我国人体弓形体感染

据估计世界弓形体感染率为25～50％左右,我国从50年代以来已从兔、猫、鼠及猪等动物分离到弓形虫。但我国人体病例的报道仍很少,现将我国人体弓形体病例和血清学调查情况作一简介。弓形体病例的发现和病原体分离至目前为止,我国至少已有7例弓形体病,其中3例由我们鉴定诊     

PCR鉴别诊断间日疟及恶性疟的研究

目的 :在同一反应体系中建立能鉴别诊断间日疟与恶性疟的 PCR检测方法。方法 :根据红内期疟原虫 SSUr RNA编码基因序列 ,设计合成 3个引物 ,采用聚合酶链反应技术 ,在同一反应体系中 ,间日疟原虫和恶性疟原虫分别预期被扩增出 34 1bp和 4 31bp的 DNA条带。结果 :间日疟原虫和恶性疟原虫模板在同一反应体系中分别被扩增出预期大小的 DNA片段 ,并经限制性酶切证实 ;杜氏利什曼原虫、弓形虫、健康人血及空白对照均无特异性扩增条带 ;以该检测体系至少可检出原虫血症为 2 .56× 10 ^-7间日疟原虫感染和 1.0 8× 10 ^-5恶性疟原虫感染 ;69份镜检阳性的间日疟和 2份恶性疟患者血样 PCR检测均为阳性 ,1例发热待查患者PCR诊断为间日疟 ,与镜检复查结果一致 ,所有疟疾阳性标本中未检出混合感染 ,2 0份健康人血 PCR均为阴性。结论 :该检测体系灵敏、特异 ,对于诊断间日疟和恶性疟以及鉴别间日疟原虫和恶性疟原虫混合感染具有一定的应用价值。     

一种新的弓形虫速殖子纯化方法

我们试用Ficoll-Urografin密度梯度离心法取得高纯度、高收获率的速殖子,现将此法报告如下。一、材料与方法 (一)弓形虫虫株 RH、ZS_1、ZS_2株为本实验室长期保种传代虫株;CN株为浙江省寄生虫病研究所引种;SH-1株采自上海第二医科大学寄生虫学教研室。5种虫株分别腹腔接种BALB/C小鼠,3d后抽取腹腔液15ml,磷酸缓冲加糖溶液洗涤3次,1000r×8min,制成速殖子悬液。 (二)Ficoll-Urografin密度梯度离心吸取5ml速殖子悬浮液加入10ml离心管内,用弯头吸管从悬浮液底部加入Ficoll-Urografin液5ml,经离心后管中形成     

弓形虫GRA1基因的体外扩增、克隆及鉴定

目的　体外扩增弓形虫RH株致密颗粒蛋白GRA1基因 ,并构建真核表达质粒。方法　从接种了弓形虫RH株的小鼠腹水中收集、纯化速殖子 ,提取基因组DNA ;据已知的GRA1基因列 ,设计合成一对引物 ,并引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点。应用PCR技术 ,从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA1基因片段。扩增目的基因片段经纯化、双酶切后 ,插入真核表达质粒pEGFP -N3中 ,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ,于卡那霉素阳性LB平板上筛选阳性克隆。重组子经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切、PCR鉴定。结果　从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出 785bp的GRA1基因片段 ,构建重组质粒pEGFPN3-GRA1,酶切和PCR鉴定产物大小均与预期值相符。 结论　成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了GRA1基因 ,并构建了pEGFPN3-GRA1重组质粒。为重组质粒的进一步表达和核酸疫苗的研究创造了条件     

恶性疟原虫重组质粒DNA接种诱导BALB/c小鼠的免疫应答

目的：观察重组质粒ＤＮＡ直接免疫接种诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的免疫应答水平，为恶性疟原虫ＤＮＡ疫苗在动物和人体的应用提供依据。方法：构建编码多价保护性抗原的重组质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８，ＰＣＲ法检测免疫鼠的肌肉、肝脏、肾脏、心脏、脾脏和肺组织中ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８，ＥＬＩＳＡ、Ｔ淋巴细胞转化试验、体外抑制试验观察其诱导的体液免疫及细胞免疫水平。结果：用ＰＣＲ法从上述组织中均检测到ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８，ＥＬＩＳＡ法测得免疫鼠血清的特异性抗体滴度达１２５６０，淋巴细胞转化试验显示恶性疟原虫可溶性抗原能特异性地剌激免疫鼠脾细胞增殖，免疫血清在体外还能抑制恶性疟红内期疟原虫的生长、发育。结论：编码恶性疟原虫多价保护性抗原的重组质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８直接免疫接种，能特异性地剌激ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答，其免疫血清在体外对疟原虫生长发育具有明显抑制作用。     

含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅴ.IFN-γ基因真核表达重组质粒的构建及其在DNA免疫中基因佐剂的作用

目的构建IFN-γ基因真核表达重组质粒作为基因佐剂,观察其与pcDNA3-ROP1(pc-ROP1) DNA共同免疫小鼠所诱导的免疫应答.方法将IF N-γ基因片段定向插入真核表达载体pcDNA3,双酶切鉴定,获得pcIFN重组子;碱裂解法大量制备,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,每只鼠注射pcIFN、pc-ROP1各100μg,两周后同量加强免疫一次,以pcDNA3空质粒及生理盐水组为对照.分别于免疫后第30天、50天、70 天共三次用MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性及NK细胞活性;双夹心ELISA测定血清细胞因子IFN-γ、IL-2及酶法测定NO含量;ELISA法测定IgG抗体滴度.结果构建成功的作用下,该两项指标均明显提高,且IFN-γ、IL-2及NO水平均较不加佐剂组显著提高(P＜0.01);而对IgG抗体滴度无显著影响(P＞0.05).结论 IFN-γ基因佐剂具有协同pc-ROP1DNA免疫的作用,可增强免疫鼠细胞免疫应答,IFN-γ、IL-2细胞因子及NO的产生.     

庆贺《广东寄生虫学会年报》创刊22周年暨改为《热带医学杂志》

《广东寄生虫学会年报》于1979年创刊,至今已历22年.《年报》编辑出版的22年历程中,它对我省寄生虫学和寄生虫病学术交流、促进学科的发展和防治寄生虫病起到了积极的推动作用.1978年恢复广东省寄生虫学会活动后,1979年在我国著名寄生虫学家徐秉馄教授主持下创办了《广东寄生虫学会年报》,并担任主编,朱师晦教授和潘世定所长任副主编,江静波教授等10多位教授任编委,经10年时间共出版了10卷.徐教授之后,《年报》继承了其办刊的科学性和严谨性,确保刊物的学术水平,继续出版了12卷,先后由何桂铭教授、     

弓形体RH株抗原基因SAG1的扩增克隆及鉴定

目的：体外扩增弓形体主要表面抗原SAG1基因,构建pcDNA3-SAG1真核表达质粒,为研制弓形体疫苗奠定基础。方法：采用PCR技术,自行设计一对寡核酸引物（P1,P2）,从弓形体RH株基因组DNA中特异扩增出编码SAG1抗原的基因片段,扩增的目的片段经纯化后用EcoR1和HindⅢ双酶切后,克隆到真核表达质粒pcDNA3中,转化入大肠杆菌TG1,用氨苄青霉素和PCR初筛,将PCR扩增阳性的重组子分别用Sac1单酶切、EcoR1和HindⅢ双酶切鉴定,结果成功地构建真核型表达质粒pcDNA3-SAG1,从而为进一步SAG1重组抗原的体外表达创造有利条件。结果：从RH株基因组DNA中特异扩增出编码SAG1的全基因序列,扩增目的基因片段大小与预期长度（1025bp),相符;将分离、纯化的目的基因片段SAG1任入pcDNA3质粒HindⅢt和EcoR1位点,构建重组质粒pcDNA3-SAG1。结论：成功构建重组质粒pcDNA3-SAG1。