济南市轻重症手足口病患儿肠道病毒71型结构蛋白基因特征分析

目的 比较分析济南市轻重症手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)病原肠道病毒71型(enterovirus 71, EV71)结构蛋白基因及氨基酸变异情况。方法 对2017年济南市轻重症手足口病患儿EV71细胞分离株结构蛋白基因序列进行RT-PCR扩增测序,应用EditSeq和MegAlign等软件对结构蛋白基因进行序列拼接及核苷酸、氨基酸同源性比对,应用Mega 5.2软件构建VP1基因系统进化树。结果 轻重症患儿EV71分离株结构蛋白基因核苷酸和氨基酸同源性分别为93.0%～98.8%和99.0%～99.8%,均属于C4a基因亚型。经VP1基因同源性分析,济南市EV71分离株与2017年江苏株（GenBank ID: MG520666,同源性99.3%）、2015年河南株（KU744452,同源性99.2%）、2015年北京株（KU376386,同源性99.2%）及2016年山东潍坊株（MG588036,同源性99.0%）亲缘关系较近。死亡患儿EV71分离株VP1蛋白出现E145Q突变,重症EV71分离株分别出现VP1蛋白A19V、T101I,VP3蛋白M150I突变。结论　济南市轻重症HFMD患儿EV71分离株均属于C4a亚型,与江苏、河南、山东及北京等地的EV71株亲缘关系较近,其VP1蛋白145位氨基酸残基可能是影响病毒毒力的重要位点。     

2018年济南市14株柯萨奇病毒A组6型VP1基因特征分析

目的 分析济南市导致手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)的柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6, CVA6)分离株VP1基因特征及氨基酸变异。方法 2018年济南市HFMD常规监测病例样本经实时荧光RT-PCR检测,随机选择部分CVA6核酸阳性样本进行细胞分离鉴定,扩增阳性分离株VP1基因序列并进行同源性比较、氨基酸变异及系统进化分析。结果 2018年共检测652份样本,其中CVA6核酸阳性率为47.85%（312/652）,远高于人肠道病毒A组71型（human enterovirus A 71, EV71）（7.06%, 46/652）和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16, CVA16)（8.44%,55/652 ）,为济南市HFMD最主要病原体。通过细胞分离成功获得14株CVA6病毒,经VP1基因系统进化分析显示,济南市CVA6分离株均为基因D5亚型,VP1基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为94.2%~100%和98.0%~100%,与2017年广东株（GenBank 登录号MG385796、MG385815）、广西株（GenBank 登录号MH018512）、云南株（GenBank 登录号LC413143）及2014年江西株（GenBank 登录号KY913482）等亲缘关系较近。VP1蛋白主要存在V174I等位点变异,与国内流行的D5亚型基本一致。结论 2018年CVA6病毒为导致济南HFMD的主要病原,与广东、广西、云南和江西等省分离株亲缘关系较近,属于我国目前流行的基因D5亚型。     

济南市2012~2017年手足口病肠道病毒谱变化及流行特征

目的 阐明济南市手足口病肠道病毒病原谱的构成及变化,探索不同肠道病毒类型的流行特征。 方法 收集2012年1月~2017年12月济南市手足口病标本4 929例,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测EV-A71、柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)、柯萨奇病毒A组6型(CV-A6)和柯萨奇病毒A组10型(CV-A10);对肠道病毒通用(PE)阳性而未明确分型标本采用巢式RT-PCR方法,扩增肠道病毒5'-非翻译区(5'-UTR),经核苷酸序列测定明确肠道病毒类型。 结果 4 929例标本中共检出27种肠道病毒类型,除EV-A71、CV-A16、CV-A6和CV-A10外,柯萨奇病毒A组(CV-A2、4、5、9、12、13、21、22、24)、柯萨奇病毒B组(CV-B1~5)、埃可病毒(E3、6、7、9、11、18、24、25、30)均有检出。轻型病例肠道病毒感染率居前4位的是CV-A16(29.03%)、EV-A71(25.67%)、CV-A6(17.58%)和CV-A10(3.10%),重症病例为EV-A71(77.64%)、CV-A16(5.59%)、CV-A6(1.86%)和CV-A10(1.24%)。CV-A6和CV-A10感染者的发病年龄较EV-A71和CV-A16感染者略小,分别为(3.02±2.43)岁、(2.87±1.67)岁、(3.29±2.34)岁和(3.36±2.18)岁,差异有统计学意义(F=3.659,P=0.003)。流行季节研究显示,EV-A71和CV-A16发病高峰为第2或4季度,CV-A6好发于6~12月份,CV-A10病例6~8月份发病较多。平阴县和章丘区肠道病毒阳性检出率较高,分别为93.49%和91.99%。 结论 济南市手足口病肠道病毒谱以EV-A71、CV-A16、CV-A6和CV-A10为优势型别,27种肠道病毒共存。常年监测非EV-A71非CV-A16肠道病毒的流行特征,及时掌握肠道病毒谱变化,有助于及时完善手足口病疫情的防控措施。     

2016年4月—2022年3月深圳市和济南市流感病原学监测及流行特征

目的 分析在新型冠状病毒肺炎流行背景下,2016年4月—2022年3月国内深圳市和济南市流感流行特点,了解我国南北方地区流感流行差异。 方法 使用深圳市和济南市国家级哨点医院2016—2022监测年度流感样病例(ILI)和流感病原学监测资料,分析流感流行特征和趋势。 结果 2016—2022监测年度深圳市和济南市国家级哨点医院的门急诊病例中流感样病例百分比(ILI%)分别为2.25%、3.45%。两地区ILI%最高的年份均为2021—2022监测年度。ILl年龄构成均以0~4岁为主(分别占40%、46%)。按月分析两地区流感病毒分离阳性率与ILI%变化的相关性,两者趋势均存在正相关(r=0.238,P<0.05;r=0.425,P<0.001)。两地区不同监测年度流感优势毒株型别均不相同,呈交替变化,但每年流行的型别及高峰期的优势毒株型别基本一致。 结论 2020—2021监测年度即新型冠状病毒肺炎流行初期,深圳市和济南市流感活跃程度明显低于往年平均水平且流行毒株型别单一,其余监测年度基本符合我国南、北方地区流感流行特征。     

相思子毒素单克隆抗体的制备纯化及鉴定

目的制备相思子毒素单克隆抗体并鉴定其特性。方法以甲醛处理的相思子毒素毒蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等方法筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行单抗的纯化,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定。结果获得了4株可稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞2D3、4E6、1C8和1E5,诱生的腹水效价分别为1∶1×107、1∶1×106、1∶1×105、1∶1×106,亚类鉴定表明2D3为IgG1,其余3株均为IgG2b;特异性鉴定显示它们与多种毒素均无交叉反应,经过亲和层析,获得了纯化的单抗。结论获得了特异性的相思子毒素单克隆抗体,为建立相思子毒素的检测及纯化方法奠定了基础,其中4E6的效价最高,可作为检测相思子毒素的核心试剂。     

相思子毒素双抗夹心ELISA检测方法的建立与评价

目的建立相思子毒素双抗夹心ELISA检测方法并进行方法学评价。方法优化最佳相思子毒素多抗包被浓度后建立了相思子毒素双抗夹心ELISA检测方法,鉴定其检测灵敏度、线性范围、特异性、重复性、回收率等。结果双抗夹心ELISA方法检测相思子毒素的最小检出限为1ng/mL,标准曲线在10～100ng/mL范围内线性良好。血清中加入已知量的标准毒素蛋白,测得平均回收率为89%。结论本方法检测相思子毒素的可测范围广、特异性强、灵敏度高、变异系数较小,表明其灵敏、特异、可靠。     

济南市发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒基因组特征分析

目的 分析济南市发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus, SFTSV)基因组特征。方法 通过参考文献并对引物进行矫正,获得SFTSV全基因组序列。应用DNAstar 7.1、MEGA等软件对基因组序列进行基因位点、遗传进化、同源比对分析,建立L、M、S片段基因系统进化树。结果 成功获得7株济南市SFTSV全基因组序列,每株分离株基因组全长均为11 490 bp,其中L片段6 368 bp,M片段3 378 bp,S片段1 744 bp。济南市SFTSV属C基因型C3分支。与湖北、河南及山东省泰安和青岛市基因序列同源性高,呈现出明显地域性特点。核苷酸变异以碱基转(颠)换为主,2018年SFTSV分离株共存在0.03%氨基酸突变位点,2019年存在0.02%氨基酸突变位点,2020年存在0.11%氨基酸突变,2020年较2018、2019年明显增多。 结论 利用测序方法测定的济南市SFTSV,其基因组序列分析表明与我国流行的SFTSV相近,氨基酸序列突变有增多趋势,需密切关注其致病力、毒力及传播力的改变。     

食品安全检测前处理技术研究进展

食品安全分析是保证食品安全的基础手段。如何快速、准确地检测食品中的农药残留、兽药残留、非法食品添加剂、生物毒素、重金属等有毒有害物质,已成为食品安全分析的重中之重。食品分析有两大突出问题:一是样品前处理技术;二是分析检测技术。在食品安全检测中,样品前处理约占整个样品分析时间的60%以上,     

2015—2016年济南市活禽市场禽流感病毒监测分析

目的 了解济南市活禽市场外环境样本中甲型禽流感病毒动态分布状况,分析禽流感病毒污染特征.方法 2015年11月至2016年10月,选择济南市所属槐荫区活禽批发市场与历城区活禽零售市场进行外环境样本采集,样本类型包括禽处理台表面擦拭物、笼具表面擦拭物、粪便标本、清洗禽类的污水、禽类饮用水等.应用荧光定量RT-PCR方法对样本进行甲型流感病毒核酸检测,阳性样本进一步进行H5、H7及H9亚型检测.采用x2检验比较不同类型活禽市场、不同类型样本各亚型禽流感病毒核酸阳性率差异.结果 全年共采集2943份禽流感外环境样本,甲型禽流感病毒核酸阳性样本检出率为13.73%(404份),H5、H7与H9亚型检出率分别为4.52%(133份)、0.07%(2份)和8.49%(250份).五种不同类型样本中,甲型禽流感病毒阳性率最高的为禽处理台表面擦拭物(21.88%),最低的为禽类粪便(9.64%)(x2=38.535,P<0.001).但在活禽批发市场中,甲型禽流感病毒阳性率最高的样本为禽类饮用水(46.60%),零售市场中阳性率最高的样本为禽处理台表面擦拭物(18.65%).环境样本中甲型禽流感病毒的波动呈季节性趋势,冬春季节阳性率较高,最高为12月份,5—9月呈低发平缓趋势.结论 济南市活禽市场环境存在禽流感病毒的污染,并以H5和H9亚型为主.活禽市场中禽类饮用水与零售市场中禽类处理台面的病毒检出率最高.     

我国甲型H1N1流感发生概况及特点

2009年3月出现的新甲型H1N1流感,蔓延全球,现已转至流感大流行后期,但仍存在危重症患者的可能性。本文概述了我国甲型H1N1流感的主要临床特点,尤其是危重症患者特征、病原学检测特点及国内研究近况。