高原环境中大鼠脑水肿与水通道蛋白4的表达变化

目的：探讨大鼠在模拟5000m高原环境下脑水肿脑组织水通道蛋白4(aquaporin4，AQP4)的表达变化及意义。方法：实验选用Wistar大白鼠56只按随机数字法将大鼠分为正常对照组8只、实验组48只，其中实验组按在模拟高原环境中饲养时间分为饲养4，24，48，72h，2周和4周组，每组8只。在各时相点取大鼠大脑半球组织，测定脑组织含水率，作AQP4免疫组织化学染色和组织原位杂交，用图像分析软件检测AQP4抗体和基因阳性表达相对灰度值，了解AQP4在大鼠大脑的表达变化。结果：饲养4，48，72h组大鼠脑组织含水率明显高于正常对照组(P&;lt;0．05～0．01)，大鼠在模拟高原环境中饲养2周时含水率逐渐下降，饲养4周组脑组织含水率接近正常对照组。AQP4在脑毛细血管壁及胶质纤维呈阳性表达，正常对照组大鼠AQP4平均相对灰度值(average relative gray，ARG)(1．268&;#177;0．119)明显低于饲养4h组(1．392&;#177;0．098)(t=5．258，P&;lt;0．05)；饲养24，48和72h组AQP4阳性表达增强，ARG值显著增加(t=2．967～5．652，P&;lt;0．01)；饲养2周组ARG值有所下降(t=5．239，P&;lt;0．05)。AQP4 mRNA在胶质细胞核和神经细胞核表达阳性，变化规律与AQP4蛋白变化基本一致，即24，48和72h组阳性细胞数率增加(t=3．045～5．526，P&;lt;0．01)，阳性染色增强，饲养2周组阳性表达率下降(t=4．687，P&;lt;0．05).结论：AQP4与血脑屏障通透性变化密切相关，AQP4表达增强是高原脑水肿发生的分子生物学机制之一。     

超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的实验研究

目的探讨超顺磁性氧化铁纳米颗粒（SPIO）标记青山羊骨髓间充质干细胞的方法,并确定标记颗粒在细胞内的具体位置,评价标记效果。方法抽取骨髓离心,分离间充质干细胞制成单细胞悬液传代培养及扩增,用SPIO标记第三代骨髓间充质干细胞,显微镜下观察发现细胞内胞吞入大量SPIO颗粒后消化培养细胞,离心成团,于2.5%戊二醛固定,透射电镜常规制样,镜下观察并采集图像。结果电镜下骨髓间充质干细胞的超微结构保存良好,胞质内出现大量电子密度高的SPIO颗粒,呈小团状或点状分布,主要位于溶酶体内及滑面内质网、线粒体及胞浆中的膜性结构上,细胞膜表面和核膜上也可见少量的散在颗粒。结论透射电镜下显示用SPIO标记骨髓间充质干细胞阳性率高,超微结构保存良好,准确定位了SPIO在胞内的位置,此法可为干细胞移植的示踪提供依据。     

医学研究生开设流式细胞检测术课程的初步探讨

流式细胞术（flow cytometry FCM）作为一门生物监测技术已得到广泛应用，涉及细胞生物学、分子生物学、肿瘤学、血液学、免疫学、遗传学等方面，具有检测速度快、测量指标多、采集数据量大、分析全面、精度高、方法灵活等特点。流式细胞作为一项重要技术也成为研究生学习的重要内容，但目前在医学研究生教学中开展流式细胞检测技术课程的院校很少。本文就医学研究生开设流式细胞检测术课程的初步探讨。     

免疫电镜技术运用过程中电子染色方法的选用

目的探究免疫电镜不同染色方法对免疫组化阳性实验结果影响的关系。方法组织切片经常规免疫组化（雌激素受体GPR30）并行DAB-硫酸镍铵显色后进行电镜切片，然后分为双氧铀-柠檬酸铅双染、双氧铀单染与未染色3组，以便对不同电子染色结果进行比较。结果GPR30免疫阳性产物位于细胞核外的膜性结构上，在铀-铅双染组显示很高的电子密度，但是背景染色也很深，在铀单染组的反差比较好，而未染色组的反差更好。结论免疫电镜技术中针对不同的免疫阳性反应选用不同的电子染色方法，有利于阳性结果的判断与鉴别。     

表皮生长因子液治疗糖尿病皮肤溃疡的临床观察

目的 探讨表皮生长因子对糖尿病皮肤溃疡的有效性并比较呋喃西林、TDP辐射器和表皮生长因子对糖尿病皮肤溃疡作用特点。方法 比较了TDP、呋喃西林及表皮生长因子对糖尿病皮肤溃疡的疗效。结果 表皮生长因子对促进糖尿病（DM）皮肤溃疡愈合明显快于TDP及呋喃西林常规换药（P＜0．01）;而TDP辐射器在DM溃疡中、晚期愈合方面疗效明显。结论 本研究提示不同的治疗方法对糖尿病皮肤溃疡的疗效各有其特点,表皮生长因子能有效的治疗DM皮肤溃疡。     

粘孢子虫孢子期扫描电镜样品制备方法的比较

目的 探讨粘孢子虫成熟孢子扫描电镜样品制备新方法 .方法 通过常规方法 和改进方法 制备粘孢子虫孢子扫描样品.结果 改进方法 后观察结果 显示虫体脱落少,结构清晰,立体感强,能够达到理想的效果.结论 改进方法 解决了粘孢子虫在制作扫描电镜样品时的几个问题,是一种切实可行的方法 ,值得推广应用.     

悬浮状物质的样品制备及扫描电镜观察

目的 通过改进物质的样品制备,以提高扫描电镜观察的图像质量.方法 将体外培养的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)悬液经2.5%的戊二醛(pH 7.2～7.4)固定后,用吸管直接吸出固定液,经洗涤、梯度脱水、叔丁醇梯度置换,再制成细胞悬液进行涂片,空干燥,离子溅射镀膜进行扫描电镜观察.结果 hMSCs饱满、表面结构清晰,凸现质量改善明显.结论 用直接移液法处理悬浮物质扫描电镜样品明显优于传统的样品制作方法.     

中心实验室大型仪器的规范化管理

我校中心实验室目前已拥有总价值超千万元的大型精密仪器，涵盖生物医学理化分析及生物组织细胞成分分析等主要设备，承担了学校的部分科研和研究生教学的分析测试任务。随着建设速度和投入力度的加大，就更需要加强实验室管理的科学化和规范化，以适应学校的发展。     

培养神经细胞透射电镜样本制备方法的探讨

目的探讨培养神经细胞透射电镜样本制备的新方法。方法分离SD大鼠大脑皮层神经细胞，培养于铺有琼脂糖和多聚赖氨酸薄膜的盖玻片上，适时固定、取膜，按常规程序制作超薄切片，电镜观察。结果，电镜观察神经细胞及髓鞘超微结构清晰，原有位置关系和连接方式保存良好，可见细胞间的紧密连接。结论薄膜细胞培养法是培养细胞超微结构研究的好方法，也适用于培养细胞电镜免疫组化、电镜原位杂交的研究。     

RAW264.7巨噬细胞的扫描电镜样品制备与观察

目的探索贴壁细胞扫描电镜样本最佳制备方法及仪器工作参数调节与图像质量之间的关系。方法通过对样品制备中清洗、脱水、镀膜步骤的对比试验,调整样品处理的次数、时间、样品台距离、喷涂厚度,获得最佳制备条件;优化电镜加速电压、物镜光阑、工作距离,得到最佳工作参数。结果制备RAW 264.7巨噬细胞扫描电镜样品的最佳方法是用0.1 mol/L PBS清洗2次,每次5 m in;30%、50%、70%、90%、100%乙醇梯度脱水,每次3 m in;镀膜导电时靶与样品之间距离为5 cm,真空度1.33~13.33 Pa,电流10 mA,时间150 s,间断镀膜。观察样品时最佳工作参数设置为加速电压10 kV,物镜活动光阑孔50μm,工作距离12 mm。结论制备样品程序中清洗、脱水、镀膜条件的设定及仪器的加速电压、物镜光阑孔大小、工作距离的优化,有利于获得清晰、细节丰富、反差适中、立体感强的扫描电镜图像。