流式细胞术检测抗中性粒细胞抗体方法的建立及临床初步应用

目的建立适用于临床的流式细胞术（FCM）检测抗中性粒细胞抗体（ANA）的方法,并作临床初步应用。方法采用FCM,以前向散射和侧向散射参数区分全血标本中的淋巴细胞和粒细胞,设定粒细胞门,用CD16b-藻红蛋白（PE）和CD177-别藻蓝蛋白（APC）单克隆抗体分别检测中性粒细胞中表面表达CD16b和CD177抗原细胞的百分率。用所建方法检测健康对照32名,确定参考范围,以此作为判断受检者血液中抗CD16b或CD177抗体存在与否的依据。检测外周血白细胞（WBC）总数〈4.0×109/L且中性粒细胞绝对计数（ANC）〈2.8×109/L的59例患者的CD16b和CD177百分率,并对其中中性粒细胞表达CD16b和/或CD177百分率低于参考范围（即判为相应抗体阳性）的患者给予激素治疗,观察疗效。结果健康人群中性粒细胞中表达CD16b和CD177的百分率分别为98.36%±1.53%和74.95%±11.07%,据此分别确定了健康人群中性粒细胞表达CD16b和CD177的参考范围分别为CD16b〉95.36%、CD177〉53.25%（即〉x珋-1.96s）。59例患者中有23例（39.0%）ANA阳性,其中ANC〈2.0×109/L患者的ANA阳性率（50.0%）远高于ANC〉2.0×109/L患者（27.6%）。ANA阳性患者经激素治疗后,WBC和ANC上升。结论 FCM检测抗中性粒细胞CD16b和CD177抗体是自身免疫性中性粒细胞减少症（AIN）实验简便、快捷的诊断方法,有助于AIN的诊断、鉴别诊断和疗效判断。     

卵黄抗体及其在抗感染中的应用

用抗原免疫禽类,可以从其卵黄中提取特异性卵黄抗体。随着蛋白纯化技术的发展,卵黄抗体的应用范围已越来越广泛,在基础研究、临床检测和治疗中都发挥着重要的作用。此文对卵黄抗体的免疫学特性、制作方法以及卵黄抗体在免疫诊断和抗感染中的应用作了综述。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析及SCCmec分型

目的了解上海市普陀区人民医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药情况及SCCmec型别,为预测耐药菌株的发展趋势、为临床预防和治疗MRSA感染提供理论依据。方法收集该院2012年1月至2016年12月临床分离的MRSA共380株,采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验,采用多重聚合酶链反应检测SCCmec型别。结果所有菌株对利奈唑胺、万古霉素均敏感,敏感率为100.0%;对利福平、复方磺胺甲噁唑耐药率较低,分别为5.0%和7.6%;对红霉素、左氧氟沙星、四环素高度耐药,耐药率分别是100.0%、94.2%、93.4%和90.0%;对青霉素耐药率为100.0%。380株MRSA有SCCmecⅡ型281株(73.9%),SCCmecⅢ型59株(15.5%),SCCmecⅣa型5株(1.3%),另有35株(9.2%)未能分型。结论上海市普陀区人民医院分离的MRSA标本以SCCmecⅡ型为主,具有多重耐药的特征,不同SCCmec型别的耐药谱有所差异。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a的原核表达及多克隆抗体的制备

目的 研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a (PBP2a)的原核表达,及PBP2a多克隆抗体的制备.方法 根据基因文库登录的mecA基因的编码序列,设计合成了1对寡核苷酸引物,应用PCR法从MRSA基因组中获得编码PBP2a全长的DNA,将此目的 基因片段克隆至pET32a(+)载体,转化E.coli BL21(DE3);经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,利用Ni2+亲和层析技术纯化目的 蛋白;用目的 蛋白免疫小鼠3～8次后,收获血清并鉴定.结果 成功构建了PBP2a原核表达载体,并获得了高效表达;利用纯化的蛋白制备了理想的多克隆抗体.结论 利用分子克隆技术,获得了高纯度的PBP2a蛋白并制备了多克隆抗体,为其进一步研究奠定了基础.     

小鼠B7-H4重组腺病毒的构建及鉴定

目的:利用AdEasyTM XL system构建携带小鼠B 7-H4基因的重组腺病毒,并鉴定其生物学活性.方法:以RT-PCR方法从C5 7小鼠肺组织中扩增B7-H4全长基因并克隆到T载体,然后测序鉴定.经Xhol Ⅰ和EcoR Ⅴ双 酶切后接入pshuttle-CMV穿梭载体(简称PSC),构建重组腺病毒的穿梭质粒PSC-mB7-H4 ,并电转化至BJ5183-AD-1感受态细菌,经筛选获得携带mB7-H4的重组腺病毒的质粒pmB7 -H4/Ad.将此质粒转化人胚肾细胞(AD-293)产生复制缺陷的重组腺病毒mB7-H4/Ad .以RT-PCR及Western blot方法检测被mB7-H4/Ad感染的AD-293细胞中B7-H4 mRNA和蛋 白的表达,并观察重组腺病毒感染的小鼠成纤维细胞(L929)对T细胞增殖和细胞因子表达的影响. 结果:获得序列准确的mB7-H4基因并成功构建重组腺病毒表达质 粒,转化AD-293细胞获得重组腺病毒;细胞生物学实验证实,该重组腺病毒具有抑制CD3单抗诱导的T淋巴细胞的增殖和细胞因子的分泌. 结论:成功构建具有免疫抑制功能的mB7-H4重组腺病毒.     

乳腺癌C-erbB-2基因启动子区CpG岛的甲基化状态与雄激素受体表达的相关性分析

目的探讨乳腺癌中雄激素受体(AR)与人表皮生长因子受体2(C-erbB-2)基因启动子区CpG岛甲基化状态的关系,并明确AR与乳腺癌预后的关系。方法分别采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和免疫组织化学(IHC)方法分析76例乳腺癌患者癌组织和55例乳腺良性肿瘤患者肿瘤组织C-erbB-2基因启动子区CpG岛的甲基化状态和AR的表达水平,结合临床病理资料分析AR不同表达状态与C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化水平的关系,并进行预后分析。结果 AR阳性的乳腺癌组织C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化的比例[74.58%(44/59)]显著高于AR阴性的乳腺癌组织[47.06%(8/17),P=0.032];C-erbB-2基因启动子区CpG岛的甲基化与AR蛋白的表达呈正相关(r=0.247,P=0.032),且乳腺癌AR阳性患者无瘤生存率显著高于AR阴性患者(P0.05)。结论乳腺癌组织AR蛋白的表达状态可作为乳腺癌预后转归的预测依据之一;C-erbB-2基因启动子区CpG岛的甲基化与AR蛋白的表达状态呈正相关,为乳腺癌的激素治疗及预后转归的预测提供了新的理论依据。     

lncRNA SNHG5对人类下咽癌细胞转录组学的影响及意义

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)SNHG5对人类下咽癌细胞株FaDu转录组学的影响.方法 构建rLV-hSNHG5-ZsGreen-Puro慢病毒和rLV-ZsGreen-Puro对照慢病毒,将感染rLV-hSNHG5-ZsGreen-Puro慢病毒的FaDu细胞作为rLV-SNHG5组,将感染rLV-ZsG...     

乳腺癌患者ANXA6基因的表达及其病理意义

目的探讨ANXA6基因在人乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的相关性。方法选择2006年11月—2010年12月收治并病理确诊的55例乳腺癌患者组织标本进行石蜡包埋,采用免疫组织化学方法检测55例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织中ANXA6基因的表达,以RT-PCR技术和Western印迹法验证ANXA6在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达,分析ANXA6基因表达与患者临床特征的关系。结果55例患者癌与癌旁组织中ANXA6基因的阳性表达分别为96.3%（53/55）和52.7%（29/55）,差异具有统计学意义（P<0.05）;癌组织中ANXA6与自噬相关蛋白LC3B、P62、TFEB表达均高于癌旁组织（P<0.05）。ANXA6基因在癌组织中的表达阳性率与肿瘤大小、临床病理分期、PR表达有关（P<0.05）;而与有无淋巴结转移、5年生存率、年龄、组织学分级、ER表达、HER-2表达均无关（P>0.05）。ANXA6基因在癌组织中表达阳性率与LC3B表达、TFEB表达相关（P<0.05）,与P62表达无关（P>0.05）。癌组织中ANXA6基因表达上调率与肿瘤大小、有无淋巴结转移、临床病理分期、5年生存率、年龄、组织学分级、PR表达、HER-2表达,TFEB表达有关（P<0.05）,与ER表达、LC3B及P62表达无关（P>0.05）。结论ANXA6基因在乳腺癌组织中高表达,其在癌组织中表达阳性率与肿瘤大小、临床病理分期、PR表达、LC3B表达、TFEB表达有关,其在癌组织中表达上调率与肿瘤大小、有无淋巴结转移、临床病理分期、5年生存率、年龄、组织学分级、PR表达、HER-2表达,TFEB表达有关,对于乳腺癌可能具有一定的辅助诊断价值。