水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

背景：水飞蓟宾(silybin)具有抗自由基活性、抗脂质过氧化作用和抗脂氧酶作用、极低的毒性，但由于其人体生物利用度低，故影响其疗效。水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(Silybin-phosphatidylcholine compound，SPC)具有较好的生物利用度，并且SPC中所含磷脂酰胆碱也具有抗自由基活性、抗脂质过氧化作用，理论上可以认为SPC具有更好的药理作用。目的：了解水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(SPC)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。设计：完全随机设计，对照实验研究。地点和材料：所有研究工作均在新乡医学院药物研究室进行。水飞蓟宾(silybin，含量98％)，辽宁盘锦第三制药厂提供；水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(SPC，含量&;gt;95％)，本室合成；丙二醛(MDA)试剂盒，南京建成生物工程研究所提供。仪器：SHIMADZU 2550紫外-可见光分光光度计，武汉科学仪器厂DL-6低温离心机。实验动物有新乡医学院动物中心提供。干预：各组受试大鼠给与供试样品灌胃；灌胃容积为0．5mL／100g。将SPC和Silybin分别悬浮于5g／L羧甲基纤维素钠(CMC)溶液中；①伪手术组和②单纯脑缺血一再灌注模型组(单纯模型组)：2次／d给与5g／LCMC灌胃。③SPC-1组：每日2次给与SPC 5mg／100g(5g／LCMC悬浮液)灌胃。④SPC-2组：2次／d次给与SPC 10mg／100g(5g／LCMC悬浮液)灌胃。⑤Silybin组：每日2次给与给与Silybin 10mg／10％(5g／LCMC悬浮液)灌胃。于第6次灌胃(第3d)后2h对各组大鼠进行手术。手术在100g／L乌拉坦(125mg／100g)腹腔注射麻醉下，沿颈部正中切口，小心钝性分离并暴露气管和双侧颈总动脉，用无损伤小动脉夹夹闭双侧颈总动脉和迷走神经，造成脑不完全缺血，60min后放开动脉夹，再灌注6h后，迅速取血、并断头处死取脑，迅速检测。伪手术组不夹闭颈总动脉。各项操作均由本研究室有经验实验师完成。主要观察指标：对比观察水飞蓟宾和两种剂量的水飞蓟宾一磷脂酰胆碱复合物(SPC)对大鼠脑缺血再灌注损伤模型脑组织含水量、病理学改变、血浆丙二醛(MDA)含量的影响。结果：①除伪手术组外，各组受试大鼠均出现脑水肿改变。单纯模型组大鼠脑组织表面肿胀，蛛网膜血管增粗，可见散在小出血点；光镜下可见细胞外间隙增大．毛细血管基底膜疏松，内皮细胞肿胀、饮泡扩大、胞浆疏松、核淡染；神经细胞和胶质细胞肿胀、胞浆出现少量空腔小泡，细胞器轻度扩张、染色变浅。SPC-1组、SPC-2组和Silybin组大鼠脑组织肉眼观察病变似单纯模型组．唯小出血点少见；光镜下细胞肿胀和细胞外间隙增大较轻，胞浆内空泡较少，SPC-2组细胞器未见扩张、核染色和伪手术组相似。②受试各组大鼠脑组织含水量存在差异：伪手术组(76．53&;#177;0．71)低于单纯模型组(80．90&;#177;0．62)、SPC-1组[79．35&;#177;0．32)、SPC-2组(77．63&;#177;0．68)和Silybin组78．81&;#177;0．57(t检验均P&;lt;0．05)。单纯模型组明显高于SPC-1组、SPC-2组和snybin组[P&;lt;0．01)。SPC-1组类似于Silybin组(P&;gt;0．05)，而明显高于SPC-2组(P&;lt;0．01)。各组受试大鼠血浆MDA含量也存在明显差异：伪手术组低于单纯模型组、SPC-1组、SPC-2组和Silybin组；单纯模型组明显高于SPC-1组、SPC-2组和Silybin组(均P&;lt;0．01)；SPC-1组类似于Silybin组(P&;gt;0．05)，而明显高于SPC-2组(P&;lt;0．01)。结论：水飞蓟宾和水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对大鼠脑缺血-再灌注损伤均有保护作用，但不能完全阻断脑缺血-再灌注损伤；水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物作用优于水飞蓟宾，并在一定范围内显示出量-效关系。     

微量全血胆硷酯酶活性快速比色测定法

本文介绍了一个微量全血真、假及总胆硷酯酶快速比色测定的新方法,仅需10ul全血和15分钟反应时间。此法以硫代碘化乙酰胆硷为底质,以奎尼丁硫酸盐做为假性胆硷酯酶抑制剂,用二硫双硝基苯甲酸做为显色剂。由于用新斯的明终止反应,故反应时间很精确。用此法测定408例正常人血液中胆硷酯酶活性,建立了正常值。     

水飞蓟宾-卵磷脂复合物制备工艺比较

目的建立实验室制备水飞蓟宾 卵磷脂复合物的方法。方法将水飞蓟宾和卵磷脂共溶于不同溶剂中 ,在一定条件下进行反应 ,然后将反应物分离、干燥、称重 ,比较收率。结果水飞蓟宾和卵磷脂可共溶于乙醇和热丙酮中。二者在 5 5℃乙醇中反应不完全 ,收率很低 (2 7% ) ,制备物为红棕色 ,不易干燥。二者在 5 5℃热丙酮中反应 10min和 70min ,收率分别为 5 9%和 93% ,制备物为黄白色类结晶固体物 ,易于干燥。结论此制备工艺中影响收率和质量的主要因素是反应介质的性质与反应时间     

丝光绿蝇饲养初步研究

目的通过对丝光绿蝇的室内饲养,观察其驯化以及饲养的生物学。方法采用煮熟的鲢鱼引诱丝光绿蝇产卵,收集其卵块,置于室内采用人工配制饲料进行驯化饲养。结果丝光绿蝇第１代从卵发育至成蝇需１４天,其中三龄期约５天,蛹期约６天。成蝇产卵前期约７天,卵散产。第２代从卵发育至成蝇约需１３天,其中三龄期约４天,蛹期约６天。结论丝光绿蝇室内驯养在温度２６℃～３１℃,相对湿度７５％条件下,从卵到蝇历期为１３～１４天,驯养初期,其生物学与自然条件下相比有所改变。     

四种生化检测方法对神经管缺损产前诊断实用性的评价

神经管缺损的产前诊断常用的方法有AFP定量,ChE测定硷性羟胺法,ChE测定改良Ellman氏法,ChE聚丙烯酰胺凝胶园盘电泳法。我们用这四种方法分别对104例胎儿正常之孕妇羊水及24例胎儿为神经管缺损的孕妇的羊水进行了测定。发现改良的Ellman氏ChE测定法是一种既准确又快速简便的胎儿神经管缺损产前诊断方法。     

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对肝损伤小鼠的保护作用

目的 探讨水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(SPC)对异硫氰酸-α-萘酯(ANIT)所致小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 40只小鼠随机分成4组,每组10只:正常对照组、ANIT模型组、ANIT SPC低剂量组(150mg/Kg)、ANIT SPC高剂量组(300mg/Kg).前两组给予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)悬液灌胃,后两组分别给予SPC(150、300mg/Kg)CMC-Na悬液灌胃,连续1周.末次给予SPC2h后,正常对照组灌胃给予花生油,其它三组给予ANIT60mg/kg(花生油配制),造成小鼠急性肝损伤模型,16h(禁食不禁水12h)后摘眼球采血,分离血清,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清总胆红素(TB).结果 SPC明显降低造模小鼠血清中ALT、AST、TB值,SPC组与模型组比较差异显著(P<0.05).结论 SPC对ANIT造成的急性肝损伤有明显的保护作用.     

玉屏风散提取液对小鼠腹腔巨噬细胞活化及增殖的影响

目的研究玉屏风散提取液对小鼠腹腔巨噬细胞增殖及活化的影响。方法分别制备玉屏风散水煎液、玉屏风散蒸馏水超声提取液、玉屏风散无水乙醇超声提取液和玉屏风散乙酸乙酯超声提取液。分离健康昆明种小鼠原代腹腔巨噬细胞进行体外培养,培养基中分别加入不同剂量上述药液使终末浓度达到1.67、3.33、8.33、16.67 g·L~(-1)(折合生药)进行细胞培养,以0 g·L~(-1)作为空白对照组。培养24、72 h后,分别加入中性红、2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐(WST-8),用酶标法检测4种玉屏风散提取液对腹腔巨噬细胞活化及增殖的影响。结果与空白对照组相比,4种不同浓度的玉屏风散提取液均可促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力及增殖(P<0.01)。与同剂量玉屏风散水煎液相比,除玉屏风散无水乙醇超声提取液(3.33 g·L~(-1))、玉屏风散乙酸乙酯超声提取液(3.33 g·L~(-1))可促进巨噬细胞吞噬中性红能力(P<0.05,P<0.01),玉屏风散乙酸乙酯超声提取液(16.67 g·L~(-1))可促进腹腔巨噬细胞增殖(P<0.01),其余剂量的玉屏风散超声提取液的效果都不如同剂量组的玉屏风散水煎液。结论玉屏风散提取液可促进小鼠腹腔巨噬细胞活化吞噬能力及增殖,但玉屏风散的超声提取条件需进一步探索。     

狼毒大戟化学成分研究

目的研究狼毒大戟化学成分。方法采用硅胶柱层析进行分离纯化化合物,根据理化性质和现代波谱技术进行结构鉴定。结果从狼毒大戟根的石油醚部分分离出5个化合物,分别鉴定为2,4-二羟基-6-甲氧基-3-甲基苯乙酮(1)、3,3′-二乙酰基-4,4′-二甲氧基-2,2′,6,6′-四羟基二苯甲烷(2)、2,4-二羟基-3-醛基-6-甲氧基苯乙酮(3)、富马酸(4)、β-谷甾醇(5)。结论5个化合物均为已知化合物,化合物3为首次从该植物中获得。     

吸烟大鼠肺组织病理学改变及与VEGF表达相关性研究

目的探讨被动吸烟大鼠肺组织病理变化及其与血管内皮生长因子(VEGF)表达的相关关系。方法以12周龄雌性SD大鼠为研究对象,采用被动吸烟法,取被动吸烟3、6、9周的大鼠肺组织进行病理学检查及VEGF免疫组织化学检测,将两者进行相关性分析。结果吸烟大鼠支气管肺组织内出现以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,纤毛脱落,杯状上皮细胞化生。吸烟6周时出现部分肺泡壁破裂,肺泡腔扩大。吸烟9周大鼠与同龄对照组大鼠比较,其平均肺泡数减少(P<0.05),肺泡内衬间隔增加(P<0.05),呈现轻度肺气肿样改变。VEGF表达下降与肺泡数减少呈正相关(P<0.05),与肺泡间隔数增加呈负相关(P<0.05)。结论被动吸烟大鼠肺组织病理变化符合肺气肿样改变,且与VEGF的变化呈一定的相关性。VEGF可能是吸烟致大鼠肺气肿发病过程的重要影响因素。     

玉屏风散提取液对小鼠脾淋巴细胞增殖及转化的影响

目的研究玉屏风散提取液对小鼠脾淋巴细胞增殖、转化的影响。方法分别制备玉屏风散水煎液、玉屏风散蒸馏水超声提取液、玉屏风散无水乙醇超声提取液和玉屏风散乙酸乙酯超声提取液。分离健康昆明种小鼠原代脾淋巴细胞进行体外培养,培养基中分别加入不同剂量上述药液使终末浓度达到1.67 mg.mL-1、3.33 mg.mL-1、8.33 mg.mL-1、16.67 mg.mL-1(折合生药)进行细胞培养,以0 mg.mL-1组为对照组。培养72 h后加入2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐(WST-8)用酶标法分别检测4种玉屏风散提取液对脾淋巴细胞增殖和刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾淋巴细胞转化的影响。结果与对照组相比,玉屏风散(1.67 mg.mL-1、3.33 mg.mL-1、8.33 mg.mL-1、16.67 mg.mL-1)可显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖和ConA诱导的脾淋巴细胞转化(P<0.01)。除1.67 mg.mL-1玉屏风散乙酸乙酯超声提取液外,其他剂量的玉屏风散超声提取液促进小鼠脾淋巴细胞增殖和ConA诱导的脾淋巴细胞转化的效果均低于同剂量组的玉屏风散水煎液(P<0.05)。结论玉屏风散可显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖和ConA诱导的脾淋巴细胞转化,但玉屏风散的超声提取条件需进一步摸索。