B7-H4 在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究共刺激分子B7-H4 在前列腺癌中的表达情况及其临床意义.方法:应用免疫组织化学染色,检测B7-H4 分子在前列腺癌中的表达情况,并评价其与临床病理特征的关系.结果:前列腺癌组织中B7-H4 在胞浆和(或)胞膜弥漫表达,表达量显著高于正常前列腺组织(P<0.05).B7-H4在临床肿瘤分级较高患者的前列腺癌组织中,表达显著强于临床肿瘤分级较低患者的前列腺癌组织.结论:B7-H4 在前列腺癌组织中表达上调,与患者肿瘤分级密切相关.异常表达的B7-H4 在肿瘤的发生、进展中起到一定作用,有望成为肿瘤新的诊断和预后判断指标,封闭肿瘤组织中的B7-H4 有可能成为肿瘤免疫治疗的新策略.     

B7-H4在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的:制备小鼠抗B7-H4单克隆抗体后研究B7-H4在胰腺癌中的表达情况及临床意义。方法:以稳定表达B7-H4胞外段的3T3-B7-H4细胞为免疫原,免疫Babl/C小鼠;应用常规杂交瘤技术将免疫的小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,使用间接ELISA方法筛选分泌抗B7-H4单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对所获得的单克隆抗体进行亚型鉴定,使用Western blot、免疫沉淀和免疫组化等方法对单克隆抗体特异性进行鉴定;应用免疫组织化学染色检测B7-H4分子在胰腺癌中的表达情况,并评价其与临床病理特征的关系。结果:获得1株亚型为IgM、轻链为κ型的单克隆抗体,经鉴定该单克隆抗体能与B7-H4发生反应。免疫组化显示:胰腺癌组织中B7-H4在胞浆和(或)胞膜弥漫表达,表达量显著高于正常胰腺组织(P<0.05)。B7-H4在临床肿瘤分级较高患者的胰腺癌组织及有淋巴结转移患者的胰腺癌组织中表达显著增强。结论:成功获得了特异性抗B7-H4的单克隆抗体,B7-H4在胰腺癌组织中表达上调,并与患者肿瘤分级和淋巴结转移密切相关。     

小鼠B7-H4重组腺病毒的构建及鉴定

目的:利用AdEasyTM XL system构建携带小鼠B 7-H4基因的重组腺病毒,并鉴定其生物学活性.方法:以RT-PCR方法从C5 7小鼠肺组织中扩增B7-H4全长基因并克隆到T载体,然后测序鉴定.经Xhol Ⅰ和EcoR Ⅴ双 酶切后接入pshuttle-CMV穿梭载体(简称PSC),构建重组腺病毒的穿梭质粒PSC-mB7-H4 ,并电转化至BJ5183-AD-1感受态细菌,经筛选获得携带mB7-H4的重组腺病毒的质粒pmB7 -H4/Ad.将此质粒转化人胚肾细胞(AD-293)产生复制缺陷的重组腺病毒mB7-H4/Ad .以RT-PCR及Western blot方法检测被mB7-H4/Ad感染的AD-293细胞中B7-H4 mRNA和蛋 白的表达,并观察重组腺病毒感染的小鼠成纤维细胞(L929)对T细胞增殖和细胞因子表达的影响. 结果:获得序列准确的mB7-H4基因并成功构建重组腺病毒表达质 粒,转化AD-293细胞获得重组腺病毒;细胞生物学实验证实,该重组腺病毒具有抑制CD3单抗诱导的T淋巴细胞的增殖和细胞因子的分泌. 结论:成功构建具有免疫抑制功能的mB7-H4重组腺病毒.     

胰腺癌B7-H4与相关血清肿瘤标志物的预后价值研究

目的:分析胰腺癌患者肿瘤组织B7-H4表达水平与术前血清中癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)199及CA242等肿瘤标志物表达水平的相关性,同时探讨其在胰腺癌中的临床应用价值。方法:采用抗人B7-H4单克隆抗体免疫组化染色方法测定188例胰腺癌患者手术切除组织中B7-H4表达水平。同时利用电化学发光法检测术前血清中CEA、CA199及CA242浓度。结果:胰腺癌患者术前血清CEA水平与胰腺癌原发灶、淋巴结及远端转移分期(TNM)及远端转移相关(P<0.05)。胰腺癌患者术前血清CA199及CA242水平与胰腺癌患者年龄及远端转移相关(P<0.05)。CA199与术后生存期相关(P<0.05)。胰腺癌患者肿瘤组织B7-H4表达水平与血清CEA表达存在显著正相关(P<0.05),与其他肿瘤标志物之间无显著相关性(P>0.05)。在胰腺癌患者术后6个月生存的预测分析中,B7-H4染色积分的曲线下面积(AUC)明显高于CEA和CA242(P<0.05);B7-H4染色积分联合术前血清CA199的AUC明显高于术前血清CA199(P<0.05),而与B...     

小鼠B7-H4重组蛋白的表达及鉴定

目的:构建小鼠B7-H4胞外区基因的真核表达载体,转染酵母细胞以表达mB7-H4,并检测其生物学活性.方法:以mB7-H4的重组质粒为模板,在克隆引物上加入Xho I和EcoR I酶切位点,并用PCR方法扩增得到mB7-H4胞外区的基因片段,经Xho I和EcoR I双酶切后接入酵母表达载体Ppic9上,构建成Ppic9-mB7-H4重组质粒.经双酶切和核酸测序鉴定,将该重组质粒转染至酵母细胞,用PCR、Western Blot及ELISA等方法检测重组基因的表达,并鉴定表达蛋白的生物学活性.结果:转染Ppic9-mB7-H4重组质粒的酵母细胞内表达mB7-H4,诱导表达的mB7-H4能有效抑制CD3单抗活化的T淋巴细胞的增殖(相对抑制率为28.3%)和IL-2(相对抑制率为68.8%)、IL-4(相对抑制率为78.8%)、IL-10(相对抑制率为67.6%)、IFN-γ(相对抑制率为77.7%)等细胞因子的分泌.结论:成功构建了mB7-H4真核表达系统,并获得了有生物学活性的mB7-H4分子.     

B7-H4在胰腺癌中的表达及与临床病理及预后的相关性分析

目的研究B7-H4异常表达于胰腺癌组织,其表达水平与胰腺癌预后的相关性。方法收集浙江大学医学院附属第二医院2011年1月至2014年12月间胰腺癌切除手术取得的胰腺癌组织(188例),以及非肿瘤患者胰腺组织(25例)。通过免疫组织化学染色方法检测B7-H4在上述组织中的表达。结果胰腺癌组织中B7-H4表达阳性率为100%,明显高于非肿瘤患者胰腺组织(68%),且胰腺癌组织中B7-H4的表达水平明显高于对照组。同时,胰腺癌组织中B7-H4的表达水平与TNM分级、远端转移及分化显著相关。多因素生存分析显示,B7-H4表达水平、远端转移以及化疗为独立的胰腺癌预后指标。结论 B7-H4在胰腺癌组织中异常表达,为独立的胰腺癌不良预后指标,有望成为胰腺癌治疗的免疫靶点。     

甘草酸单铵对脂多糖致小鼠急性肺损伤的保护作用

采用脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)气道滴入诱导小鼠急性肺损伤(acute lung injury，ALI)模型，研究甘草酸单铵(monoammonium glycyrrhizinate，MAG)对ALI的防治作用及其机制。雄性ICR小鼠随机分为生理盐水(NS)对照组、MAG 3、10 及30 mg·kg^-1组、LPS组、地塞米松(dexamethasone，DXM) 5 mg·kg^-1组。MAG各组气道滴入LPS前1 h及滴入后3 h各给药1次，DXM组气道滴入LPS前1 h给药1次。LPS气道滴入后6 h处死动物，测定各组的肺湿重/干重比、肺通透性、肺组织中性粒细胞髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)含量、ELISA法检测肺组织匀浆TNF-α、IL-10含量，常规细胞形态学检测中性粒细胞在支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中的比例和肺组织病理改变。结果表明，MAG剂量依赖性减轻气道内滴入LPS诱导的小鼠ALI程度，降低肺湿重/干重比及肺组织伊文斯蓝的渗出，降低BALF中白细胞总数和中性粒细胞数比例，抑制组织MPO的释放，降低肺组织匀浆TNF-α的含量，增加肺组织IL-10的释放。以上结果提示，MAG可能通过调节TNF-α/IL-10的平衡而有效保护脂多糖诱导的急性肺损伤。     

和厚朴酚对过氧化氢诱导人晶状体上皮细胞凋亡的保护作用

目的：探讨中药厚朴活性成分和厚朴酚对过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的保护作用及其作用机制。方法：人晶状体上皮细胞（SRA01-04）用50μmol/L的过氧化氢诱导凋亡,同时加入不同浓度（0、5、10、20μmol/L）的和厚朴酚,用MTS法检测细胞增殖活性,用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,用实时荧光定量PCR以及Western-blot法分析caspase3、caspase9和bcl-2的表达。结果：过氧化氢能明显诱导人晶状体上皮细胞凋亡（58.66%±7.36vs2.84%±0.49%,P〈0.01）,促进caspase3和caspase9在基因转录水平和蛋白水平的表达;和厚朴酚能剂量依赖性拮抗过氧化氢对人晶状体上皮细胞的增殖抑制作用以及凋亡诱导作用,抑制caspase3、caspase9的表达和活性,促进bcl-2的表达。结论：和厚朴酚对氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞凋亡具有保护作用,提示可能对白内障的发生具有潜在的防治作用。