大鼠胚胎脑源性神经干细胞的分离培养和鉴定

目的：分离培养大鼠胚胎脑源性神经千细胞，并进行增殖分化鉴定。 方法：实验于2005—06／12在中国科学技术大学生命科学学院周江宁研究室进行。①自孕14dWistar大鼠胚胎分离大脑皮质及皮质下组织，经机械吹打分离成单细胞后，利用无血清原代及传代培养方法，在添加重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人表皮生长因子和B27添加剂的DMEM／F12（1：1）培养基中进行悬浮培养，获得具有克隆能力的细胞群；用有限稀释法，得到来源于同一细胞的亚细胞系克隆。②从培养基中撤除生长因子和B27添加剂，换成含体积分数为0．1的胎牛血清的DMEM／F12培养基，将培养的细胞球接种于预先铺有多聚赖氨酸盖玻片的培养皿，诱导分化。③以免疫荧光细胞化学技术，用神经干细胞的特异性单克隆抗体（巢蛋白）和增殖细胞单克隆抗体（5一溴脱氧尿苷嘧啶）鉴定克隆细胞，以鉴定神经干细胞的自我更新增殖能力。④以免疫荧光细胞化学技术，用神经细胞的特异性抗体（神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂）鉴定分化细胞，以鉴定神经干细胞的多向分化潜能。 结果：①从胎鼠大脑皮质及皮质下分离的组织，经原代和传代培养均可形成细胞克隆，并具有增殖的能力，表达神经上皮干细胞蛋白抗原和增殖细胞抗原。②在血清诱导下，分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞3种神经细胞的特异性抗原。 结论：运用上述方法分离培养的细胞具有自我更新和增殖能力，并具有多向分化潜能和具有神经干细胞的特异性抗原。     

电针心经不同节段对家兔心上交感神经丛放电活动的影响

背景：经脉脏腑相关是针灸经络理论的核心，也是针灸作用机制研究的切入点和突破口。本文从心经与支配心脏交感神经电活动关系的角度探讨针灸经络理论的核心内容。目的：观察电针心经不同节段对家兔心上交感神经丛放电活动的影响。设计：随机对照动物实验。单位：安徽中医学院经脉脏腑相关研究中心实验室。材料：实验于2004-03在安徽中医学院经脉脏腑相关研究中心实验室开展，共选健康青紫兰家兔36只，体质量（2．8&;#177;0．3）kg。随机分为3组，每组12只，即电排针刺激心经腕部（“神门”区）、肘部（“少海”区）和腋部（“极泉”区）经脉主干3组。方法：每次每组各选1只同性别、体质量差小于10％的家兔，同步进行实验。在Olympus解剖显微镜（日本）下分离心上交感神经丛，埋植多股不锈钢丝双极电极，进口专用凝胶（美国产）固定后，关闭胸腔，控制肛温（39&;#177;0．5）℃，50mL／L葡萄糖等渗液静脉滴注维护2h后电针。记录分析心率变异性和心上交感神经丛放电活动的变化。主要观察指标：电针后各组动物的心率变异性、功率谱高频／低频值分析。结果：纳入家兔共3组，每组12只，均进入结果分析。电针后，各组心率变异性的总心率变异性值和心上交感神经丛放电活动频率增高，功率谱高频／低频比值下降，以电针腕部组为著，肘部组次之，腋部组最弱。结论：电针心经不同节段，均可促进心上交感神经丛放电活动，增强左心功能，且以心经腕部经脉主干与左心功能间关系最为密切。     

电针心经、小肠经对心肌缺血损伤大鼠心电图和心肌酶学的影响

目的:观察电针心经、小肠经对急性心肌缺血模型大鼠心电图和心肌酶学的影响,以验证心经与小肠经的表里经关系.方法:采用冠状动脉左降支结扎复制大鼠急性心肌缺血模型.电针刺激心经"神门-通里"或小肠经"养老-支正"段,并电针刺激肺经"太渊-列缺"段作为对照,观察急性心肌缺血模型大鼠心电图和心肌酶学变化情况.结果:与伪手术组相比,模型组、肺经组、心经组和小肠经组大鼠心电图异常率均有显著性差异(P＜0.01),而模型组、肺经组、心经组和小肠经组组间比较,差异无显著性(P＞0.05).与伪手术组相比,模型组大鼠心率下降明显(P＜0.05),心经组和小肠经组大鼠心率恢复也较明显(P＜0.05).与伪手术组比较,模型组CK和LDH值差异有显著性(P＜0.01);与模型组比较,心经组和小肠经组CK和LDH值差异有显著性(P＜0.01或0.05);与肺经组比较,心经组和小肠经组CK和LDH值差异有显著性(P＜0.01或0.05).结论:电针心经、小肠经可改善急性心肌缺血大鼠ECG,降低急性心肌缺血大鼠血清CK和LDH活性水平,对急性心肌缺血具有保护作用.     

穴位深层电刺激干预股骨颈骨折术后早期股骨头坏死的实验研究

目的探讨穴位深层电刺激干预股骨颈骨折术后早期股骨头坏死的作用机制。方法24只新西兰大白兔随机分为模型对照组、电针治疗组及穴位深层电刺激（PDES）组，按照Kenzora方法制作股骨颈骨折动物模型，治疗3个疗程后光镜观察股骨头空骨陷窝数、软骨下区血管数；检测血液生化指标钙、磷和碱性磷酸酶水平。结果PDES组钙离子浓度与钙磷乘积值均显著低于模型对照组；电针组钙离子浓度显著低于模型对照组，PDES组低于电针组；PDES组碱性磷酸酶高于电针组及对照组，与对照组比较差异显著；PDES组与对照组比较空缺骨陷凹数明显减少；软骨下区血管数与对照组比较，PDES组及电针组均明显增多。结论穴位深层电刺激对骨内的钙磷调节有明显作用，具有加速股骨颈骨折后愈合作用。     

王键治疗胸痹经验

王键是安徽中医药大学教授,新安王氏医学学术流派传承人.其针对胸痹的3种常见证型,分别采用温阳益气化痰通络法、益气养阴宁心安神法、化瘀豁痰通络止痛法予以治疗,临床疗效较好.     

不同中药复方对脑缺血再灌注大鼠凝血与纤溶相关指标影响的实验研究

目的：探讨不同的中药复方对大鼠脑缺血再灌注血浆凝血与纤溶相关指标血管性血友病因子（vWF）、组织型纤溶酶原激活物（t-PA）和组织型纤溶酶原激活物抑制物（PAI-1）的动态影响。方法：采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组、模型组、益气活血方组、镇肝熄风汤组和星蒌承气汤组,分别给予相应药物灌胃;采用酶联免疫法检测血浆vWF、tPA和PAI-1含量。结果：模型组再灌注各时间点血浆vWF、t-PA含量显著升高,PAI-1血浆含量显著下降;各治疗组再灌注各时间点血浆vWF、t-PA含量显著降低和PAI-1含量显著升高;在降低vWF方面,24 h潜阳熄风组优于化痰通腑组和益气活血组,48 h化痰通腑组优于潜阳熄风组和益气活血组,72 h益气活血组优于潜阳熄风组和化痰通腑组;在降低血浆t-PA,24 h化痰通腑组优于潜阳熄风组和益气活血组,72 h各治疗组组间比较益气活血组优于化痰通腑组和潜阳熄风组;在升高PAI-1方面,72 h各组间比较益气活血组优于化痰通腑组和潜阳熄风组。结论：不同的中药复方可以降低vWF、t-PA血浆含量和升高PAI-1血浆含量抗脑缺血再灌注损伤,72 h益气活血方作用效果最佳。     

脑络欣通和左归丸药物血清对体外培养的大鼠神经干细胞增殖分化的作用

目的 探讨脑络欣通药物血清和左归丸药物血清对体外培养的大鼠胚胎神经干细胞(neural stem cell, NSC)增殖分化的作用。方法 分别采用含10%脑络欣通药物血清和含10%左归丸药物血清的培养基培养大鼠胚胎NSC,观察其促增殖效应和诱导分化效应,应用相差显微镜和免疫荧光染色对其进行比较观察。结果 脑络欣通药物血清和左归丸药物血清均可诱导绝大多数NSC分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。此外,两者还能在一定程度上促进培养的NSC生长。前者诱导NSC分化的进程虽比后者要慢,但诱导NSC向神经元方向分化的比率较高,其分化的神经元在细胞形态学上与发育成熟的神经元更为接近;后者促进NSC生长的效应较为显著。结论 脑络欣通和左归丸均能促进体外培养的NSC生长和分化,两者作用有一定差异;益气活血治法和补肾生髓治法对NSC进行诱导分化具有一定的可行性。     

电针心经不同经脉段对急性心肌缺血家兔心功能的影响

目的 :比较电针心经腕段、心经肘段和心经肩段对急性心肌缺血家兔心功能的影响。方法 :将动物随机分为对照组、模型组和心经腕段组、心经肘段组、心经肩段组 ,以左心室内压峰值(LVP)、左心室内压变化上升最大速率 (LVPdp/dtmax)、心力环面积 (ACFL)、心肌收缩成分最大缩短速度 (Vmax)为指标 ,观察静脉注射脑垂体后叶素造成家兔急性心肌缺血心功能各指标的变化及电针对其的干预作用。结果 :电针心经腕段、心经肘段和心经肩段均能显著性地调节心功能 ,尤以心经腕段最为显著 ,而心经肩段的调节作用似较心经肘段为强 ,但两者比较差异不显著。结论 :心经腕段作为心经经脉一特定的经脉段 ,其调节心功能作用最具代表性。     

脑络欣通对局灶脑缺血/再灌注大鼠胶质原纤维酸性蛋白GFAP表达的影响

目的探讨益气活血治法之代表中药复方脑络欣通及其拆方（益气方、活血方）对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠胶质原纤维酸性蛋白GFAP表达的影响以及在不同时间点局灶性脑缺血再灌注模型大鼠GFAP蛋白表达的特点。方法将健康的Wistar大鼠120只先饲养观察3天,随机分为假手术组、模型组、益气活血方（脑络欣通）组、益气方组和活血方组5组,每组24只,1天、3天、7天三个不同时间点各8只。采用线栓大脑中动脉法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分别观察益气活血、益气、活血3种治法及其代表方药在缺血2h时分别再灌注1天、3天和7天的治疗效果;以免疫组化染色SABC法检测胶质原纤维酸性蛋白GFAP表达。结果缺血再灌注各时间点,假手术组无强阳性表达,模型组明显可见GFAP表达,与假手术组比较有显著性差异（P﹤0.01）;各治疗组GFAP阳性染色的阳性细胞总面积表达增加,与模型组比较,其中再灌注1天时无显著性差异（P〉0.05）,再灌注3天、7天时脑络欣通组和益气方组与模型组比较有显著性差异（P〈0.01或P〈0.05）;各治疗组间比较,1天无差异,3天脑络欣通组GFAP表达最高,与益气方组和活血方组比较有显著性差异（P﹤0.01）;7天各治疗组间无显著性差异（P〉0.05）。结论经过益气活血法（脑络欣通）及其拆方（益气方、活血方）干预后,脑络欣通在调节GFAP（3天上调、7天下调）表达的效应上要优于其拆方（益气方、活血方）。