紫草萘醌单体分离物的抗癌生物效应测试

紫草萘醌单体分离物-LⅢ(简称紫草素),是从中草药紫草中提纯的一种新的有效成份。本实验应用多项指标,检测了紫草素对人胃癌和人食管癌来源的两种细胞系的抗癌生物效应。实验显示:在紫草素剂量为3～5μg/ml 的条件下,癌细胞的生长曲线、分裂指数均受抑制,而人来源的正常细胞未见明显影响;在剂量为5～10μg/ml 情况下,癌细胞的集落形成率受到抑制。紫草素的抗癌生物学效应可能与它降低癌细胞 RNA 含量以及对癌细胞超微结构的影响有关。     

用荧光原位杂交(FISH)方法研究人类卵巢癌和胃癌细胞系17号染色体拷贝数变化

目的研究载有多种癌变相关基因的１７号染色体在不同器官、不同组织类型肿瘤单个细胞内拷贝数的变化规律。方法以正常外周血淋巴细胞为对照,采用ＦＩＳＨ方法检测各细胞株１７号染色体拷贝数。结果１７号染色体在各细胞株单个细胞中拷贝数表现为：ＳＫＯＶ３以六倍体为主,占４８％,七倍体率占２３％;３ＡＯ以三倍体为主,占９３％;ＯＶ２以四倍体为主,占６７％;ＭＧＣ８０３以六倍体为主,占６４％;ＢＧＣ８２３以二倍体为主,占８３％;ＳＧＣ７９０１以三倍体为主,占８０％;ＰＡＭＣ８２以五倍体为主,占７８％。结论各细胞系均无１７号染色体缺失,反呈扩增趋势。     

人胃粘膜上皮细胞系GES－1的建立及其生物学特性

原代培养的胎儿正常胃粘膜上皮细胞用ＳＶ４０病毒感染，３周左右分离出了转化细胞克隆，并建立了可在体外长期稳定传代的细胞系ＧＥＳ－１。对此细胞的生物学特性分析表明：细胞的基因组中整合了ＳＶ４０Ｔ基因，并在细胞核中表达。染色体为近三倍体（５０～６０之间）。除了转化特性之外，ＧＥＳ－１细胞基本保留了正常的细胞骨架结构（微丝、微管、角蛋白），粘蛋白反应阳性。接种在裸鼠中６个月观察无致瘤性。此细胞系将为深入研究胃上皮细胞癌变提供重要的模式系统。     

胃癌细胞系Lewis抗原表达和体外诱发免疫应答反应

目的:探讨由于幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)和人胃黏膜上皮表达相同的Lewis抗原,在宿主抗H.pylori的免疫应答中,发生自身免疫反应的可能性.方法:采用流式细胞术和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放试验,在检测3种胃癌细胞系Lewis血型抗原表达状况的基础上,进行体外抗原抗体结合诱发抗体依赖性细胞介导的细胞毒性效应实验.结果:KATOⅢ、803和823细胞系均有Lewis抗原的表达,但各自的表型和量不同.在体外诱发抗体依赖性细胞介导的细胞毒性效应中,除803细胞系anti-H.pylori和anti-Leb组外,其余3种细胞系各种抗体组均有不同水平的LDH的释放.结论:初步提示Lewis抗原抗体结合诱发自身免疫反应存在的可能性,但其机制还有待进一步研究.     

癌基因在细胞转化中的协同作用

近来人们提出致癌的多阶段性,在癌基因的研究中得到的结果也说明正常细胞的转化需要多个癌基因的协同作用。ras基因家族的成员可使获得不死性的小鼠细胞发生转化。但不能使正常的初代细胞发生转化。我们选用了两个克隆的癌基因协同转化大鼠初代细胞时,可获得转化细胞。 实验用细胞系NIH3T3、Rat-1和大鼠胚胎初     

基因芯片在抗肿瘤血管生成中草药相关基因筛选中的研究

目的:利用基因芯片技术,从基因水平解释抗肿瘤血管生成中草药的有效组分T3的分子机制.方法:(1)采用两种细胞系:人胃癌BGC823细胞和血管内皮细胞(EC),每种细胞分两组,一组为对照 ,另一组为T3药物刺激组;(2)抽提细胞总RNA,经反转录制备cDNA,对照组用Cy3、药物刺激组用Cy5荧光标记,获得cDNA探针;(3)cDNA探针与BioDoor基因表达谱芯片杂交,结果由扫描仪扫描并用ImaGene3.0软件进行分析统计.结果:(1)BGC823细胞组有2.53％基因表达谱发生明显的变化,其中158条基因在经T3刺激后表达量明显上升,44条明显下降;(2)EC组有0.46％的基因表达谱发生明显的变化,其中30条基因在经T3刺激后表达量明显上升,7条基因表达量明显下降.结论:利用基因芯片技术可从基因水平解释中药的作用机制,为新药的开发提供理论依据.     

抗新霉素基因为选择标记的共转染方法在细胞转化实验中的应用

癌基因分离的一个重要手段是通过用高分子量DNA转染NIH3T3细胞。通过挑选具有形态改变和重叠生长的转化灶来识别恶性转化细胞。ras基因家族能诱导NIH3T3细胞形成转化灶,而用DNA转染技术从人的肿瘤或肿瘤细胞系中分离到的转化基因只有ras家族等几种癌基因,象mye及其它一些癌基因不能使NIH3T3细胞发生明显的形态改变,因此用这一筛     

单细胞显微注射基因过程中的几个重要技术环节

单细胞内基因显微注射具有准确和速度快的优点,是当前基因直接导入细胞内的先进技术。开展这一技术需有显微注射仪。我所用的是OPTON IM 35型显微注射器,有自动注射装置,运转灵敏。此外,也需要解决一系列技术问题,主要为:制备出优质的显微注射针;注射以后能从众多的细胞群中识别和分离出已受注射的细胞并防止污染等,否则难取得理想效果。我们在癌基因研究中,建立了一套有效的技术方法,现每小时可注射200个～300个细胞,并能降低污染率,今简介如下: