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目的 探讨睫状神经营养因子(CNTF)联合视黄酸(RA)诱导成肌细胞类神经分化的方法以
及该诱导过程与神经元限制性沉默因子(REST)相关性。方法 以CNTF 诱导C2C12 去分化,再以RA 诱导
C2C12 类神经分化。通过细胞形态学、细胞免疫荧光、流式细胞术、Western blot 等技术对去分化及类神经
分化的细胞进行鉴定及相关分析,比较细胞类神经分化前后REST 表达变化。结果 诱导后细胞聚集生长,呈
典型的神经球样。细胞免疫荧光染色显示神经球能够被神经特异性标志物NSE、Sox1、GFAP 标记,神经球
离散为单个细胞接种后生长状态良好,神经干细胞标志物(nestin)呈阳性表达。Western blot 结果显示CNTF
去分化诱导后成肌细胞分化相关蛋白Myogenin、P21 表达降低,类神经分化后NSE、Sox1、GFAP 表达增多,
且成肌细胞特异性标志物Desmin 及REST 表达下降。流式细胞仪分析表面标志物NSE 显示诱导组与对照组
比较细胞有差异,且诱导组特异性阳性细胞率达84% 左右。结论 CNTF 联合RA 可诱导成肌细胞类神经分化,
且该诱导过程可能与REST 表达降低相关。 相似文献
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目的 探讨小分子化合物组合(Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)类神经分化的可行性。方法 全骨髓贴壁法分离大鼠BMSCs,流式细胞仪鉴定细胞。培养细胞至第3代,以含有Forskolin的神经元培养基预诱导1?d,再以含有Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021的神经元培养基正式诱导3?d。以神经元培养基为对照组。通过观察细胞形态、免疫荧光检测、Western blotting技术对类神经分化细胞进行鉴定。结果 大鼠BMSCs以梭形细胞为主,可见长短不一的突起;经流式细胞仪鉴定,CD90、CD105表达呈阳性,而CD34和CD45表达呈阴性。诱导后,细胞有神经样形态改变,免疫荧光检测到神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)阳性表达,诱导3?d后Western blotting显示实验诱导组与对照组比较,NSE、Nestin和SOX1表达增多(P?<0.05)。结论 小分子化合物组合(Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021)可诱导BMSCs类神经分化。 相似文献
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