CCR7基因载体的构建及其在肺腺癌H157细胞的稳定表达

目的 构建人CCR7基因真核表达质粒,获得稳定表达CCR7蛋白的H157细胞.方法 应用逆转录PCR法(RT-PCR)自人肺腺癌标本中扩增出CCR7编码区序列,定向克隆至载体pEGFP-N1中构建质粒pEGFP-CCR7,采用脂质体介导的基因转染技术将重组质粒DNA导入肺腺癌H157细胞中,加入G418对细胞进行筛选,...     

人肺癌组织线粒体ATPase 6基因突变研究

目的：了解人肺癌组织ATPase6基因变异,探讨线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）突变与肿瘤发生的关系。方法：采用酚-氯仿法提取肺癌组织总DNA,用PCR产物直接测序方法,对37例肺癌组织mtDNA ATPase6基因序列进行分析,运用DNAStar软件将所得序列与mtDNA剑桥修订序列进行对照。结果：共发现28个碱基序列变异,没有检测到新的多态性位点,各亚型间在ATPase6基因碱基变异率没有显著性差异。在24例肺癌病例的ATPase6基因中检测到了碱基突变,突变率为64.8%。结论：在肺癌组织中存在ATPase6基因的高频率变异,这种变异可能在肺癌发生、发展中发挥重要作用。对ATPase6基因突变的进一步研究将有助于评价肺癌的DNA损伤和恶性程度,进一步研究这些变异对细胞功能的影响可能有助于阐明线粒体在肿瘤发生中的作用。     

老年非小细胞肺癌合并慢性阻塞性肺病患者的临床特征

目的 探讨老年非小细胞肺癌(NSCLC)合并慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的临床特点、治疗策略及预后,为临床诊治状况提供合理建议.方法 回顾性收集2000年1月~2015年6月之间,在解放军总医院老年病区就诊的年龄在60以上,新诊断NSCLC并COPD的患者的临床资料.主要收集的临床数据包括:吸烟习惯,肺功能检测,起始治疗策略,TNM分期,主诉症状,合并疾病和实验室化验等.应用COX比例风险回归模型进行多因素分析.结果 回顾性总结200例NSCLC患者,其中107例(53.5%)通过吸入支气管扩张剂并通过肺功能测试,确诊合并COPD,纳入本研究.全组患者中位生存时间45.8月,1、3、5、10年生存率分别为80.4%、55.4%、41.0%、20.0%.分层分析显示COPD Gold分级为1度和2度患者的总生存时间显著长于Gold 3度和4度的患者(Gold 1 vs.3/4:51.7月vs 16.9月,P=0.020;Gold 2 vs 3/4:43.1月vs 16.9月,P=0.043).利用Cox比例风险回归模型进行单因素和多因素分析显示,年龄增大,Gold分级越重,治疗3个月内Gold分级未改善,TNM分期越晚(Ⅲ和Ⅳ期),病理类型为鳞癌,起始治疗非手术,以及主诉症状为咳嗽和较高的血清CEA值是影响生存预后的独立危险因子.结论 研究发现影响本组老年NSCLC-COPD患者生存预后的因素有很多,其中COPD Gold分级越重,治疗3个月内Gold分级未改善是其中的独立危险因子.     

人骨肉瘤组织细胞色素b基因序列分析

目的 了解人骨肉瘤组织细胞色素b(cytochromeb1Cytb)基因变异，探讨线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA）突变与肿瘤发生的关系。方法 提取骨肉瘤组织总DNA，PCR扩增细胞色素b基因，产物经DNA自动测序进行分析。结果 20例骨肉瘤组织共有10例发生了细胞色素b基因突变，阳性率为50％。共检测到13个新的突变，并有3个突变热点：nt 14783T→C突变，nt 15043G→A突变和nt 15301G→A突变。各亚型之间的碱基变异率相比较差异不存在显著性意义。结论 在骨肉瘤组织中存在细胞色素b基因的高频率变异，这种变异可能在骨肉瘤发生、发展中发挥重要的作用。进一步研究这些变异对细胞功能的影响可能有助于阐明线粒体在肿瘤发生中的作用。骨肉瘤各亚型在形态学上的差异可能是由线粒体DNA其它区域或核基因组的改变引起的。     

人骨肉瘤组织线粒体DNA控制区PCR-RFLP分析

目的比较分析人骨肉瘤组织mtDNA控制区的序列和正常人的差异.方法用ApaⅠ,AvaⅡ,BamHⅠ,EcoRⅤ,HaeⅢ和KpnⅠ共6种限制性内切酶,对20例骨肉瘤组织进行了PCR产物限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析.结果 20例骨肉瘤组织DNA均扩增出长1 451 bp的线粒体控制区特异性目的片段,没有发现长度多态性.8例骨肉瘤组织在mtDNA 16 519位核苷酸处发生了T→C的突变,占40%(8/20),其中骨母细胞型4例,占40%(4/10),软骨母细胞型2例,占40%(2/5),纤维母细胞型2例,占40%(2/5),各亚型之间没有显著性差异(P＞0.05);7例组织第16 132位核苷酸处的A缺失,占35%(7/20),其中骨母细胞型3例,占30%(3/10),软骨母细胞型2例,占40%(2/5),纤维母细胞型2例,占40%(2/5),各亚型之间没有显著性差异(P＞0.05);4例组织既有16 519位核苷酸处T→C的突变,又有16 132位A的缺失,占20%(4/20).这两种突变在20例骨肉瘤病例以及各亚型中占的比例均显著高于正常人群相应位点的多态性变异.结论这两种突变在骨肉瘤细胞mtDNA中发生率较高,可能在骨肉瘤的发生发展中发挥重要的作用.     

CCR7活化与人结肠癌SW620细胞的体外增殖、趋化与侵袭的关系

目的研究CCR7活化对结肠癌SW620细胞体外增殖、趋化与侵袭活性的影响。方法MTT法和软琼脂细胞集落培养观察CCR7活化对细胞增殖的影响，Boyden小室法检测CCR7活化对SW620细胞趋化和侵袭活性的影响。结果和对照组相比CCL21组细胞增殖数量、软琼脂细胞集落数和穿过Boyden小室膜的细胞数均显著增加（P〈0．01）。结论CCR7活化能够促进结肠癌SW620细胞的体外增殖、趋化与侵袭，其可能参与了结肠癌淋巴结转移的过程。进一步研究CCR7在结肠癌中的作用将有助于阐明结肠癌淋巴结转移的机制。     

CCR7在非小细胞肺癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的 检测CCR7在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达,并分析其与肺癌临床病理参数间的关系,探讨CCR7在NSCLC淋巴结转移中的作用.方法 选用65例NSCLC临床切除组织石蜡标本,以免疫组化SP法检测CCR7蛋白的表达.结果 65例肺癌组织中,CCR7阳性表达37例,阳性率为56.9%(37/65),且其表达与淋巴结转移存在非常显著相关性(P<0.01).结论 CCR7在NSCLC组织中高表达,且其表达与NSCLC淋巴结转移密切相关.     

线粒体DNA控制区研究进展

哺乳动物线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)控制区由中央保守区、ETAS区和CSB区构成。近十年的研究发现线粒体基因组的缺陷和衰老、肿瘤、神经退行性疾病、肌病、心肌病以及糖尿病的关系密切。由于控制区调控整个线粒体DNA的复制和转录,因此,该区的碱基突变可能引起线粒体DNA复制和转录速度加快,造成突变的线粒体DNA相对增多,经过长期的累积可能导致肿瘤的发生。过去的研究主要注重线粒体的形态结构和能量代谢的异常,近年来研究发现控制区某些区段的突变率是核基因组的100～200倍。因此,控制区的突变在肿瘤发生中的作用和地位越来越受到重视。mtDNA的拷贝数远高于nDNA,它的突变较容易被检测到。因此,寻找与特定肿瘤相关的特异性mtDNA控制区突变成为近年来研究的热点之一。     

线粒体DNA控制区研究进展

哺乳动物线粒体DNA（mitoehondrial DNA，mtDNA）控制区由中央保守区、ETAS区和CSB区构成。近十年的研究发现线粒体基因组的缺陷和衰老、肿瘤、神经退行性疾病、肌病、心肌病以及糖尿病的关系密切。由于控制区调控整个线粒体DNA的复制和转录，因此，该区的碱基突变可能引起线粒体DNA复制和转录速度加快，造成突变的线粒体DNA相对增多，经过长期的累积可能导致肿瘤的发生。过去的研究主要注重线粒体的形态结构和能量代谢的异常，近年来研究发现控制区某些区段的突变率是核基因组的100～200倍。因此，控制区的突变在肿瘤发生中的作用和地位越来越受到重视。mtDNA的拷贝数远高于nDNA，它的突变较容易被检测到。因此，寻找与特定肿瘤相关的特异性mtDNA控制区突变成为近年来研究的热点之一。     

CCL21/CCR7轴促进人肺癌A549细胞的趋化与侵袭

目的：研究CCL21/CCR7轴对肺癌A549细胞定向趋化与侵袭活性的影响.方法：RT-PCR法从临床肺腺癌标本中扩增出CCR7编码区序列,定向克隆至载体pEGFP-N1中,稳定转染A549细胞,Boyden小室法检测转染前后A549细胞对CCL21的趋化和侵袭活性的改变.结果：CCL21作用下多聚碳酸酯膜背面的转染后A549细胞数明显多于转染前的A549细胞数.结论：CCL21/CCR7轴能够促进A549细胞的趋化与侵袭,其可能参与了肺癌淋巴结转移的过程.进一步研究CCL21/CCR7在肺癌中的作用将有助于阐明肺癌淋巴结转移的机制.