半胱氨酰白三烯受体2通过介导小胶质细胞激活诱导缺血性神经元损伤

目的探索半胱氨酰白三烯(CysLT)受体在大鼠皮层神经元缺氧缺糖损伤中的调节作用及作用机制。方法培养大鼠原代皮层神经元或大鼠原代皮层混合培养细胞,以缺糖缺氧(OGD)模拟脑缺血损伤,以MTT还原法/LDH释放检测确定神经元存活/损伤,以免疫组化做神经元(抗MAP2)、星形胶质细胞(抗GFAP)、小胶质细胞(抗Iba1)特异性染色,观察各细胞数量变化,以PI/Hoechst染色确定细胞凋亡/坏死。以受体激动剂LTD4,NMLTC4,CysLT1拮抗剂孟鲁司特、CysLT2拮抗剂HAMI3379/CysLT1-siRNA及CysLT2-shRNA为药理学干预/基因干扰工具。结果 LTD4(0.1～1000 nmol·L-1),NMLTC4(0.1～1000 nnmol·L-1)不能诱导单纯神经元损伤;CysLT1-siRNA及CysLT2-shRNA不能减轻OGD诱导的神经元损伤;LTD4(1～1000 nnmol·L-1),NMLTC4(0.1～1000 nnmol·L-1)能诱导皮层混合细胞损伤;HAMI3379(0.001～1μmol·L-1)和CysLT2-shRNA能减轻OGD,LTD4或NMLTC4诱导的皮层混合细胞损伤及其诱导的小胶质细胞激活,CysLT1-siRNA无此作用。结论 CysLT2受体可能参与OGD诱导神经元损伤的调节,CysLT2拮抗剂可通过减轻小胶质细胞激活而减轻OGD诱导的神经元损伤。     

新型半胱氨酰白三烯受体GPR17的多克隆抗体制备及其鉴定

目的：制备新型半胱氨酰白三烯受体GPR17的多克隆抗体（pAb），并鉴定其免疫学特性。方法：以KLH偶联的GPR17多肽免疫家兔制备其pAb，用间接ELISA法测定抗体效价，阻断ELISA测定抗体敏感性及特异性，同时以新制备的抗体做Westernblot，检测GPR17的组织表达。结果：通过免疫家兔获得的抗GPR17pAb，ELISA测定显示其抗体效价最高可达到1／16364，并对CysLT1受体和CysLT2受体基本无交叉反应，具有较好的特异性。Westernblot结果显示，GPR17在大鼠脑和心脏组织中有较高的表达，其分子量在43kD左右。结论：制备的GPR17pAb具有较高的效价和较好的特异性，能满足Westernblot检测GPR17的要求。     

加强药学专业实践教学模式创新提高就业竞争力

实践教学对提高学生的实践能力、创新能力和就业能力具有非常重要的作用。本文结合药学专业实践教学的现状,探索实践教学模式创新,构建"校企合作"实践教学新体系,加强师资队伍建设,在科学合理的教学质量保障和评估机制的前提下,提高学生的专业实践能力和职业素质,有利于提高药学专业学生的就业竞争力。     

半胱氨酰白三烯受体2多克隆抗体制备及其鉴定

目的:制备半胱氨酰白三烯受体2(CysLT_2)多克隆抗体,并鉴定其免疫学特性及应用.方法:以KLH偶联的CysLT_2受体多肽免疫家兔制备抗体,用间接ELISA法测定抗体效价,以抗原阻断法测定抗体敏感性及特异性;同时,以新制备的抗体进行Western blot和免疫组化,检测CysLT_2受体的组织表达.结果:ELISA测定显示,获得的家兔抗CysLT_2受体抗体的效价大于1/1 047 296,对CysLT_2受体的特异性强,对CysLT_1受体和GPR17基本无交叉反应.Western blot结果显示,CysLT_2受体在大鼠、小鼠肾、脑和肺中有较高的表达,其分子量在40 kD左右.免疫组化结果表明,CysLT_2受体主要表达在大鼠神经元,也表达在部分星形胶质细胞.结论:制备的CysLT_2受体多克隆抗体具有高效价和高特异性,能满足Western blot和免疫组化检测的要求.     

“互联网”背景下在医用化学实验课程中实施翻转课堂的改革实践

目的　探讨“互联网”背景下,利用微信和微课的翻转课堂在医用化学实验课程中的应用效果。方法　将授课班级随机分为2组,分别为实验组（实施翻转课堂教学,n=97）和对照组（传统教学模式,n=98）。学期末通过比较两个教学组学生的医用化学实验考试成绩和调查问卷对实验组的教学方法进行评价。对医用化学实验考试成绩采用SPSS 12.0软件进行统计处理分析。用t检验进行小组间比较。结果　教学实验组医用化学实验考试成绩高于对照组[（77.84±8.22） vs. （73.43±10.14）,t=3.341,P=0.008）],差异有统计学意义。问卷调查结果显示,实验组的学生普遍认为在综合素质的培养及教学效果等方面,翻转课堂优于传统教学。结论　在“互联网”背景下,利用微信和微课的翻转课堂在医用化学实验课程中能更好地调动学生学习和参与的积极性,受到学生的欢迎,改革收到良好成效,有良好的应用前景。     

QTY06对LPS引起的大鼠慢性气道炎症及MUC5ac表达的影响

目的：观察合成药QTY06对大鼠气管滴入脂多糖（LPS）诱发的慢性气道炎症及黏蛋白表达的影响。方法：以LPS气管滴注制作慢性支气管炎症模型，观察3周后的支气管肺泡灌洗液中磷脂和白细胞总数的变化、病理学改变、免疫组化特点以及QTY06对其的影响。结果：合成药QTY06给药后能使BALF中的磷脂含量明显增加、中性粒细胞和淋巴细胞百分率及白细胞总数降低。病理切片观察发现QTY06给药组与模型组相比气管炎、支气管炎和肺间质炎严重程度明显降低，上皮损害减轻，炎症细胞浸润减少，阳性杯状细胞数下降。QTY06使气管和细支气管上皮内黏蛋白MUC5ac表达的阳性染色区域和程度明显减轻，通过图像分析系统测得的光密度值和黏蛋白面积％均明显低于模型组。结论：QTY06对LPS诱发的大鼠慢性气道炎症反应有抑制作用，能增加肺表面活性物质磷脂量，并能抑制气道黏蛋白高分泌。     

新型半胱氨酰白三烯受体GPR17的多克隆抗体制备及其鉴定

目的:制备新型半胱氨酰白三烯受体GPR17的多克隆抗体(pAb),并鉴定其免疫学特性.方法:以KLH偶联的GPR17多肽免疫家兔制备其pAb,用间接ELISA法测定抗体效价,阻断ELISA测定抗体敏感性及特异性,同时以新制备的抗体做Western blot,检测GPR17的组织表达.结果:通过免疫家兔获得的抗GPR17 pAb,ELISA测定显示其抗体效价最高可达到1/16 364,并对CysLT1受体和CysLT2受体基本无交叉反应,具有较好的特异性.Western blot结果显示,GPR17在大鼠脑和心脏组织中有较高的表达,其分子量在43 kD左右.结论:制备的GPR17 pAb具有较高的效价和较好的特异性,能满足Western blot检测GPR17的要求.     

药理学实验教学改革与大学生科研能力培养研究

实验教学是培养大学生科研素质的主要途径。针对传统实验教学模式存在的问题,从教学模式、内容、实验设计创新、实验考核等方面进行改革,有利于培养大学生的科研思维,提高其科研创新能力。     

新型P2Y样G蛋白偶联受体GPR17在脑缺血损伤中的作用

目的探讨新型P2Y样G蛋白偶联受体GPR17对脑缺血及缺氧缺糖(OGD)诱导皮层混合培养细胞中神经元损伤及小胶质细胞激活的影响。方法①以线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,采用免疫组织化学、Western blotting、RT-PCR以及免疫荧光等方法观察脑内GPR17的时空表达及细胞分布特点。大鼠侧脑室埋管给予GPR17 siRNA靶向沉默脑内GPR17表达,观察其对脑缺血急、慢性期神经元损伤和小胶质细胞激活的影响。②以OGD诱导大鼠皮层混合培养细胞的缺血性损伤,以GPR17 siRNA靶向沉默GPR17的表达,观察其对OGD诱导的原代皮层混合培养细胞中神经元损伤和小胶质细胞激活的影响。结果①缺血中心区,GPR17 mRNA及蛋白水平在再灌注24 h和7,14 d表达上调;缺血周边区,再灌注7,14 d表达上调。在正常大鼠脑组织,GPR17主要表达于神经元、少突胶质细胞。在缺血中心区,再灌注24 h GPR17主要表达于损伤的神经元、小胶质细胞和少突胶质细胞,再灌注14 d主要表达于增生激活的小胶质细胞,部分表达于少突胶质细胞;而在缺血周边区,再灌注24 h以及14 d,GPR17主要表达于神经元、小胶质细胞和少突胶质细胞。星形胶质细胞不表达GPR17。大鼠侧脑室给予GPR17 siRNA成功抑制脑内GPR17表达,显著改善再灌注24 h神经症状、减少脑梗死体积以及神经元损伤;同样,也改善再灌注14 d的脑萎缩和周边区的神经元损伤,并显著抑制小胶质细胞的增生激活。②大鼠原代皮层混合培养细胞中,OGD 1 h恢复24 h(OGD/R)诱导细胞活性降低,LDH释放增加,PI染色结果显示细胞坏死增加,以神经元死亡为主。GPR17 siRNA处理后减轻OGD/R诱导的细胞活性下降以及LDH释放,并减轻细胞坏死,以减轻神经元死亡为主;GPR17siRNA处理后能够改善小胶质细胞激活的形态变化。结论大鼠局灶性脑缺血后,脑内GPR17表达上调,介导缺血后急性神经元损伤以及亚急性/慢性期的小胶质细胞激活。GPR17还介导OGD诱导的大鼠皮层混合培养细胞中的神经元损伤和小胶质细胞激活。