HRE增强hTERT启动子-tk/GCV基因系统对缺氧环境肿瘤细胞的杀伤作用

目的：探讨缺氧反应元件(HRE)增强hTERT启动子-tk/GCV逆转录病毒基因系统对缺氧环境肿瘤细胞的体外杀伤作用。 方法：构建由HRE缺氧反应元件修饰的hTERT杂合启动子和hTERT单一启动子引导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因表达的重组逆转录病毒载体,在脂质体介导下分别转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆。将重组病毒感染人肺癌细胞SPC-A1和人肝癌细胞Bel-7402,G418筛选出抗性克隆肿瘤细胞。实验分为对照组、SPC-A1/tk组和Bel-7402/tk组。在缺氧处理条件下,MTT法检测前体药物丙氧鸟苷(GCV)对SPC-A1/tk和Bel-7402/tk细胞的杀伤效应,流式细胞仪检测其细胞凋亡率和细胞周期的变化。 结果:与对照组比较,缺氧环境培养的SPC-A1/tk和Bel-7402/tk细胞对GCV的敏感性明显增强,其中细胞凋亡率明显升高（P<0.001）,细胞周期各期细胞数有所减少（P<0.05）。与hTERT启动子引导的tk基因系统组细胞比较,［HRE］hTERT杂合启动子引导的tk基因系统组肿瘤细胞存活率更低（P<0.01）,诱导肿瘤细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,G₁期和^G0期细胞数有所增高（P<0.05）,S期细胞数减少（P<0.05）。结论：HRE能增强hTERT启动子-tk/GCV自杀基因系统对缺氧环境中肿瘤细胞的体外杀伤作用。     

白鲜皮中白鲜碱的分离及抗炎活性

目的:提取分离白鲜碱单体,对白鲜皮醇提物及白鲜碱单体进行抗炎效果检测.方法:采用高速逆流色谱分离的方法分离得到白鲜碱单体;利用小鼠耳廓肿胀及小鼠腹腔毛细血管渗透性实验确定待试物抗炎活性.结果:选择正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(1∶1∶1∶1)溶剂系统对白鲜皮醇提物进行分离,经HPLC检测,所分离白鲜碱纯度达98％.白鲜皮粗提物的各剂量组可显著抑制由二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀,抑制率分别为44.26％,52.46％,44.26％,差异显著(P＜0.05);白鲜碱中剂量组对小鼠耳廓肿胀亦有抑制作用,抑制率为25.00％,且差异显著(P＜0.01);但在抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管渗透性增高方面,低剂量组效果不明显.结论:高速逆流色谱分离白鲜碱,简单快速易于操作,且具有较好的分离效果;白鲜皮醇提物及白鲜碱单体具有很好的抗炎作用,不同抗炎模型对抗炎效果表现出一定的差异性.     

高速逆流色谱法分离白鲜皮中化学成分条件的优化

目的优化高速逆流色谱分离白鲜皮中的化学成分。方法选择正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水(1∶1∶1∶1,V/V)系统对白鲜皮85%乙醇提取物进行分离,上相作为固定相,下相作为流动相,流速为1.3 ml/min,仪器转速1 200 r/min。结果分离得到两个单体化合物白鲜碱和黄柏酮,经高效液相(HPLC)检测纯度均达到99%以上。结论该方法简单、快速、容易操作,可为提纯制备高纯度的化学对照品提供新途径。     

罗布麻叶总黄酮抗抑郁作用及其机制研究

目的 探讨罗布麻叶总黄酮的抗抑郁作用及与多巴胺能系统相关的可能机制.方法 采用经典的小鼠强迫游泳和悬尾抑郁模型,观察罗布麻叶总黄酮的抗抑郁作用.同时观察多巴胺D1受体阻滞剂SCH23390、D2受体阻滞剂舒必利对小鼠强迫游泳和悬尾试验中罗布麻叶总黄酮抗抑郁作用的影响,研究罗布麻叶总黄酮抗抑郁的作用机制.结果 罗布麻叶总黄酮具有明确的抗抑郁作用;SCH23390、舒必利与罗布麻叶总黄酮联合ig给药10 d,能明显延长悬尾小鼠累计不动时间(P＜0.05).结论 罗布麻叶总黄酮的抗抑郁作用与多巴胺能系统有关.     

长春市冬季大气PM2.5对RAW264.7细胞毒性机制研究

目的研究长春市冬季大气PM_(2.5)对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7细胞)的毒性作用。方法采用2016年11月16日至2017年3月18日期间基于空气质量指数的五级及以上雾霾天气采集的长春市大气PM_(2.5)对RAW264.7细胞进行体外染毒,终浓度分别为0、50、100、200、400μg/ml。以四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力,用酶标仪测定胞内活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)释放量及Ca~(2+)浓度,并用流式细胞仪测定细胞凋亡率,用ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量。结果 PM_(2.5)染毒浓度为100、200、400μg/ml时,RAW264.7细胞存活率明显低于对照组,LDH、ROS水平和Ca~(2+)浓度明显高于对照组,TNF-α和IL-6含量明显高于对照组,细胞凋亡率亦随染毒浓度的增加而升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论长春市冬季重污染大气PM_(2.5)可使RAW264.7细胞产生炎症损伤和氧化应激,进而引起细胞凋亡。     

罗布麻叶总黄酮抗抑郁作用及其机制研究

目的 探讨罗布麻叶总黄酮的抗抑郁作用及与多巴胺能系统相关的可能机制。方法 采用经典的小鼠强迫游泳和悬尾抑郁模型,观察罗布麻叶总黄酮的抗抑郁作用。同时观察多巴胺D₁受体阻滞剂SCH23390、D₂受体阻滞剂舒必利对小鼠强迫游泳和悬尾试验中罗布麻叶总黄酮抗抑郁作用的影响,研究罗布麻叶总黄酮抗抑郁的作用机制。结果 罗布麻叶总黄酮具有明确的抗抑郁作用;SCH23390、舒必利与罗布麻叶总黄酮联合ig给药10 d,能明显延长悬尾小鼠累计不动时间（P＜0.05）。结论 罗布麻叶总黄酮的抗抑郁作用与多巴胺能系统有关。     

金丝桃苷对皮质酮损伤的PC12细胞的保护作用

目的利用PC12细胞的抗抑郁损伤模型研究金丝桃苷的抗抑郁作用及其可能机制。方法金丝桃苷、盐酸氟西汀与0.01 mmol.L-1皮质酮共孵PC12细胞48 h,采用形态学法、MTT比色法、LDH法、Fura-2/AM荧光标记法测定胞内Ca2+浓度。结果高浓度皮质酮处理PC12细胞后,细胞数显著增多,受损变圆的细胞数较少;OD490值显著升高(P<0.01),LDH释放量较少(P<0.01),胞内[Ca2+]i升高,表明细胞受到损伤或部分死亡;当给予金丝桃苷或盐酸氟西汀后,细胞存活率升高,表明细胞损伤减少或接近正常。结论与经典抗抑郁剂盐酸氟西汀的作用效果一样,金丝桃苷对皮质酮损伤的PC12细胞有明显的保护作用和抗抑郁作用,其机理可能与神经细胞的保护作用有关。     

罗布麻叶总黄酮抗抑郁作用参与5-HT能系统可能机制的研究

该研究采用经典抗抑郁模型强迫游泳实验对罗布麻叶总黄酮的抗抑郁活性进行了评价,同时选择相关5-HT受体阻断剂(5-HT1A→Way100635、5-HT2→赛庚啶、5-HT2A→酮舍林)采用小鼠悬尾实验来探讨罗布麻叶总黄酮的抗抑郁机制。结果表明罗布麻叶总黄酮具有明确的抗抑郁作用;同时,5-HT2A、5-HT2受体阻断剂酮舍林(5mg/kg)、赛庚啶(3mg/kg)与罗布麻叶总黄酮50mg/kg联合连续灌胃给药10天后与罗布麻叶总黄酮50mg/kg单独给药相比,能明显延长悬尾小鼠累计不动时间(P<0.05),表明罗布麻叶总黄酮的抗抑郁活性与5-羟色胺能系统(5-HT2A、5-HT2受体)有关。     

罗布麻叶总黄酮提取物对小鼠的抗抑郁作用及机制的研究

目的 探讨罗布麻叶总黄酮提取物的抗抑郁活性及其作用机制.方法 采用小鼠悬尾实验及皮质酮损伤的PC细胞实验考察罗布麻叶总黄酮的抗抑郁活性及作用机制.结果 给小鼠罗布麻叶总黄酮提取物25,50,100mg/kg后,小鼠悬尾累计不动时间显著缩短.罗布麻叶总黄酮提取物25,50,100 μg/ml与皮质酮0.01 mmol·L-1共孵PC12细胞48 h,可防止皮质酮所致的PC12神经细胞损伤,降低胞内Ca2+超载.结论 罗布麻叶总黄酮提取物对小鼠悬尾模型有抗抑郁作用,其机理可能与神经细胞的保护作用及降低胞内Ca2+超载有关.