原发性胆汁性肝硬化发病相关危险因素研究进展

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种原因不明的自身免疫性肝病,多见于中年女性。在已知的诸多发病危险因素中,人口学因素、环境因素和遗传因素以及家族史、吸烟史和尿路感染等一直为人们所重视。近年来,随着研究的深入,特别是全基因组关联研究（GWAS）技术的应用,发现了一些可能导致该病的危险基因,如人类白细胞抗原基因、白细胞介素（IL）-12和X染色体单体等。今后,还需要大量的样本和GWAS数据来验证这一说法,以期从基因水平上阐述该病的发病机制。     

胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型ScFv的制备

目的 制备胃癌单抗MGd1的单链可变区片段（single chain variable fragment,ScFv),为胃癌体内诊疗研究提供候选靶向载体分子。方法 从MGd1杂交瘤分离mRNA,RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因（VH和VLDNA）,二者经linkerDNA连接形成ScFvDNA,将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7感染后,获得重组噬菌体抗体ScFv,以高表达MGd1结合抗原的细胞株KATOⅢ对重组噬菌体抗体ScFv进行峡谷轮筛选后;随机挑取克隆经ELISA筛选MGd1ScFv单克隆,并对其结合抗原的能力进行鉴定。结果 VH、VL和ScFvDNA分别约为340、320和750bp,经两轮亲和筛选后,在随机筛检的30个克隆中得到12个噬菌体呈现型MGd1ScFv单克隆,其中结合抗原能力强的克隆有5个。结论 用噬菌体呈现技术成功地获得了单抗MGd1的ScFv,为拓展该抗体的应用范围奠定了基础。     

缺氧诱导因子HIF-1α在胃癌细胞系中的表达和意义

目的研究缺氧诱导因子HIF-1α在人多种胃癌细胞系中的表达及意义。方法分别利用RTPCR和Western blot的方法检测多种胃癌细胞系中HIF—1α的表达水平。结果常氧条件下，在永生化的胃粘膜上皮细胞系GES及多种胃癌细胞系(包括耐药细胞)中均能检测到HIF-1α mRNA的表达，其表达水平无明显差异；对部分细胞系中HIF-1α蛋白表达进行检测，同样发现常氧时即有HIF-1α的表达，但表达水平明显不同。结论常氧时在多种胃癌细胞系及永生化的胃粘膜上皮细胞系中均有HIF-1α的表达；在胃癌细胞系中，HIF-1α的调节可能主要在翻译水平而非转录水平；HIF-1α在常氧时胃癌细胞系的异常表达，提示除缺氧刺激外，非缺氧因素可能也在胃癌的发生、发展中发挥了一定的作用。     

人源性胃癌抗体IgG1Fab噬菌体表面展示文库的构建

目的　利用噬菌体表面展示技术 ,构建人源性胃癌抗体 Ig G1Fab噬菌体表面展示文库 .方法　从胃癌手术患者胃一级站淋巴结中提取总 RNA,反转录成 c DNA后 ,用PCR扩增人 Ig G1Fd段及κ轻链 ,并克隆至噬菌粒载体p COMB3中 ,转化宿主菌株 XL 1- Blue,以辅助噬菌体M13K0 7超感染噬菌粒文库 ,构建成人源性胃癌抗体 Ig G1Fab噬菌体表面展示文库 .结果　得到一个含克隆数为 1.2× 10 6 ,实际滴度约为 2 .5 6× 10 1 5 pfu· L- 1的 Ig G1Fab片段的噬菌体表面展示文库 .结论　Ig G1Fab片段的噬菌体表面展示文库的成功构建 ,为下一步利用亲和富集筛选技术 ,获得具有胃癌表面抗原结合活性的融合抗体及可溶性抗体奠定了基础     

消化内科临床教学的几点体会

消化内科实习是内科临床教学实践中的一个重要组成部分,探讨消化内科的临床教学,对于加强实习学员基本技能的训练,开拓临床思维能力,培养良好的职业道德,指导学员顺利完成实习工作具有重要意义。本文针对消化内科实习教学常见的问题,就如何加强教学管理,提高教学质量,提出了相关解决方法和一些实践经验。     

COX-2抑制剂对成纤维细胞的增殖和细胞外基质产生的影响

目的: 探讨COX-2抑制剂对成纤维细胞增殖、活力及细胞外基质产生的影响,研究COX-2抑制剂抗肝纤维化的机制. 方法:采用体外培养的NIH/3T3成纤维细胞作为肝星状细胞(HSC)的替代模型,常规培养. COX-2特异性抑制剂塞来昔布(celecoxib)(终浓度为5,10,20,40 μmol/L)加入细胞中,用MTT法检测塞来昔布对NIH/3T3细胞的增殖,活力的影响;用放射免疫法测定培养上清细胞外基质(HA, LN, PCIII, IVC)的生成;用Western blot法检测NIH/3T3细胞上的COX-2的蛋白表达. 结果:NIH/3T3细胞的COX-2蛋白表达阳性,是塞来昔布作用靶点;塞来昔布在所用浓度下对细胞无明显毒性,但可显著抑制细胞增殖,呈浓度依赖性(P<0.01), 抑制HA及LN的合成. 5~40 μmoL/L对LN的抑制率分别为19.74%, 18.16%, 22.05%和24.65%;20~40 μmoL/L对HA的抑制率分别为17.53%和24.24%, HA及LN的含量与对照组比较差异显著(P<0.05). 结论:塞来昔布可显著抑制NIH/3T3细胞增殖和细胞外HA及LN的合成,在体外具有一定的抗肝纤维化作用.     

胃癌单克隆抗体MG7的噬菌体呈现型抗独特型单链抗体ScFv的制备

目的 获得胃癌单克隆抗体（简称单抗）MG7的噬菌体呈现型抗独特型单链抗体ScFv（抗－Id ScFv），为研制MG7的抗－Id ScFv重组胃癌瘤苗奠定基础。方法 以MG7单抗与匙孔血蓝蛋白（KLH）的交联物免疫Balb/c小鼠，取脾分离mRNA。以逆转录聚合酶链反应技术分别扩增抗体重、轻链可变区基因（VH和VL），经linkerDNA连接ScFv基因片段。将ScFv DNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1。在辅助噬菌体M13K07的作用下，获得重组噬菌体抗体ScFv。以单抗MG7对重组噬菌体抗ScFv进行四轮筛选后，随机挑取克隆，经噬菌体ELISA筛选抗－IdScFv单克隆，并对其所属抗－Id类型进行初步鉴定。结果 VH、VL和ScFvDNA分析约为340、320和750bp。经富集后，在随机筛检的60个克隆中得到24个噬菌体呈现型抗－IdScFv单克隆，阳性率为40％。在24个克隆中，有5个为β或γ型抗－IdScFv。结论 用噬菌体抗体技术能够成功地获得单抗MG7的抗－IdScFv，为开展用抗－IdScFv防治胃癌的研究创造了条件。     

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化的微量蛋白制备抗血清

目的　以SDS PAGE纯化的微量蛋白制备抗人层粘连蛋白受体前体蛋白 (LRP)的血清。方法　以SDS PAGE分离纯化原核表达的人LRP与 6×组氨酸的融合蛋白 ,切下并粉碎融合蛋白所在凝胶块。将含 10 μg融合蛋白的凝胶颗粒与弗氏佐剂混匀后 ,免疫BALB/c小鼠。以Westernblot检测所获抗血清的滴度和特异性。结果　以胃癌细胞总蛋白为靶抗原时 ,Westernblot显示 ,所获抗血清仅识别 1条Mr 约 4 2 0 0 0的蛋白带 ,将抗血清做 1∶2 0 0 0稀释后 ,仍能清晰地显示其靶抗原所在位置。结论　以聚丙烯酰胺凝胶颗粒为载体 ,用微量蛋白即可成功地制备抗血清     

吸烟与原发性胆汁性肝硬化发病的关系研究

目的探讨吸烟与原发性胆汁性肝硬化发病的关系。方法通过问卷调查收集资料,采用性别和年龄1:2配对的病例对照研究,分析2010年至2014年期间在我院住院的109例原发性胆汁性肝硬化患者和218名健康志愿者吸烟情况。结果原发性胆汁性肝硬化患者吸烟总量为(32393.8,134137.5)支,显著大于健康人组[(22356.3,104025.0)支,P0.01];病例组开始吸烟年龄、吸烟总时间分别为(19.5±2.7)岁和(24.3±8.1)年,平均每日吸烟为(5.0,15.0)支,健康人组开始吸烟年龄、吸烟总时间分别为(23.7±6.4)岁和(23.1±9.3)年,平均每日吸烟支数为(2.5,11.3)支,差异均无统计学意义;两组间吸烟史、吸烟暴露史、开始暴露吸烟年龄、暴露吸烟总时间、平均每日暴露吸烟支数、暴露吸烟总量、主动和被动吸烟总量差异均无统计学意义。结论吸烟可能为原发性胆汁性肝硬化发病的一个重要危险因素,控制吸烟量可能是预防原发性胆汁性肝硬化发病的重要措施。     

熊去氧胆酸联合糖皮质激素治疗自身免疫性肝炎-原发性胆汁性肝硬化重叠综合征的疗效观察

目的 观察熊去氧胆酸(UDCA)联合糖皮质激素治疗自身免疫性肝炎(AIH)-原发性胆汁性肝硬化(PBC)重叠综合征的长期疗效.方法 对19例AIH-PBC重叠综合征患者根据其初始治疗方案的不同分为初始UDCA联合激素治疗组及初始UDCA单药治疗组,根据患者肝炎病理炎症(G)和纤维化(S)程度分为病理早期组(G2S2),回顾性分析不同时间段加用激素及不同病理分期患者的疗效、生物化学应答状况和组织病理学变化情况.治疗前后数据的比较应用配对样本的t检验(正态分布)或两配对样本的Wilcoxon非参数秩和检验(非正态分布),生物化学应答率比较应用Fisher's精确检验法.结果 初始UDCA联合激素治疗组中位治疗时间为10.4(6.0～23.0)个月,治疗后ALT,AST,球蛋白、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶及IgG水平较治疗前明显下降(P值均<0.05);初始UDCA单药冶疗8.1(3.0～15.0)个月后,患者生物化学及免疫学指标变化差异无统计学意义(P值均>0.05),加用激素治疗10.6(6.0~24.0)个月后,ALT、AST、球蛋白,ALP及IgG水平较治疗前明显下降(P值均<0.05),与初始UDCA联合激素治疗组的ALT、IgG及ALP生物化学应答率差异无统计学意义(P值均>0.05).5例病理早期AIH-PBC重叠综合征患者出现ALT、IgG及ALP完全应答,不同病理分期患者ALT生物化学应答率差异有统计学意义(P<0.05).3例患者有治疗前后肝活组织病理检查结果,可见汇管区及界板内淋巴细胞及浆细胞的浸润明显减轻,纤维间隔的范围在一定程度有所减小.结论 对于诊断为AIH-PBC重叠综合征的患者,建议积极早期应用UDCA与糖皮质激素联合治疗.联合治疗对不同病理分期的患者都有疗效,但早期应用可能获得更佳的生物化学应答及组织学改善.