在靶点。因此下面对国内外有关PTP1B的研究作一综述。     

内质网应激介导高脂及棕榈酸致骨骼肌胰岛素抵抗及非诺贝特的干预机制初探

目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)介导高脂及棕榈酸致骨骼肌胰岛素抵抗及非诺贝特(fenofibrate,FF)的干预机制。方法♂SD大鼠随机分为标准饮食组(SCD)、高脂饮食组(HFD)及治疗组(HFD+FF)。高脂组和治疗组先分别给予高脂饮食20周,高脂组继续给予高脂饮食8周,治疗组给予非诺贝特(30 mg·kg-1·d-1)灌胃治疗8周。分析大鼠胰岛素抵抗的改善作用、骨骼肌葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子GADD153(CHOP)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因的表达。将骨骼肌细胞C2C12分为正常对照组(NC组)、模型组(棕榈酸组,PA)、阳性对照药组(衣霉素组,TM)、治疗组(棕榈酸+非诺贝特酸,PA+FA),分别检测GRP78、CHOP、Akt和pAkt的表达。结果与SCD组相比,HFD组大鼠体重和血脂水平明显增高,出现明显的胰岛素抵抗,GRP78和CHOP基因表达水平均明显上调;与HFD组相比,HFD+FF组上述指标均出现明显改善。与NC组相比,PA组GRP78和CHOP基因表达明显增加,p-Akt明显下调;与PA组相比,PA+FA组GRP78和CHOP基因表达明显降低,p-Akt明显上调。结论非诺贝特有改善骨骼肌细胞胰岛素抵抗的作用,这可能与其降低ERS中CHOP和GRP78的表达有关。     

百蕊草的化学成分研究

目的　研究百蕊草 Thesium chinense的化学成分。方法　采用反复柱色谱和制备性 HPL C百蕊草的醋酸乙酯萃取物中分离得到 5种化合物 ,通过理化和光谱分析鉴定其化学结构 ,并研究其抗氧化活性。结果　自百蕊草的醋酸乙酯萃取物中分离得到 5种黄酮苷类化合物 ,分别鉴定为 :山柰素 - 3- O-葡萄糖苷 (kaem pferol- 3- O- glucoside, ) ,柚皮素 - 4 - O-葡萄糖苷 (naringenin- 4 - O- glucoside, ) ,芹菜素 - 7- O-葡萄糖苷 (apigenin- 7- O- glucoside, ) ,木犀草素 - 7- O-葡萄糖苷 (luteolin- 7- O- glucoside, ) ,芸香苷 (rutinoside, )。抗氧化实验结果表明 ,化合物 的抗氧化作用最强 ,3个浓度中以 1× 10 - 4mol/ L 作用最明显。结论　化合物 具有较强的抗氧化作用。     

人PTP1B基因cDNA全长的克隆和原核系统表达

目的构建人蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)基因cD-NA全长的原核表达质粒(pET-28a(+)-hPTP1B)并在大肠杆菌中高效表达。方法取2型糖尿病人(BMI>28kg.m-2)的淋巴细胞提取总RNA,RT-PCR后的扩增产物回收构建克隆载体pMD-hPTP1B,测序后设计带酶切位点BamHⅠ和EcoRⅠ的引物,PCR后酶切连入pET-28a(+)中,转化DE3,IPTG诱导表达,SDS-PAGE后用Westernblot检测其特异表达,并进一步对rhPTP1B诱导表达时IPTG的浓度、时间和温度等条件进行了优化。结果测序证实所得的hPTP1BcDNA序列与其在GenBank中的序列一致,重组质粒pET-28a(+)-hPTP1B的双酶切结果与预期大小完全一致,IPTG诱导后高效表达的蛋白质是其不溶性的包涵体形式。IPTG诱导的最佳浓度是0.05mmol.L-1,时间为5h,温度为37℃。结论成功克隆了人PTP1B基因,构建了相应的原核表达载体并对原核体系诱导表达的条件进行了优化,使其能在DE3中高效表达,为筛选高特异的小分子抑制剂和制备相应的单克隆抗体打下坚实的基础。     

二甲双胍对2型糖尿病大鼠肝脏JNK表达的影响

目的 了解二甲双胍对伴胰岛素抵抗(IR)的2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏JNK表达的影响.方法 将伴IR的T2DM大鼠随机分为对照组、模型组和二甲双胍组,治疗6周后留取肝脏标本.逆转录聚合酶链反应测定JNK mRNA在肝脏中的表达.免疫组化对肝脏进行HE染色,并对JNK、p-JNK进行半定量分析.结果 ① JNK mRNA,JNK、p-JNK蛋白表达量以及p-JNK/JNK比值,模型组均显著高于对照组(P<0.05);二甲双胍组较模型组下降,差异有统计学意义(P<0.05); ②细胞学检查显示:模型组肝细胞肿胀、脂肪变性,存在炎细胞浸润,部分出现点、灶状坏死.二甲双胍组肝细胞病理改变明显改善.结论 二甲双胍可能通过减少JNK、p-JNK表达来改善2型糖尿病引起的肝脏损害.     

白藜芦醇减少肥胖小鼠肝细胞焦亡的初步探讨

目的 研究白藜芦醇（resveratrol,RES）减少肥胖小鼠细胞焦亡致肝损伤的机制。方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为标准(SCD)、高脂（HFD）及高脂+白藜芦醇（HFD+RES）饮食3组，标准或高脂饮食喂养，HFD+RES小鼠在高脂饮食的同时胃饲白藜芦醇（400 mg/（kg·d）），持续22 w。测定体重，分析血脂和interleukin-1 beta (IL-1β)、interleukin-18(IL-18)水平，HE染色检测肝脏组织的形态学变化，免疫组化检测去乙酰化酶sirtuin-1(SIRT1)、P66SHC、NLR family pyrin domain containing 3 (NLRP3)的定位和表达，实时荧光定量RT-PCR和Western blot分析SIRT1、P66SHC(66kuSrchomology2domain-containingprotein)、NLRP3、cysteinylaspartatespecificproteinase-1(caspase-1)、gasdermin-D (GSDMD)、interleukin-1 beta (IL...     

内质网应激和各型糖尿病关系的研究进展

糖尿病是一组以慢性血糖水平增高为特征的异质性代谢性疾病,主要包括1型、2型、妊娠糖尿病和其他类型糖尿病,伴随多种组织的并发症发生,其患病率在逐年升高。近年来内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)在各型糖尿病发病中的作用正日益受到重视。本文重点阐述ERS在各型糖尿病中的地位。     

重组人 PTP1B 的原核高效表达及TFLC的体外抑制剂实验

 目的 高效诱导表达并纯化具有活性的重组 PTP1B 融合蛋白（rhPTP1B）,进行酶活性及抑制剂的实验。方法 重组体 pGEX-hPTP1B 转化 E.coliDH5α,诱导表达 rhPTP1B 并优化条件后,超声取细胞裂解上清液经 GST 亲和层析柱纯化后,利用 rhPTP1B 水解特异性底物 4-硝基苯基磷酸二钠盐（pNPP-Na2）的磷酸基团而产生颜色反应来测定 rhPTP1B 活性,并分析其与 rhPTP1B 浓度、底物浓度及反应温度的关系,钒酸钠（Na3VO4）抑制类型的研究,老鹰茶总黄酮（TFLC）对 rhPTP1B 的抑制性作用和浓度依赖关系。 结果 rhPTP1B 表达的最适条件是在 34 ℃ 和 2.0 mmol/L IPTG 下诱导表达 10 h,可被 GST 亲和层析法分离纯化;其活性随酶浓度及底物浓度的增加而增加,35 ℃ 时 rhPTP1B 的活性最大;钒酸钠的作用机制可能为非竞争性抑制作用;TFLC 对 rhPTP1B 有明显的抑制作用。结论 诱导表达纯化的 rhPTP1B 融合蛋白可用于抑制剂的研究,TFLC 对 rhPTP1B 的强抑制作用可能是其降低糖尿病大鼠血糖浓度的机制之一。