谈如何做好科研机构绩效考核

绩效考核是绩效管理的关键环节,绩效考核的成功与否关系到整个绩效管理的有效性。本文从如何做好绩效考核及实施绩效考核须把握的几个关键环节进行了阐述,旨在进一步帮助科研事业单位制订行之有效的绩效考核体系,为科研机构的发展提供充足的源动力。     

血管紧张素转换酶2在SARS-CoV感染中的功能(第1部分)--血管紧张素转换酶2基因剔除小鼠的建立

目的血管紧张素转换酶是肾素-血管紧张素系统的重要组成部分。血管紧张素转换酶主要功能是通过把血管紧张素Ⅰ转换成血管紧张素Ⅱ来调节血压，最新的研究显示它也是SARS冠状病毒的一种受体。建立血管紧张素转换酶2基因剔除小鼠，为进一步的SARS机理研究提供工具。方法通过将D3小鼠胚胎干细胞DNA进行同源重组，用反向表达的新霉素基因替代ACE2基因-2000bp至＋489bp的DNA片段，并用Western blot检测纯合体小鼠ACE2基因的表达。结果血管紧张素转换酶2基因剔除小鼠ACE2基因的表达被完全阻遏。结论建立了ACE2基因剔除小鼠。     

基因陷阱是小鼠基因功能研究的有力工具

人类基因组计划完成以后，小鼠的基因组计划也相继完成，但这仅仅是人类探索生命奥秘的重要一步，科学家将对基因组进行更加深入的研究，破译不同基因的功能，为人类战胜疾病、提高生命质量提供参考。大规模诱变、转基因动物、基因剔除是研究基因功能的重要技术，但是用这些技术逐一研究30000多个基因的功能是几乎不可能的任务。在研究30000多个基因生物学功能的任务中，科学家拥有了一个新工具，基因陷阱技术。这是一种导致小鼠体内大量基因发生突变，借此确定这些基因功能与表型关系的一种技术方法。     

MAPK磷酸酯酶-1通过抑制JNK和p38的磷酸化调节SH-SY5Y神经母细胞瘤的凋亡

目的研究MKP-1在SH-SY5Y神经母细胞瘤中的抗凋亡。方法建立稳定表达MKP-1的SH-SY5Y细胞,用H2O2诱导细胞凋亡,并通过Western blotting比较分析MKP-1的表达对JNK和p38磷酸化的调节。结果①H2O2诱导SH-SY5Y细胞表达MKP-1,同时导致JNK和p38的去磷酸化;②在稳定表达MKP-1的SH-SY5Y细胞中,MKP-1可以抑制JNK和p38的磷酸化。③稳定表达MKP-1的SH-SY5Y细胞抵抗H2O2诱导细胞凋亡的能力比对照细胞提高了1倍左右。结论MKP-1对神经细胞的凋亡具有重要的调节作用,提示MKP-1作为调节ERK、JNK和p38蛋白激酶信号途径的重要分子,可能对退行性神经系统疾病的发病机制和治疗有重要的作用。     

黄芪多糖对小鼠1-细胞胚胎体外发育效果的初步研究

目的：探讨黄芪多糖对小鼠1-细胞胚胎体外发育的作用。方法：以mCZB添加抗生素为对照组，以添加不同浓度黄芪多糖（Astragulus Polysacharin，Aps）为试验组，观察胚胎体外发育率、孵化胚胎细胞数目及切割取样后桑椹胚发育率和细胞数目。结果：体外培养96h，试验组囊胚发育率（86．0％、85．8％、89．5％）均显著高于对照组（75．8％）（P〈0．05），各试验组间差异无显著性（P〉0．05）；体外培养144h，试验组胚胎孵化率（28．9％、31．0％、25．4％）均高于对照组（22．6％），以Aps2（100μg／mL）组孵化率为最高（31．0％）。孵化胚胎细胞数试验各组（76．00±6．25、81．73±7．01、75．89±4．54）均极显著高于对照组（69．06±5．15）（P〈0．01）。切割取样（≤5或〉5个）后桑椹胚体外培养72h，试验组发育率和细胞数分别为（≤5组为50％和44±2．7、50％和53±2．7、44．4％和55±2．7；〉5组为23．1％和42±1．6、20．0％和44±1．0、14．3％和41±1．0）均高于对照组（33．3％和41±1．7；0％和0）。结论：中药有效成分黄芪多糖能促进小鼠早期胚胎的体外发育及胚胎细胞增殖，并对切割取样后胚胎的体外培养有一定促进作用，且切割样本数≤5对胚胎发育比较有利。     

实时荧光定量PCR法检测转基因小鼠拷贝数

目的利用实时荧光定量PCR法鉴定转基因小鼠外源基因插入拷贝数。方法以TG-CARK转基因首见鼠为研究对象,选取小鼠的高度保守基因Fabpi为内参,利用绝对定量的实时荧光PCR法鉴定转基因小鼠拷贝数,并与传统的Southern blot方法的定量结果进行比较。结果实时定量PCR鉴定的转基因拷贝数与Southernblot法完全一致,三只TG-CARK首见小鼠的拷贝数分别为1,7,45。结论实时定量PCR技术具有高准确性、高稳定性、高通量和低成本的优点,是比传统杂交技术更好的鉴定小鼠转基因拷贝数的方法。     

Wnt及其拮抗剂在肿瘤发生中的作用

Wnts家族是重要的细胞信号分子，在细胞的增值、分化及肿瘤的发生中发挥蘑要作用。Wnt配体通过与细胞膜上的两种受体分子相互作用发动信号传导。Wnt受体包括Frizzled受体家族和LDL相关蛋白家族。Wnt的拈抗剂分为两类，sFRP类和DKK类。sFRP类的成员包括sFRP、Wif-1和Cerberus，他们直接与Wnt配体结合，从而改变了他们与Wnt复合体结合的能力；DKK类只结合Wnt受体复合体的一个亚基。sFRPs和DKKs均能激活规则途径。在某些情况下，一种拮抗剂能抑制另一种拈抗剂的作用。研究揭示Wnt的异常激活与多种肿瘤的发生或转移有关，因此深入研究Wnt信号通路，设计出阻断Wnt通路的物质，可为将来癌症的治疗提供一种可行性的途径。     

肝素结合性表皮生长因子转基因小鼠的建立和功能研究

目的建立肝素结合性表皮生长因子（HB．EGF）的转基因动物模型，利用转基因动物模型研究HBEGF在心脏功能中的作用。方法构建α-MHC-HB-EGF表达载体，将目的片段注射到受精卵的雄原核中，使其发育成携带有HB．EGF的转基因小鼠。通过PCR的方法鉴定转基因的首建鼠。采用Western blotting方法鉴定HB．EGF在心脏中的表达，取HB-EGF在心脏中特异性高表达的阳性转基因小鼠的F1代与同窝阴性对照小鼠的心脏做BrdU免疫组化和Masson染色。结果得到了两只HB．EGF阳性的首建鼠，Western blotting发现16号小鼠中HB．EGF在心脏中的表达与同窝阴性对照小鼠相比蛋白表达明显增加。转基因小鼠心脏BrdU标记的阳性细胞数明显多于阴性对照组的阳性细胞数，Masson染色胶原纤维明显少于同窝阴性对照的小鼠。结论HB-EGF的高表达可以促进心肌细胞的增殖，减少胶原纤维生成，抑制心肌的纤维化。     

cTnTR141W转基因小鼠扩张型心肌病模型的建立

目的建立cTnTR141W扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR141W基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR141W转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR141W转基因小鼠的基因表型,实时PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnTR141W转基因小鼠心脏的病理改变。结果建立了3个系的cTnTR141W转基因小鼠。3个系的基因拷贝数分别是15、20和59拷贝。cTnTR141W基因在心脏组织的表达水平高于内源性cTnT。病理分析显示cTnTR141W转基因小鼠心房心室明显大于野生型,心室壁明显变薄,心肌细胞不均匀肥大,心肌间质纤维增多。超声检查显示心室腔明显扩大,收缩期容积和舒张期容积显著增大,射血分数、短轴缩短率、室壁运动度明显降低。结论cTnTR141W转基因小鼠的全心扩大,室壁变薄,心肌细胞肥大,间质纤维化以及心肌收缩力下降,说明成功建立了cTnTR141W转基因小鼠扩张型心肌病模型,为研究扩张型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。     

人Man2c1转基因小鼠外周血中性粒细胞和CD8+T细胞的调节

目的以转hMan2c1基因小鼠为模型,分析hMan2c1基因在转基因小鼠脾脏的蛋白表达和活性,研究hMan2c1基因对于机体免疫系统的影响。方法Western blot方法检测hMan2c1基因在脾脏的蛋白表达并检测小鼠脾脏α-甘露糖苷酶活性;血常规分析外周血中各种血细胞的比例;以BSA作为抗原观察机体的免疫应答;流式细胞技术观察外周血中CD4 、CD8 、B、NK细胞的数量。结果Western blot结果显示,与野生型小鼠比较,hMan2c1基因在转基因小鼠脾脏组织有明显的表达,α-甘露糖苷酶活性明显增高,中性粒细胞明显升高。BSA刺激后,转基因小鼠外周血免疫细胞中的CD8 T淋巴细胞明显高于野生型小鼠。结论hMan2c1基因在小鼠脾脏表达引起α-甘露糖苷酶活性显著升高,并进一步影响淋巴细胞的生成,增加中性粒细胞和CD8 T淋巴细胞对免疫原的应答。