天麻素生物合成的研究进展

天麻素是我国名贵中药材天麻中的一种主要活性成分，具有降血压、抗癫痫、抑制肿瘤、保护神经等多方面的药理活性。随着市场对天麻素需求的不断增长以及传统获取方法固有的问题，导致急需新的方法来解决天麻素生产实际中面临的各项困难。生物合成法是一种有别于传统获取法的新方法，已在天麻素获取上取得了较大进展和成果，故现阶段有必要从天麻素生物合成途径、植物转化法和微生物转化法3个方面，对天麻素生物合成进行系统地阐述，从而为进一步改进和完善天麻素生产方法，以满足人们对其不断增长的需求提供有价值的参考。     

小叶女贞糖基转移酶基因的克隆和原核表达研究

根据前期小叶女贞转录组研究的结果,利用c DNA末端快速扩增技术(rapid amplification of c DNA ends,RACE)从叶片中克隆到1条编码糖基转移酶的基因(xynz UGT)。该基因c DNA全长1 598 bp,由66 bp 5'-UTR,1 440 bp ORF,92 bp 3'-UTR组成,其中ORF编码1条含480个氨基酸残基的酶蛋白(xynz UGT),其相对分子质量和等电点分别为54 826.67 Da和5.82。利用生物信息学方法分析酶蛋白的结构,结果表明在一级结构中含有一段糖基转移酶高度保守的PSPG盒,在二级结构中含有α螺旋(38%)、β折叠片(12.1%)和无规蜷曲(49.9%),在三级结构中由肽链折叠形成2个正对的α/β/α类Rossmann折叠区域,并且两者之间夹着一个底物结合口袋。通过系统进化树分析发现,xynz UGT有可能催化酪醇等苯丙素类物质发生糖基化,进一步开展酶蛋白与酪醇的分子对接模拟实验,结果显示位于结合口袋的Gly138和Ser285通过氢键与酪醇发生相互作用。SDS-PAGE电泳分析表明,原核表达系统成功表达出相对分子质量为58 370.57 Da的xynz UGT重组蛋白,但它以非可溶性的包涵体形式存在。利用分子伴侣和酶蛋白共表达的方法,在一定程度上可促进酶蛋白的可溶性表达。以上研究结果为进一步开展体外酶促反应研究,并阐明酶的功能机制奠定了基础。     

HPLC法测定龙芽梅木药材中齐墩果酸的含量

目的建立HPLC法测定龙芽梅木药材中齐墩果酸的含量测定方法。方法采用Kromasil C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相：乙腈-水-磷酸（80：20：0．42），检测波长：208nm。结果齐墩果酸在1．164～5．820邮范围内具有良好的线性关系，r=0．9999，平均加样回收率为99．69％，RSD=1.76％（n=5）。结论该方法简单、准确，重复性好，可作为龙芽橡木药材中齐墩果酸的含量测定方法。     

三七渗漉提取工艺的研究

目的优选三七的最佳渗漉提取工艺。方法采用正交试验法,以三七总皂苷和三七总氨基酸为考察指标,对影响三七渗漉提取工艺的因素进行研究。结果乙醇浓度、乙醇用量、渗漉速度均对三七提取工艺有显著影响。结论三七的最佳渗漉提取工艺为用12倍量50%乙醇,渗漉速度为1～3mL/(min·kg)。     

不同来源栀子中栀子苷含量测定

目的 测定不同来源栀子中栀子苷含量.方法 采用HPLC法.色谱柱:Agilent C18柱;流动相:甲醇-水(25:75);柱温:30 ℃;检测波长:238nm;流速:1.0 mL/min;进样量:10μL.结果 栀子苷在2.9～57.8μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 5),加样回收率99.58%,RSD为2.8%.湖南石门野生栀子的栀子苷含量高;储存期短的栀子中栀子苷含量较高:相同储存期栀子栽培品和野生品栀子苷含量接近.结论 不同产地、品种、储存期栀子中栀子苷含量存在差异.     

三七有效成分的分离纯化研究

目的:探讨从三七提取液中分离三七总皂苷和三七素的方法。方法:采用D101大孔树脂分离纯化三七总皂苷,采用732强酸型阳离子交换树脂和CM SephadexC-25分离三七素。结果:可从三七提取液中分离得到三七总皂苷和三七素粗品。结论:本分离方法简单,可用于工业生产。     

坎地沙坦抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠胸主动脉平滑肌A7r5细胞增殖和迁移及机制

目的探讨坎地沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移及对连接子蛋白43(Cx43)的影响和机制。方法体外培养A7r5大鼠胸主动脉平滑肌细胞,随机分为对照组、 AngⅡ组及AngⅡ联合坎地沙坦组。CCK-8法检测A7r5细胞的增殖, Transwell~(TM)小室实验和划痕实验检测A7r5细胞的迁移能力;免疫荧光细胞化学技术检测A7r5细胞Cx43的表达和分布, Western blot法检测A7r5细胞Cx43、骨桥蛋白(OPN)、增殖细胞核抗原(PCNA)、磷酸化的丝裂原激活胞外调节激酶1/2(p-MEK1/2)及磷酸化的胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的蛋白水平。结果与对照组相比, AngⅡ组细胞增殖和迁移能力增强;与单用AngⅡ组相比, AngⅡ组联合坎地沙坦组的细胞增殖和迁移能力随坎地沙坦浓度增加而降低; Cx43表达在A7r5细胞膜和核膜,与对照组相比, AngⅡ组Cx43表达增强, Cx43、 OPN、 PCNA、 p-MEK1/2及p-ERK1/2蛋白水平均较AngⅡ组明显增加, AngⅡ联合坎地沙坦组Cx43表达及各蛋白水平均明显降低。结论坎地沙坦可降低AngⅡ诱导平滑肌细胞的增殖和迁移,可能与抑制Cx43及MEK/ERK表达有关。     

脑溢安颗粒剂中大黄素和芍药甙的含量测定

采用反相高效液相色谱法，以大黄素和芍药甙为成分分析的定量指标，测定脑溢安颗粒剂中大黄素和芍药甙的含量。结果稳定，重现性好。     

脑溢安颗粒剂中大黄和芍药甙的含量测定

采用反相高效液相色谱法，以大黄素和芍药甙为成分分析的定量指标，测定脑溢安颗粒剂中大黄素和芍药甙的含量。结果稳定，重现性好。     

感康灵喷雾剂质量标准研究

目的:通过定性和定量两方面为建立感康灵喷雾剂质量标准提供技术参考。方法:薄层色谱法鉴别复方中药中的金银花、黄芩、虎杖、柴胡、广藿香和薄荷等成分。高效液相色谱法测定绿原酸和黄芩苷的含量,色谱柱均为 Kromasil(250mm×4.6mm,5μm)。测定绿原酸的流动相为:乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87),检测波长327nm;黄芩苷的流动相为:甲醇-水-磷酸(40∶60∶0.2),检测波长280nm。结果:在 TLC 中均能检出金银花、黄芩、虎杖、广藿香、柴胡和薄荷。绿原酸在0.2～1.0μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率(n=5)为100.5%(RSD 为0.98%);黄芩苷在0.22～1.1μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率(n=5)为99.53%(RSD 为1.3%)。结论:该定性定量方法准确可行,重复性好,可作为感康灵喷雾剂的质量标准基础。