排序方式: 共有185条查询结果,搜索用时 112 毫秒
1.
为了有效、准确地检测霍乱弧菌,在某地水样泻患者的粪便中分离4株O139霍乱弧菌,经对分离株的生物学特性、血清学及药物敏感性进行研究,并与O1群霍乱弧菌进行比较。结果表明,O139霍乱弧菌具有O1群同样的生化特性,但不与O1群霍乱弧菌抗血清凝集,仅与O139霍乱弧菌抗血清在玻片上呈强凝集,试管凝集滴度为1:640~1:2560,所有菌株都使鸡红细胞凝集,对羊红细胞溶血的作用可变。所有菌株对霍乱O1群特异的mukherjee's噬菌体有抗性,对O/129多粘菌素B等药物耐药;而对红霉素、环丙氟哌酸等抗生素敏感。O139与O1群霍乱弧菌的不同特征,可作为鉴别的参考依据,但由于观察的菌株尚少,有待进一步研究。 相似文献
2.
丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子序列的确定及转录活性的鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(core)反式激活基因HCTP4基因序列表达的调控机制。方法:选取翻译起始密码子ATG上游44l bp的DNA序列为启动子序列,应用聚合酶链反应技术(PCR),以肝母细胞瘤细胞系HepG2基因组DNA为模板,扩增该启动子DNA片段,将其克隆至pCAT3中,构建pCAT3-HCTP4-promoter报告基因表达载体,以该质粒转染HepG2细胞,用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测报告基因编码产物氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果:发现质粒pCAT3-HCTP4-promoter能够指导CAT的表达,吸光度(A值)是pCAT3对照质粒的5倍。结论:本研究克隆的启动子DNA序列具有转录活性,这一结果为研究HCTP4的调节机制,进一步阐明丙型肝炎病毒核心蛋白的作用机制奠定了基础。 相似文献
3.
丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活作用的研究 总被引:1,自引:1,他引:1
0引言 丙型肝炎病毒(HCV)是1989年应用分子生物学技术克隆成功的一个RNA病毒,属黄病毒科,可引起慢性肝炎、肝硬化及肝细胞肝癌,目前有1.7亿人感染,干扰素联合利巴韦林是其治疗方案,但是疗效不佳[1-9].目前世界各国都在积极研究其发病机制,探索新的治疗措施.但由于HCV的宿主范围较窄,只能在人及黑猩猩中繁殖,为研究带来一定困难.HCV是怎样与宿主细胞相互作用的,世界上进行了广泛的研究. 相似文献
4.
人源抗丙型肝炎病毒包膜蛋白E2单链抗体的研究 总被引:7,自引:0,他引:7
目的 研制抗丙型肝炎病毒包膜蛋白E2(HCVE2)的人源噬菌体单链抗体,并探讨其临床价值。方法 以重组的HCVE2为固相抗原,利用亲和筛选的原理,从噬菌体抗体库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验(ELISA)和DNA序列分析。获得HCVE2的人源单链抗体;用该抗体对10例石蜡包埋的丙型肝炎患者肝组织进行免疫组织化学鉴定。结果 ELISA结果表明,制备的HCVE2人源单链抗体(吸光度值A450为1.88)能与HCVE2抗原特异性结合,免疫组织化学结果表明,该抗体能够特异性识别丙型肝炎患者肝组织HCVE2抗原,与正常肝组织及乙型肝炎病毒(HBV)抗原均无交叉反应。结论 此法制备的单链抗体亲和性好,特异性强,且制备方法简便,周期短,为HCVE2病原的检测提供了新的有效的试剂。 相似文献
5.
6.
目的 丙型肝炎病毒(HCV)的非结构蛋白5A(NS5A)是一种具有显著反式激活作用的病毒蛋白质。为了探索HCV NS5A病毒蛋白反式激活作用的新的靶基因,我们应用抑制性消减杂交(SSH)技术对于转染和未转染的肝母细胞瘤细胞系HepG2进行分析。研究结果将有助于阐明HCV感染相关疾病的发病机制。方法 以HCV NSSA表达质粒peDNA3.1(-)-NSSA转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRNA并进行SSH分析。对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性,利用表达序列标签(EST)序列的搜索和比对,进行电子拼接。根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新型基因序列。结果 结果从HepG2细胞提取总RNA,多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,测序证实,命名为NSSATP8在GenBank中注册,注册号为.AF529369.NSSATP8基因的编码序列全长为1449(nt),编码产物由483个氨基酸残基(aa)组成。结论 HCV NS5A反式激活新型靶基因NSSATP8筛选与克隆,进一步研究HCV NS5A反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础。 相似文献
7.
目的建立慢性乙肝患者微量石蜡包埋肝组织共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)定量检测方法。方法以37例慢性乙肝患者甲醛固定石蜡包埋肝组织为研究对象,提取肝组织HBV DNA,经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)消化后,利用滚环扩增加跨缺口实时荧光PCR扩增技术检测肝组织中HBV cccDNA含量,以β-actin为内参照。通过已知浓度的模板DNA进行梯度稀释鉴定该方法的灵敏度,并对该方法进行批内和批间重复性检测。应用该方法分析37例慢性乙肝患者肝组织HBV cccDNA与血清总HBV DNA、肝组织总HBV DNA的关系,以及肝组织HBV cccDNA和HBV DNA与血清HBeAg表达之间的关系。结果成功建立了微量石蜡包埋肝组织HBV cccDNA的定量检测方法,该方法具有较好的特异性、灵敏度和稳定性。HBeAg阳性者肝组织中cccDNA含量明显高于HBeAg阴性者,HBV cccDNA水平与血清总HBV DNA水平(R2=0.48,P=0.042)及肝组织总HBV DNA水平(R2=0.63,P=0.001)呈正相关。结论该方法可特异灵敏地定量检测微量石蜡包埋组织切片中的HBV cccDNA。 相似文献
8.
40例乙型肝炎患者HBV逆转录酶基因耐药突变分析与表达载体构建 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 分析40例慢性乙型肝炎患者血清中HBV逆转录酶区基因耐药相关突变,构建突变基因重组表达载体用于表型耐药分析.方法 从服用抗HBV核苷(酸)类似物的患者血清中提取病毒DNA,PCR扩增HBV RT全长基因,克隆到pGEM-Teasy载体中,随机挑选3~5个克隆进行DNA序列测定,以DNASTAR软件分析RT基因内与核苷(酸)类似物耐药相关的常见突变位点.用Xho Ⅰ和Nco Ⅰ双酶切pGEM-Teasy-RT及pTriEx-HBV(C)构建1.1表达载体,测序正确后转染Huh7细胞,检测HBsAg和HBeAg表达水平.结果 40例患者均分别检出拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦耐药相关的单一或联合突变;成功克隆了96条HBV RT基因,分别带有上述核苷(酸)类似物耐药相关变异的序列;挑选主要突变组合形式的40条RT基因构建pTriEx-HBV(C)1.1表达载体,转染Huh7细胞48 h后在培养上清中检测到HBsAg和HBeAg,表明表达载体构建成功.结论 本研究成功进行了临床患者HBV耐药相关突变分析与突变体重组表达载体构建,为进行表型耐药分析打下了基础. 相似文献
9.
一种高效扩增人T细胞受体β链可变区基因的方法建立 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:建立一种高效扩增人T细胞受体(TCR)β链可变区(Vβ)基因的方法.方法:根据TCR Vβ26个亚家族基因序列特点设计扩增Vβ基因的上游内引物34条、上游外引物37条, 并将内、外上游引物各分为8个简并组.在恒定区(C区)设计下游内、外和测序引物各1条以及扩增Cβ基因的上游引物1条.提取细胞RNA, 用PolyA介导反转录后, 采用巢式PCR扩增正常人CD8 T细胞TCR Vβ26个亚家族基因, 并用Jurkat T淋巴瘤细胞作为对照.用T-easy载体克隆RT-PCR 产物, 对克隆基因进行测序.结果:从正常人的CD8 T细胞中扩增到所有TCR Vβ亚家族基因, 克隆后测序与相应的参考序列同源.从Jurkat细胞扩增出TCR Vβ8基因, 经测序验证与文献报道一致, 且最少可从10个细胞提取的RNA模板中扩增成功.结论:建立的巢式RT-PCR方法可以高效、广谱地扩增人TCR Vβ基因, 为进一步进行抗原特异性细胞毒T淋巴细胞的TCR克隆和功能研究打下了良好基础. 相似文献
10.
丙型肝炎病毒复制模型系统 总被引:2,自引:3,他引:2
0 引言丙型肝炎是严重威害人民生命健康的疾病之一,其慢性率高,肝硬化及原发性肝癌的发生率高.然而,迄今为止仍无令人满意的治疗手段,干扰素单用或联合用病毒唑治疗总体应答率比较低.阻碍人们对丙型肝炎病毒(HCV)深入研究的原因之一是缺乏一个能高效支持病毒复制的可靠的模型,近十几年来人们为寻找合适的模型进行了不懈的努力,取得了可喜的成就,现就这方面的研究成果综述如下. 相似文献