碱性成纤维细胞生长因子的生物活性分析

目的 探讨生物提取及重组碱性成纤维细胞生成因子（bFGF)的生物学活性。为进一步进行基础与临床研究提供依据。方法 将bFGF作用于体外原代培养人脐静脉血管内皮细胞，利用噻唑蓝（MTT）方法，观察对DNA合成的影响。利用鸡胚绒毛囊膜体内试验，观察bFGF对活体血管新生的影响。结果 体外和体内活性试验均证实：当bFGF&;gt;10ng/ml时，细胞生长呈明显的抑制状态，而bFGF＜0．01ng/ml呈现明显生长不良状态。结论 bFGF具有广泛的生物学功能，其生物活性的测定为基础与临床的研究提供了实验室依据。     

银杏叶及葡萄籽提取物体外抑制蛋白糖化终末产物生成作用的研究

 目的 应用体外蛋白糖化反应系统,确定银杏叶及葡萄籽提取物抑制蛋白糖化终末产物生成的作用。方法 对照组将葡萄糖与牛血清白蛋白分别在STUOX；条件下共同孵育，实验组则加入不同剂量的银杏叶及葡萄籽提取物或氨基胍。利用荧光分光光度计对不同温度和时间培养条件下的样品测定，根据荧光强度确定蛋白糖化终末产物的生成量。结果 在本体外系统中，蛋白糖化终末产物的生成与孵育温度及时间呈正相关。银杏叶提取物及葡萄籽提取物在1.0~2.0 g.L_-1剂量范围内均可有效抑制蛋白糖化终末产物的生成，当药物浓度达2.0 g·L_-1时其抑制作用相当于同剂量的氨基胍。结论 具有明确 抗氧化作用的银杏叶提取物及葡萄籽提取物在体外可有效抑制蛋白糖化终末产物的生成。     

克隆人肥胖基因表达产物瘦素的分子量及特异性鉴定

目的对克隆的人肥胖(OB)基因蛋白表达产物－瘦素(Leptin)进行分子量及特异性鉴定。方法以商品Leptin为阳性对照,同时设有未经热诱导的对照组(OB－c)及克隆人肥胖基因重组表达产物试验组(OB－h)。本文采用SDS－PAGE对大肠杆菌所表达的蛋白产物进行分子量测定,同时用Westernblotting试验对其产物进行了特异性鉴定。结果经SDS－PAGE检测,在21.5～14.4ku之间有一明显蛋白表达条带,对照组在相同的位置上未见明显蛋白表达。试验组OB－h蛋白表达产物分子量的位置与商品Leptin的位置基本一致。经Westernblotting试验,在硝酸纤维素膜上,商品Leptin阳性对照及OB－h试验组大约16ku的位置上可见到两条明显的与抗人Leptin多克隆抗体呈特异性结合反应染色条带。结论人的OB基因克隆后,在大肠杆菌中能特异的表达人的Leptin蛋白质。     

重组碱性成纤维细胞生长因子的生物活性分析

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是1974年Gospodarowicz首先从牛的垂体中分离纯化,但天然FGF在动物组织中含量极微,常规生化方法提纯的FGF成本高且来源困难,使其在医学和生物学领域的应用受到限制。利用重组DNA技术获得重组牛bFGF产物,有力地推动了bFGF的实际应用。为此,采用人脐静脉血管内皮细胞原代培养、MTT摄取试     

碧罗芷体外抑制蛋白糖化终末产物生成作用的研究

目的　应用体外蛋白糖化反应系统 ,确定碧萝芷抑制蛋白糖化终末产物生成的作用。方法　对照组将葡萄糖与牛血清白蛋白分别在 37、50、70℃共同孵育 ,实验组则加入不同剂量的碧萝芷或氨基胍。在不同时间取孵育样品用荧光分光光度计检测其荧光强度代表为蛋白糖化终末产物的生成量。结果　在本体外系统中 ,蛋白糖化产物的生成与孵育温度及时间呈正相关。碧萝芷在 0 3～ 2 0 g·L- 1 剂量范围内可有效抑制蛋白糖化终末产物的生成 ;其抑制作用相当于同剂量的氨基胍。结论　具有抗氧化作用的植物提取物碧萝芷在体外可有效抑制蛋白糖化终末产物的生成     

不同饲料配方及喂饲方法制备不同胰岛素敏感性大鼠模型的研究

目的使用不同饲料配方及喂饲方法制备具有不同胰岛素敏感性（IS）的大鼠模型方法132只雄性SD大鼠分为3组（对照组、肥胖组、限食组）,使用两种饲料（基础与高脂高能）及两种喂饲方式（自由与限食）喂饲6个月.各组大鼠在喂饲至2个月、4个月、6个月时采用正常血糖、高血浆胰岛素钳夹技术检测IS并进行口服糖耐量试验;同时检测大鼠体重、内脏体脂重量及空腹血浆胰岛素（FIns）水平.结果在此喂饲条件下,各组大鼠IS由高到低依次为：限食组＞对照组＞肥胖组.肥胖组大鼠喂饲2个月时就已出现IS明显减退（55%）和糖耐量受损,并随喂饲时间延长而加重;对照组大鼠喂饲2个月、4个月时IS与糖耐量结果正常,6个月时糖耐量与IS有所减退;限食组大鼠始终保持胰岛素高敏状态,实验结束时,该组大鼠IS分别为对照组和肥胖组的5倍与10倍.三组大鼠的体重、体内脂肪含量及血浆胰岛素水平均有相应的变化.结论本实验采用的不同饲料及喂饲方式可以成功地制备稳定可靠的、具有不同IS的大鼠模型.     

四种多肽生长因子对雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3M生长的影响

目的 观察多肽生长因子中的转化生长因子β1（TGF－β1）、表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）、角化生长因子（KGF）对雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC－3M生长的影响。方法 体外培养前列腺癌细胞系PC－3M,分别加入TGF－β1、EGF、bFGF、KGF,每种生长因子采用1、5、10、50ng/ml4种浓度,采用Brdu掺入法测定细胞生长水平。结果 培养72h后,对照组PC－3M细胞的吸光度[A,旧称光密度（OD）]值为0．759,4种生长因子在不同浓度时对PC－3M细胞的生长皆有抑制作用,而且随浓度的增加抑制作用逐渐增强。4种因子在50ng/ml时,A值分别为0．400（TGF－β1）、0455（EGF）、0．532（bFGF)、0．491（KGF）,与对照组比较,差异均具有显著性。另外,当1ng/ml EGF分别与0．5ng/ml或5ng/ml TGF-β1同时加入培养基时,A值分别为0．522和0．299。结论 在体外培养条件下,TGF－β1、EGF、bFGF及KGF均依浓度效应关系抑制PC－3M细胞的生长,TGF－β1与EGF对PC－3M细胞生长的抑制作用不存在交互作用。     

非酶糖化蛋白对体外培养血管内皮细胞生长的影响

目的 观察糖代蛋白终末产物（ＡＧＥｓ）及高糖对体外培养人血管内皮细胞增殖的影响。方法 采用＾３Ｈ标记的腺嘧啶（＾３－ＴｄＲ）掺入法测定细胞增殖情况。结果 在含ＡＧＥｓ的培养液（５μｇ／ｍｌ）中增培养的新生儿脐带静脉内皮细胞,其２小时＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入对照组的２．９５倍（Ｐ〈０．０１）,而在含３０ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖的２液中培养的人胚胎脐带静脉内皮细胞,其２小时＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入对照组（１１ｍｍｏｌ／     

热量限制对人二倍体成纤维细胞衰老相关基因表达的影响

目的观察热量限制对人二倍体成纤维细胞IMR-90衰老相关基因表达的影响。方法应用RT-PCR和Western blot的方法，对含低浓度（3．0mmol／L）、高浓度（22．5mmol／L）葡萄糖和正常对照组（含5．0mmol／L葡萄糖）培养条件下的IMR-90细胞衰老相关基因p16、p21和p53的mRNA和蛋白表达水平进行分析。结果与对照组和高糖培养条件下的早期和晚期细胞相比较，低浓度葡萄糖培养条件下的早期和晚期细胞p16和p21在mRNA水平均显著下降（P〈0．05）；低浓度葡萄糖组、对照组和高浓度葡萄糖培养组晚期细胞p16蛋白水平分别为4．2、7．4、9．7，比各自早期细胞表达（0．6、1．0、1．8）增加5～7倍；低浓度葡萄糖组，对照组和高浓度葡萄糖培养早期细胞和低糖培养晚期细胞p21蛋白水平差异无统计学意义，分别为1．1、1．0、1．3、0．9，但与对照组和高糖培养晚期细胞p21蛋白水平（3．1、4．2）相比较则降低3～4倍；各组培养条件下的早期和晚期细胞中p53表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论各组晚期细胞比各自早期细胞p16基因表达增高；对照组和高糖培养条件下的晚期细胞比各自早期细胞p21基因表达增高；低浓度葡萄糖培养延缓IMR-90细胞衰老并伴有p16和p21基因表达下调；p53基因可能不是IMR-90细胞复制衰老主要调节因子。     

2型糖尿病患者血清可溶性CD14水平的改变及其意义

在正常对照者，并发或未并发肾病的2型糖尿病患者测定血清可溶性CD14（sCD14)，血糖，血脂，HbA1c，尿白蛋白等。结果显示血清sCD14与糖尿病肾病之间存在某些相关性。