基因芯片对慢性丙型肝炎患者血清病毒基因分型的应用研究

目的探讨基因芯片对慢性丙型肝炎患者病毒基因分型的应用,分析丙型肝炎病毒（HCV）基因亚型与实验室指标的关系。方法应用基因芯片检测147例HCV-RNA阳性慢性丙型肝炎患者血清病毒基因亚型,并对部分样本进行RT-PCR扩增测序验证;同时检测血清HCV-RNA、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、谷氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBil）等相关指标并进行分析。结果 147份HCV患者血清样本中1b型120例（81.6%）;2a型13例（8.8%）;3a型1例（0.7%）,6a型4例（2.7%）,未分型9例（6.1%）;基因芯片对基因亚型检出率为93.9%,分型结果与测序符合率100%。1b型患者与非1b型患者比较,HCV-RNA、ALT、AST、TBil等各指标差异均无统计学意义（P均〉0.05）。结论基因芯片技术适合对临床样本丙肝病毒基因亚型的快速检测,本地区慢性丙肝患者病毒基因亚型以1b型为主,其防治工作值得引起相当重视。     

硼替佐米抑制核因子-κB活化对LOVO细胞增殖的影响

目的：探讨硼替佐米对核因子-κB（NF-κB）活化的干预作用及对人LOVO细胞增殖的影响。方法：体外培养人LOVO结肠癌细胞并给予不同浓度的硼替佐米,以Western blot和ELISA法分别检测IκBα和NF-κB的表达;以MTT法和Annexin V-FITC/PI双色标记法分别检测细胞增殖和细胞凋亡的变化。结果：硼替佐米作用LOVO细胞后,胞浆IκBα和NF-κB的水平逐渐上升,而胞核NF-κB的水平明显降低（P〈0.01）,并呈一定的浓度依赖性,高浓度时作用最明显（P〈0.01）;硼替佐米能明显抑制LOVO细胞的增殖,并呈一定的剂量和时间依赖性。随着硼替佐米浓度的上升,细胞凋亡率明显增加（P〈0.01）。结论：硼替佐米通过抑制IκBα的降解能有效地干预NF-κB活化,抑制LOVO细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡。     

EV71、CA16及通用型肠道病毒实时荧光定量PCR诊断试剂盒的研发

目的 研制一种新的含竞争性内标引物,能同时检测EV71、CA16及通用型肠道病毒的四重实时荧光定量PCR诊断试剂盒,用于手足口病的临床诊断及流行病学监测.方法 设计特异性的EV71型、CA16型及其他型肠道病毒和内参基因的引物,改进病毒核酸提取方法,优化实时荧光定量PCR检测体系,并研究产品的准确度、稳定性、精密度和扩增效率和检测线性范围.结果 本试剂盒的引物和探针特异性好,试剂盒采用的的病毒RNA抽提效果与QIAGEN公司QIAamp Viral RNAmini Kit抽提效果相当,但具有更低的试剂成本.优化引物探针浓度分别为0.2μmol/L的上下游引物浓度、0.06 μmol/L的通用探针浓度、0.08 μmol/L的EV71分型探针浓度和0.08μmol/L的CA16分型探针浓度.产品具有较好的稳定性和良好的准确度、精密度,CA16、EV71和肠道病毒通用型对引物的扩增效率分别是106％、101％和105％,线性检测范围是109拷贝/μl ～ 102拷贝/μl.结论 采用四重荧光定量PCR技术开发的能同时检测EV71、CA16、其他肠道病毒和内标的手足口病诊断试剂盒具有良好的准确性、稳定性、精密度和扩增效率等,具有很好的临床应用价值.     

慢性乙型肝炎病毒感染者乙型肝炎病毒S基因变异分析

目的探讨湖州地区慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者乙型肝炎病毒S基因序列变异状况,了解该地区乙型肝炎病毒S基因的病毒学特点。方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增湖州地区40例HBV-DNA阳性的慢性乙型肝炎病毒感染者S基因,并对扩增产物进行测序,将测序结果与GenBank中的标准序列进行比对分析。结果 40例HBV感染者中B基因型26例,C基因型14例,血清学分型adw型25例,adr型13例,ayw和ayr各有1例;随无症状携带者、慢性肝炎、肝硬化、肝癌疾病的进展,氨基酸变异有逐渐增加的趋势,肝硬化、肝癌患者与携带者、慢性肝炎患者比较,S基因变异率在主要亲水区(MHR)、a决定簇以及第一茎环区差异均有统计学意义(P<0.05);126位点氨基酸变异在较为严重的肝脏疾病中发生率较高(P<0.05)。结论湖州地区乙型肝炎病毒血清型以adw型和adr型为主,S基因变异可能与肝病严重程度相关,特别126位点变异可能与较为严重肝病有一定相关性。     

人乳头状瘤病毒23种基因型的分子流行病学调查

目的调查慢性宫颈炎患者人乳头状瘤病毒(HPV)感染状况及其基因型的分子流行病学特点。方法采用基因芯片技术对1268例慢性宫颈炎患者及623名健康体检者宫颈分泌物进行了18种高危型HPV基因型和5种低危型HPV基因型的检测,分析其基因型的流行病学特点。结果慢性宫颈炎患者HPV的感染率为33.91%,显著高于健康体检者的16.37%,差异有统计学意义(P<0.01);慢性宫颈炎患者共检测出20种基因型,分别为HPV6、11、43、44、16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73;高危型HPV感染率相当高,占23种基因型的82.93%,以HPV16最高,其次为HPV58、HPV18、HPV56;低危型感染率为17.07%,以HPV11最高,其次为HPV6;健康体检者高危型HPV的感染率要低于慢性宫颈炎患者,差异有统计学意义(P<0.01),基因型的分布基本相同;慢性宫颈炎患者HPV重复感染率为25.35%,与健康体检者的23.53%比较,差异无统计学意义;以高危型二重感染类型为主,而健康体检者以低危型+高危型的二重感染类型为主;慢性宫颈炎患者HPV感染率>50岁组最高,健康体检者HPV感染率以20~30岁组最高。结论慢性宫颈炎患者HPV的感染率较高,以高危HPV基因型为主,加强其HPV感染的筛查、监测与治疗,有助于宫颈癌的防治。     

血浆hs-CRP、BNP、vWf对心源性脑梗死复发的预测作用

目的探讨血浆超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、血浆脑钠素(BNP)、血浆血管性血友病因子(vWf)对心源性脑梗死复发的预测作用.方法通过对急性心源性脑梗死(CE)50例检测血浆hs-CRP、BNP、vWf水平,进行1年以上的随访,分别按血浆hs-CRP水平的中位数分为低hs-CRP组(hs-CRP≤3.55mg/L)和高hs-CRP组(hs-CRP>3.55mg/L),按血浆BNP水平的中位数分为低BNP组(BNP≤322.80pg/dl)及高BNP组(BNP>322.80pg/dl),按血浆vWf水平的中位数分为低vWf组(vWf≤33.52 ng/ml)及高vWf组(vWf>33.52ng/ml),分别进行两两比较,观察急性期hs-CRP、BNP、vWf水平对CE复发的预测作用.结果50例CE患者排除他因死亡3例,其余47例中复发11例,复发率23.4%.低hs-CRP组31例,复发8例(25.8%),高hs-CRP组16例,复发3例,(18.8%),比较两组间基础情况均无统计学意义(P>0.05),高、低hs-CRP组的复发生存曲线比较无统计学意义(P>0.05).低BNP组34例,复发4例(11.8%),高BNP组13例,复发7例(53.8%),两组间基础情况比较无统计学意义(P>0.05),高、低BNP组的复发生存曲线比较有统计学意义,高BNP组随时间复发率明显高于低BNP组(P<0.05).低vWf组32例,复发8例(25%),高BNP组15例,复发3例(20%),两组间基础情况比较无统计学意义(P>0.05),高、低vWf组的复发生存曲线比较无统计学意义(P>0.05).结论脑梗死急性期血浆BNP的水平可能对CE的复发有一定预测意义,而血浆hs-CRP、vWf水平无明显预测CE复发的作用.     

慢性肝病患者血清MMP-2的变化及与肝纤维化的关系

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）和乙型肝炎后肝硬化患者血清中的基质金属蛋白酶．2（MMP．2）的变化及其与肝纤维化的关系。方法用ELISA法检测75例CHB患者、41例乙型肝炎后肝硬化患者及30例健康献血员血清MMP-2含量，用放射免疫法检测透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、IV型胶原（CⅣ）的含量，分析MMP-2与肝纤维化指标之间的相关性。结果CHB中度、CHB重度、肝硬化A级、B级、C级患者血清中MMP-2均明显高于正常对照组（P均〈0．01），且肝硬化C级〉肝硬化B级〉肝硬化A级〉CHB重度〉CHB中度〉CHB轻度（P均〈0．05），与HA、LN、CIV呈显著性正相关（r分别为0．913，0．845，0．897，P〈0．01）。结论血清MMP-2在慢性肝病患者肝纤维化过程中进行性升高，并与肝纤维化指标呈显著性正相关。MMP-2可作为评价肝纤维化程度的指标。     

基因芯片对外阴尖锐湿疣患者宫颈脱落细胞中HPV亚型的检测

目的探讨外阴尖锐湿疣（CA）患者宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染亚型状况，为临床尖锐湿疣诊断及宫颈癌的防治提供实验依据。方法采用基因芯片方法检测77例CA患者和同期无外阴CA的64例对照宫颈脱落细胞中HPV—DNA亚型（包括5种低危型和18种高危型）。结果77例CA患者标本中检出HPV阳性64例，阳性检出率为84．4％，高于对照组的18．75％（P〈0．01），共检测出12种HPV基因型别，其中低危型（HPV6、11、43、44）感染21例，占32．8％；高危型（HPV16、18、31、33、45、56、58、73）感染30例，占46．9％；高低危同时感染13例，占20．3％。结论基因芯片是一种敏感性高，特异性好，适合临床HPV分型检测的方法。外阴CA患者宫颈HPV感染较为普遍，且高危型感染占有相当大的比例，因此对外阴CA患者在治疗疣体同时需进行HPV-DNA检测，必要时需进行相应治疗，以期较低宫颈癌的发病风险。     

450例宫颈活检组织中人乳头瘤病毒的分布特征

[目的]了解阴道镜检查患者的宫颈活检组织中HPV的感染率和亚型分布。[方法]对宫颈脱落细胞学异常的患者450例进行阴道镜下定位活检。活检组织同时行HPV基因分型和病理诊断,HPV基因分型采用斑点杂交方法进行。[结果]在450例宫颈活检患者中,其HPV感染率为65.3%。在HPV-DNA阳性患者中,检出率最高的HPV-16占36.7%,依次HPV-58为22.1%、HPV-18为18.7%、HPV-52为16.0%。在宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中HPV-DNA阳性率分别为55.6%、69%、82.7%和88.9%。在宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ,CINⅢ组织中均检测到HPV-16、-58、-18和-52。[结论]本研究中的宫颈活检组织中不仅检测到HPV-16和-18,还检测到HPV-58和-52感染,后者的发现为开发宫颈癌多价复合型疫苗提供了事实依据。     

腺苷脱氨酶检测对结核性脑膜炎诊断的临床价值

目的评价脑脊液中腺苷脱氨酶(ADA)检测对结核性脑膜炎诊断的应用价值。方法采用酶显色法检测102例4组病例(结核性脑膜炎组30例,化脓性脑膜炎组34例,病毒性脑膜炎组15例,头痛症状组23例)脑脊液中ADA的活性水平。结果30例结核性脑膜炎组脑脊液中ADA活性明显增高,ADA6.0U/L26例,与化脓性脑膜炎组比较差异有统计学意义(P0.01),敏感性为86.7%(26/30),特异性为91.7%(66/72)。化脓性脑膜炎组和病毒性脑膜炎组与头痛症状组(对照组)比较差异也具有统计学意义(P0.05)。结论检测脑脊液中ADA的活性对于结核性脑膜炎诊断和鉴别诊断有重要的临床价值。