免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响

目的观察不同免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响。方法将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化。以不同免疫途径(皮下,腹腔,滴鼻)用P6蛋白免疫小鼠,每组12只。然后另取小鼠分为PBS组和不同佐剂组(MDC、IL-2、弗氏佐剂),每组15只,采用皮下注射途径免疫。共免疫3次,间隔2周,用ELISA检测小鼠血清特异性IgG抗体,用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性,用ELISA检测IL-4和IFN-γ水平。结果在大肠埃希菌中成功表达P6蛋白。3种免疫途径相比,皮下途径免疫诱导的IgG抗体滴度为1 279.97±3.87,腹腔免疫组为427.16±3.08,滴鼻免疫组为253.98±3.30,差异有统计学意义(F=5.43,P<0.05)。采用皮下免疫途径时,MDC组诱导的IgG抗体滴度、IL-4水平分别为7 421.02±3.30和79.64±2.75,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05)。IFN-γ水平和脾淋巴细胞增殖指数与IL-2组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用MDC佐剂并采用皮下途径注射可使NTHiP6蛋白疫苗获得较好的免疫效果。     

接头序列及其在融合蛋白构建中的应用

基因融合已经成为生化研究领域必不可少的技术.通过基因融合,可以生产出具有新功能的蛋白质,同时可以显著提高蛋白质的某些生物学特性[1].接头序列(Linker)是基因融合技术之一,即通过一段适当的核苷酸序列将不同的目的基因连接起来,使之在适当的生物体内表达成为一条单一的肽链,其中起连接作用的氨基酸称为Linker[2].Linker序列的选择对融合基因的构建至关重要.     

抗病毒药物对HCMV感染的人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的 观察人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC304)细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)基因表达及抗病毒药物对ICAM-1表达的影响.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应技术动态检测HCMV感染的HUVEC304和更昔洛韦(ganciclovir,GCV)与膦甲酸钠(foscarnet sodium,PFA)干预受染的HUVEC304 ICAM-1 mRNA的表达.结果 常规培养的HUVEC304可表达ICAM-1;HCMV感染后4 h,ICAM-1 mRNA的表达开始增加(P＜0.05),6 h达高峰(P＜0.01),36 h表达水平开始下降,但仍高于正常细胞;GCV和PFA可抑制HCMV感染诱导的ICAM-1表达的上调(P＜0.05).结论 HCMV感染可引起ICAM-1 mRNA的表达增加;应用GCV和PFA可抑制HCMV诱导ICAM-1 mRNA的表达.     

补体片段C3d在疫苗应用上的研究进展

C3是血浆中浓度最高的补体蛋白,是经典途径、旁路途径和凝集素途径3条激活途径的交汇中枢.在C3的裂解过程中,C3d是不能被蛋白酶裂解的最小片段.1996年,Dempsey等[1]将鸡卵溶菌酶(hen egg lysozyme,HEL)分别与1～3个C3d分子偶联制备融合蛋白疫苗,发现C3d能够显著提高HEL的免疫原性.近年来把C3d作为分子佐剂的研究日益增多,本文对C3d的分子生物学特征及其在疫苗学上的研究新进展作简要综述.     

CPn0308免疫性检测方法的建立及在感染肺炎衣原体人群中的初步应用

肺炎衣原体(CPn)感染可能与心脑血管疾病的发生相关,在感染人群中表现出一定的免疫应答,CPn0308是新发现的包涵体膜蛋白,是否在自然感染人群中具有免疫应答值得研究.     

中国河北地区汉族人群 HLA －E基因多态性分析

目的：通过调查中国河北地区汉族人群人类白细胞抗原－E（ HLA－E）等位基因多态性分布情况,为探讨HLA－E基因多态性与疾病的关联奠定基础。方法 HLA－E等位基因多态性分析采用聚合酶链反应－序列特异性引物（ PCR－SSP）方法,调查285例中国河北地区汉族正常人群。结果 HLA－E的2个等位基因在这一人群中检测到,分别是HLA－E倡0101和HLA－E倡0103,分布频率分别是41.05％和58.95％。而HLA－E倡0104等位基因未检测到。结论中国河北地区汉族人群中共有2个HLA－E等位基因分布,分别为HLA－E倡0101和HLA－E倡0103,其分布频率相近,分别是41.05％和58.95％。     

基因疫苗干预对感染小鼠心肌组织病理及超微结构的影响

目的 探讨基因疫苗干预对柯萨奇病毒B组3型(coxsackie virus group B type 3,CVB3)感染后,小鼠心肌组织病理及细胞超微结构的变化及意义.方法 将BALB/C小鼠随机分为3组,每组11只,用空质粒pcDNA3、基因疫苗pcDNA3/VP1和融合基因疫苗pcDNA3/MDC-L19-VP1分别免疫,共3次,每次间隔4周.末次免疫后第3周,每组随机取3只小鼠,腹腔注射含3倍半数致死量(3 half lethal dose,3LD50) 的CVB3病毒液,感染后第7天将小鼠处死,用于检测血中病毒滴度,并取心脏组织进行病理观察和细胞超微结构观察.每组剩余8只小鼠,腹腔注射致死量病毒液,观察并记录动物存活情况.结果 预防性接种重组基因疫苗后,CVB3感染的小鼠生存率pcDNA3/MDC-L19-VP1组为37.5%,pcDNA3/VP1组12.5%,pcDNA3组11 d内全部死亡,3组生存率比较差异有统计学意义(P<0.01);3组小鼠血中的病毒滴度依次降低,且差异有统计学意义(P<0.01);光镜观察显示pcDNA3/MDC-L19-VP1 组小鼠心肌组织细胞未出现严重的水肿和炎细胞浸润,电镜显示心肌细胞未出现核周水肿,肌原纤维未见断裂溶解,线粒体、肌浆网等细胞器未见明显异常,仅有少量炎性细胞浸润.结论 融合基因重组疫苗可以有效的预防CVB3感染对心肌的损伤.     

MIP-1α和Flt3l基因佐剂联合应用对HPV16E7 DNA疫苗的免疫增强作用

目的:探讨巨噬细胞炎性蛋白1α (Macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α) 和酪氨酸激酶受体3配体 (Flt3 ligand,Flt3l) 基因佐剂联合应用增强人乳头瘤病毒16型 (Human papillomavirus16,HPV16) E7 DNA疫苗免疫效果的可能性.方法:构建真核表达质粒pcDNA3/MIP-1α、pcDNA3/Flt3l和pcDNA3/HPV16E7.C57BL/6小鼠随机分为8组,分别为pcDNA3组、pcDNA3/MIP-1α组、pcDNA3/Flt3l组、pcDNA3/MIP-1α和pcDNA3/Flt3l混合组、pcDNA3/HPV16E7组、pcDNA3/MIP-1α和pcDNA3/HPV16E7混合组、pcDNA3/Flt3l和pcDNA3/HPV16E7混合组以及pcDNA3/MIP-1α、pcDNA3/Flt3l和pcDNA3/HPV16E7混合组.每组14只,肌肉注射质粒免疫小鼠,每3周免疫1次,共3次;末次免疫后2周每组随机抽取6只小鼠,取脾脏制备淋巴细胞悬液,用CCK-8试剂盒检测其对TC-1靶细胞的特异性杀伤能力.其余小鼠在腹股沟处皮下注射5×104个TC-1细胞,观察肿瘤生长情况.结果:成功构建了真核表达质粒pcDNA3/MIP-1α、pcDNA3/Flt3l和pcDNA3/HPV16E7;pcDNA3/MIP-1α、pcDNA3/Flt3l和pcDNA3/HPV16E7混合组的CTL杀伤能力明显高于其它各组(P<0.01);肿瘤细胞攻击后16天,pcDNA3组小鼠全部长出肿瘤,而pcDNA3/MIP-1α、pcDNA3/Flt3l和pcDNA3/HPV16E7混合组的成瘤率仅为12.5%,明显低于其他组,统计学分析示8组之间成瘤率差异有显著性(P=0.007).60天后各组成瘤率之间的差异无统计学意义(P=0.229).结论:联合应用MIP-1α和Flt3l基因佐剂增强了HPV16E7 DNA疫苗的免疫效果,一定程度上延缓了肿瘤的发生.     

接头长度对MDC与CVB3VP1融合基因疫苗免疫效果的影响

目的构建表达不同接头（linker）长度的巨噬细胞源趋化因子（MDC）与CVB3VP1融合基因疫苗，观察接头长度对融合基因疫苗免疫效果的影响。方法构建表达接头长度分别为10、15和19个氨基酸的重组质粒pcDNA3／MDC-L-VP1；将6—8周龄雄性BALB/c小鼠随机分为A-E5组，分别肌肉注射pcDNA3、pcDNA3／VP1、pcDNA3／MDC-L10-VP1、pcDNA3／MDC-L15-VP1和pcDNA3／MDC-L19-VP1，每次接种100μg/只，4周注射1次，共3次，每次免疫后第14天眼眶静脉采血，用微量中和试验滴定血清中和抗体效价。第3次免疫后3周，每组取3只小鼠，制备脾细胞，用CCK-8法检测特异性CTL杀伤活性；每组取3只小鼠以3LD50 CVB3病毒攻击，第7天取血处死，检测血中病毒滴度。结果成功构建了3种不同接头长度的质粒；第3次免疫后，E组中和抗体滴度和小鼠脾淋巴细胞特异性CTL杀伤活性显著高于其他各组，血中病毒滴度显著低于其他各组（P〈0．01）。结论融合基因疫苗pcDNA3／MDC-L19-VP1能诱导小鼠对CVB3VP1产生较强的体液和细胞免疫，有效地抑制了病毒的增殖。     

小鼠巨噬细胞源性趋化因子作为佐剂增强不可分型流感嗜血杆菌P6蛋白疫苗的免疫保护作用

目的用原核细胞表达不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)P6蛋白并观察巨噬细胞源性趋化因子(MDC)对NTHi-P6蛋白疫苗免疫效果的影响。方法构建原核表达质粒PGEX-6P2/P6,转化E.coli XL1-Blue,诱导P6蛋白的表达。将BALB/c小鼠随机分为P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组、P6蛋白联合Freund佐剂组、PBS对照组。分别于0、14、28 d经腹腔免疫,末次免疫后14 d,每组取12只小鼠取血,ELISA检测血清中IgG抗体水平。每组取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,ELISA检测IL-4和IFN-γ水平。用10×LD50NTHi攻击每组剩余15只小鼠,观察免疫保护作用。结果 P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组、P6蛋白联合Freund佐剂组均能诱导小鼠产生IgG抗体,其滴度分别为1∶1 140.25、1∶3 044.38,P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组小鼠抗体滴度和IFN-γ水平明显高于P6蛋白联合Freund佐剂组(P0.05),但IL-4水平2组间差异无统计学意义(P0.05)。经NTHi攻击后,P6蛋白联合Freund佐剂与MDC组小鼠的生存率达80%,与PBS组相比差异有统计学意义(P0.05),但与P6蛋白联合Freund佐剂组相比无显著性差异。结论 MDC作为蛋白佐剂,在一定程度上增强了NTHi-P6蛋白疫苗的免疫保护作用。