人乳瘤病毒16型和EB病毒感染与口腔鳞癌关系

用多聚酶链反应技术为２１例口腔鳞癌及癌旁正常组织成对标本中的人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）和ＥＢ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ作检测。结果口腔鳞癌和癌旁正常组织ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性率分别为５２．４％和１４．３％，ＥＢＶ为８５．７％和３３．３％，ＨＰＶ１６和ＥＢＶ均为阳性者分别为４７．６％和９．５％，癌组织和癌旁正常组织间统计学上均有显著性差异。提示口腔粘膜ＨＰＶ１６或ＥＢＶ感染均与口腔鳞癌发生有关。ＨＰＶ１６和ＥＢＶ在口腔粘膜感染可能有协同致口腔鳞癌作用。     

外周血甲胎蛋白mRNA和白蛋白mRNA在评估肝癌微小转移中的比较研究

目的　探讨肝病患者外周血甲胎蛋白mRNA(AFPmRNA)和白蛋白mRNA(ALBmRNA) ,作为肝癌微小转移标志物的特异性。方法　提取患者和健康志愿者的外周血单个核细胞总RNA ,进行RT PCR ,扩增产物再进行Southern杂交。结果　原发性肝癌 (HCC)组外周血AFPmRNA的检出率为 4 1.4 % ,对照组为 0 % ,差异显著 (P <0 .0 5 ) ;HCC组外周血ALBmRNA的检出率为4 4 .8% ,对照组为 2 9.2 % ,二者差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论　作为肝癌微小转移的标志物 ,外周血AFPmRNA的特异性高于ALBmRNA     

RT—PCR检测呼吸道合胞病毒的研究

呼吸道合胞病毒是婴幼儿支气管炎和肺炎最常见的病原之一。应用逆转录－聚合酶链式反应对检测ＲＳＶ的方法进行了研究。采用的引物特异性扩增ＲＳＶ Ｆ糖蛋白Ｆ１亚基的一个片段，计算机检索与其它常见呼吸道病毒无同源性。敏感性测定显示该方法ＲＳＶ最低量为１０ＴＣＩＤ５０Ｓ。这些结果表明ＲＴ－ＰＣＲ可作为快速诊断ＲＳ的有效方法，在临床上推广应用。     

定量分析儿童急性淋巴细胞白血病脑脊液微小残留病

目的：总结急性淋巴细胞白血病(急淋)患儿脑脊液中微小残留病(minimal residual dis-ease，MRD)的变化及其临床意义。方法：确诊为急淋患儿18例，采用一步煮沸法提取脑脊液白细胞DNA，采用常规酚-氯仿抽提法提取骨髓DNA。追踪并采用改良的极限稀释法定量检测MRD值。分析初治病例在骨髓诱导达到缓解时脑脊液MRD值与预后的关系。结果：诱导缓解的18例中，9例脑脊液MRD阳性，9例阴性。经随访MRD阳性者，有5例发生中枢神经系统白血病(central nervous system leukemia，CNSL)；而阴性者无l例发生CNSL。结论：急淋完全缓解时，脑脊液MRD高水平者发生CNSL的危险性较高，故追踪检测脑脊液MRD对临床CNSL的预防、治疗有一定的指导意义。     

HBV转录后调节元件结合蛋白克隆筛选和分析

转录后调节是基因表达调控的重要环节之一。乙型肝炎病毒表面抗原Ｓ基因下游 3′端含有一个转录后调节元件(ＰｏｓｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＥｌｅｍｅｎｔ,ＰＲＥ)。该ＰＲＥ在Ｓ基因转录产物从细胞核向细胞浆转运的过程中起着重要的作用。已经清楚有两个细胞核蛋白与ＰＲＥ结合 ,相对分子质量 (Ｍｒ)分别为 45× 10 3 和 30× 10 3 ,统称为ＰＲＥ相互作用蛋白 (ＰＲＥ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ ,ＰＩＰ)。其中一个已鉴定为甘油醛 3 磷酸脱氢酶基金项目 :国家自然科学基金资助项目( 3 9670 65 3…     

慢性乙型肝炎患者外周血树突细胞的体外扩增及鉴定

目的尝试从慢性乙型肝炎患者外周血扩增培养出大量树突细胞,为进一步临床应用树突细胞治疗慢性乙型肝炎提供物质基础.方法分别取健康人和患者外周血分离培养单核细胞,加入rhGM-CSF、rhIL-4,经7天培养后收获即为不完全成熟树突细胞(DC).以倒置显微镜观察摄影、透射电镜摄影、流式细胞仪测定表面特异性分子的表达、混合淋巴细胞反应测定功能,对DC进行鉴定.结果第七天记数有明显树突状突起的大个细胞或细胞团,产率为0.2～4.5×105/6ml血;透射电镜可见细胞表面伸展的突起;70%以上细胞有DC特异性标志CD1a高表达,而单核细胞特异性标志CD14表达小于4%;能刺激同种异体淋巴细胞强烈增殖,随刺激细胞数目的增加,其促增殖作用增强,P<0.01.结论在本实验条件下,从慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞可诱导扩增出大量DC.     

定量PCR分析HBsAg阳性肝癌患者手术前后血清HBVDNA变化

目的：明确外科手术对ＨＢｓＡｇ阳性肝癌患者乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）复制的影响。方法：以常规聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了２０例ＨＢＶ血清学标志阳性肝癌患者血清中的ＨＢＶＤＮＡ；应用荧光能量转移定量聚合酶链反应（ＱＰＣＲ）测定肝癌手术切除前后病人血清中ＨＢＶＤＮＡ量的变化情况。结果：在部分肝癌病人（４０％）血清中可以检测到ＨＢＶＤＮＡ；外科手术后较手术前病人血清ＨＢＶＤＮＡ拷贝数增高（Ｐ＜０．０１）。结论：乙型肝炎病毒仍然在大部分肝癌病人体内进行着活跃的复制；外科干预在部分病人中引起病毒复制增加。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突细胞CD40、CD80表达和免疫活性的体外研究

目的 :探讨慢性乙型肝炎患者DC表面协同刺激分子CD4 0和CD80表达与其抗原呈递功能的关系 ,为进一步研究慢性乙型肝炎的发病机制及治疗提供新的思路。方法 :分离培养慢性乙型肝炎患者和健康人外周血DC ,流式细胞仪测定DC表面CD4 0和CD80的表达 ,混合淋巴细胞反应测定两组DC的功能。结果 :慢性乙型肝炎患者DC表面CD4 0和CD80的表达较健康人低 ,刺激同种异种T细胞增殖反应也较健康人低。结论 :乙肝病毒感染可通过抑制患者DC表面CD4 0、CD80等协同刺激分子的表达 ,从而使其抗原呈递功能降低     

hIL-2分泌肽序列在HepG2细胞中对hEndostatin表达和分泌差异的影响

目的:了解分泌肽序列在HepG2细胞中对人内皮抑素基因(hEndostatin)的cDNA表达和分泌差异的影响。方法:构建不含hIL-2分泌肽序列的真核表达载体pBlast-hEndo质粒, 转染人的HepG2细胞株, 用RT-PCR的方法检测HepG2(pBlast-hIL2-hEndo), HepG2(pBlast-hEndo), HepG2(pBlast-Mcs)和HepG2中hEndostatin的mRNA表达水平, 及制备4种细胞的总蛋白和收集各自的培养上清, 进行Westernblot分析蛋白表达和分泌的差异。结果:发现HepG2(pBlast-hIL2-hEndo)中hEndostatin的mRNA的水平显著高于HepG2(pBlast-hEndo)。而仅在HepG2(pBlast-hIL-2-hEndo)的细胞总蛋白和上清, 及HepG2(pBlast-hEndo)的细胞总蛋白中检测到hEndostatin表达, 在其它各株细胞总蛋白及上清中, 未检测到hEndostatin。结论:hIL-2分泌肽序列能促进hEndostatin基因在HepG2细胞中表达及分泌。     

检测水产品食物中副溶血弧菌基因分型方法的建立

目的建立副溶血弧菌的基因分型技术,应用于广州市水产品食物中毒居前列的致病菌——副溶血弧菌的检测,寻找一种简便快速准确的检验方法。方法分析副溶血性弧菌分离株的16S-23S rDNA IGS的相关信息(电泳图谱、序列分析等),找出合适的16S-23S rDNA IGS作为基因分型依据,建立副溶血性弧菌的基因分型技术。结果通过克隆和测序,分析了副溶血性弧菌的16S-23S rDNA IGS片段,初步确定了以16S-23S rDNA IGS为分子标记的副溶血性弧菌基因分型技术。结论本检测方法不但快速、灵敏,还对深入了解副溶血性弧菌的发病机制,研究其分子流行病学特征具有重要的意义。