RAB5A正义表达载体对两种人肺腺癌细胞系粘附基底膜成份能力的影响

目的　RAB5A基因过表达与人肺腺癌细胞系Anip 973的高转移性相关 ,进一步确认该基因在人低转移肺腺癌细胞系SPC a1和人低分化肺腺癌细胞系GLC 82中的作用。方法　采用癌细胞粘附基底膜成分的测定方法 ,分析RAB5A正义真核表达载体转染后的SPC a1、GLC 82两种肺腺癌细胞系的侵袭能力的改变。结果　RAB5A正义表达载体PcDNA3 .1 RAB5A转染的SPC a1较未转染细胞与基底膜成分粘附能力明显增强 ,t检验P <0 0 1;GLC 82细胞的侵袭能力作用不明显。结论　RAB5A在侵袭转移表型形成中发挥一定的作用     

RAB5A对人肺腺癌细胞系侵袭转移作用的研究

目的：探讨RAB5A基因在人肺腺癌细胞系侵袭和转移中的作用。方法：采用体外重建基底膜侵袭实验和癌细胞粘附能力；癌细胞趋化性运动能力、癌细胞分泌明胶酶的能力及活性的测定，分析RAB5A正义真核表达载体转染后的AGZY83－a和反义RNA转染后的Anip973细胞的侵袭、转移能力的改变。结果：RAB5A正义表达载体PcDNA3.1-RAB5A转染的AGZY83－a重建基底膜侵袭能力明显增强，统计学意义显著（P＜0．0005），细胞趋化性运动能力显著增高（P＜0．0005），对基底膜成分的粘附能力增大（P＜0．05），以及明胶酶分泌及活性增强等一系列趋向Anip973的变化。PcDNA3-AntiRAB5A反义RNA表达载体对Anip973重建基底膜侵袭力明显下降（P＜0．0025），趋化性运动能力显著降低（P＜0．005），对基底膜成分粘附能力降低（P＜0．05），以及明胶酶分泌减少等一系列趋向AGZY83－a的变化。结论：RAB5A在肺腺癌侵袭轩移表型形成中发挥重要的作用。反义RNA可阻断RAB5A基因的翻译过程。     

一个中国汉族家族性IgA肾病家系致病基因的排除性定位

目的 对一个中国汉族家族性IgA肾病（FIgAN）家系进行遗传连锁分析,并对目前国内外已知的5个致病位点进行排除性定位,从而初步定位该家系致病基因的染色体位点。 方法 判断FIgAN的遗传方式。采集家系成员外周血提取基因组DNA。在已报道的FIgAN致病区域（2q36、3p23-24、4q26-31、6q22-23、17q12-22）选取微卫星遗传标记（STR）,进行基因组扫描,应用两点间连锁分析方法对基因分型数据进行分析。结果 该FIgAN家系的遗传方式为常染色体显性遗传。对该家系5个已知致病区域内计26个STR的两点间连锁分析结果显示,最大优势对数（LOD）值为0.39（D17S1868）,不支持与上述5个染色体区域的连锁关系。 结论 该家系致病基因所在染色体区域非目前已报道的5个FIgAN致病位点,提示FIgAN存在新的致病区域,并进一步证明了该病的遗传异质性。     

先天性核性白内障家系致病基因的定位与候选基因突变检测

目的 对中国一常染色体显性遗传性先天性核性白内障家系进行致病基因的定位与候选基因突变检测.方法 实验研究.采集家系成员的外周静脉血,提取基因组DNA.用约400个中密度微卫星标记进行基因扫描,平均遗传距离10厘摩(cM).利用LINKAGE软件包进行连锁分析.在阳性定位区域内选取更为精细的微卫星标记进行精细定位.利用CYRILLIC软件进行单体型分析,确定候选基因所在染色体区域.候选基因直接测序检测基因突变.结果两点间连锁分析在微卫星标记D2S325处获得最大对数优势计分(LOD)值Zmax=2.29(θmax=0.00).精细定位和单体型分析将致病基因定位于微卫星标记D2S117和D2S2382之间,遗传距离约19.04 cM,染色体位置为2q32.3-q35.候选基因直接测序发现CRYGC基因第3外显子第470碱基一个G→A的点突变.结论本研究将我国一个先天性核性白内障家系的致病基因定位于2号染色体2q32.3-q35约19.04cM区域内,并在CRYGC基因发现一个新的点突变与此家系共分离.(中华眼科杂志,2009,45:234-238)     

应用体外实验对与人肺癌转移相关基因的研究

目的:应用体外实验研究RAB5A基因过表达与人非小细胞肺癌转移相关,进一步确认该基因在人肺腺癌细胞系侵袭和转移中的作用以期待此研究能对肺癌转移的预防进而减少对肺癌患者造成的肺功能损害及为有效选择有利患者生活质量的治疗手段提供理论基础。方法:采用体外重建基底膜侵袭实验和肿瘤细胞黏附能力的测定,分析RAB5A正义真核表达载体转染后的AGZY83-a和反义RNA转染后的A-nip973细胞的侵袭、转移能力的改变。结果:RAB5A正义表达载体PcDNA3.1-RAB5A转染的AGZY83-a重建基底膜侵袭能力明显增强,t检验P<0.005,差异有显著性意义;对基底膜成分的黏附能力增大;t检验P<0.05。PcDNA3-AntiRAB5A反义RNA表达载体对Anip973重建基底膜侵袭力明显下降,P<0.001;对基底膜成分黏附能力降低。结论:RAB5A在侵袭转移表型形成中发挥重要的作用。反义RNA可阻断RAB5A基因的翻译过程,相关体外试验研究结果为有效治疗肿瘤转移奠定了基础。     

应用重组基底膜侵袭技术对人肺腺癌细胞侵袭能力的研究

目的　研究RAB5A基因转染后对肺腺癌侵袭能力的影响。方法　采用重组基底膜侵袭实验 ,观察转染前后的细胞系对基底膜侵袭能力的改变。结果　转染pcDNA3.1 RAB5A正义表达载体的AGZY83 a细胞系基底膜侵袭能力增强 ,转染pcDNA3 AntiRAB5A反义RNA重组质粒的Anip973细胞系侵袭能力明显减弱。结论　RAB5A在人非小细胞肺癌的侵袭及转移特性的形成中具有重要的作用 ,RAB5A的反义分子能够有效地阻断该基因表达的翻译过程 ,在细胞内发挥预期作用。     

RAB5A反义RNA对人肺腺癌细胞系侵袭转移影响的体外研究

目的　已知RAB5A基因过表达与人非小细胞肺癌恶性表型形成相关,本研究在此基础上进一步探 讨该基因过表达在人肺腺癌恶性演进中的作用。　方法　将RAB5A反义表达载体稳定转染入高浸润人肺腺癌细 胞系L18和高转移人肺腺癌细胞系95D中,采用重组基底膜侵袭、与基底膜成分黏附能力测定、趋化运动能力测 定、明胶酶分泌与活性检测等体外实验方法观察转染前后细胞生物学特性的改变。　结果　RAB5A反义RNA稳 定转染后L18细胞趋化运动和侵袭基底膜能力显著降低(P<0.05),明胶酶活性检测发现转染后细胞MMP 2的分 泌能力明显减弱;稳定转染后95D细胞趋化运动和侵袭基膜能力显著降低(P<0.05)。　结论　体外实验显示, RAB5A基因过表达对肿瘤细胞的趋化运动能力和侵袭重组基底膜能力起重要作用,进一步提示RAB5A基因过表 达在人肺腺癌的侵袭转移过程中发挥一定作用。     

东北地区7个少数民族群体中ApoE基因单核苷酸多态性的研究

目的研究东北地区少数民族群体ApoE基因4个单核苷酸多态性的特点及群体之间的差异。方法应用PCR-RFLP方法对东北地区7个少数民族群体共216个健康个体该基因中4个SNP位点进行检测。结果2440位点在所有群体中都存在多态性,且各民族间存在差异;73、2907、3106位点不存在多态性。结论东北少数民族中73、2907、3106位点不具有多态性,2440位点杂合度为0．177,与国外文献报道及国际SNP数据库比较有很大的差异。     

应用体外实验对与人肺癌转移相关基因的研究

目的：应用体外实验研究RAB5A基因过表达与人非小细胞肺癌转移相关，进一步确认该基因在人肺腺癌细胞系侵袭和转移中的作用以期待此研究能对肺癌转移的预防进而减少对肺癌患者造成的肺功能损害及为有效选择有利患者生活质量的治疗手段提供理论基础。方法：采用体外重建基底膜侵袭实验和肿瘤细胞黏附能力的测定，分析RAB5A正义真核表达载体转染后的AGZY83-a和反义RNA转染后的Anip973细胞的侵袭、转移能力的改变。结果：RAB5A正义表达载体PcDNA3．1-RAB5A转染的AGZY83q重建基底膜侵袭能力明显增强，t检验P&;lt;0.005，差异有显著性意义；对基底膜成分的黏附能力增大；f检验P&;lt;0.05。PcDNA3-AntiRABSA反义RNA表达载体对Anip973重建基底膜侵袭力明显下降，P&;lt;0.001；对基底膜成分黏附能力降低。结论：RAB5A在侵袭转移表型形成中发挥重要的作用。反义RNA可阻断RAB5A基因的翻译过程，相关体外试验研究结果为有效治疗肿瘤转移奠定了基础。     

一个遗传性脊髓小脑共济失调大家系的连锁分析

目的检测一遗传性脊髓小脑共济失调家系的遗传缺陷基础。方法收集湖南地区一遗传性脊髓小脑共济失调家系，对患者的临床表型进行评估。采集家系成员48人（包括患者8人）外周静脉血提取基因组DNA，对候选染色体区域选取合适的微卫星标记，采用多重PCR和电泳方法进行基因组扫描，数据经Linkage软件包进行连锁分析以对该家系进行基因定位，以确定疾病相关基因所在的染色体区域。结果两点间连锁分析结果显示，该家系在脊髓小脑共济失调遗带瘟童SCAl、SCA27SCA3、SCA57SCA67SCA77SCA87SCAl07SCAl，？SCAl27SCAl37SCAl47SCAl57SCAl67SCAl7、SCA20、SCA27、SCA28、SCA31、DRPLA处的最大LOD值仅为0．49，提示该家系致病基因与这些位点无连锁关系。结论排除该家系与目前已知的20个常染色体显性小脑共济失调相关染色体位点的连锁关系，提示可能存在其它未知的SCAs位点。