腺相关病毒载体介导Zs Green基因在体转染大鼠心肌组织的实验研究

目的 观察腺相关病毒载体9型(AAV9)介导Zs Green基因在体转染心肌组织的效果.方法 采用冠状动脉灌注法将携带报告基因Zs Green的腺相关病毒9型(AAV9-Zs Green)以不同滴度(5×106TU,1×107TU)转导至大鼠心肌组织,分别于转染后1、2和4周在荧光显微镜下观察大鼠心肌组织绿色荧光表达情况.结果 病毒载体转染1周后心肌组织可见绿色荧光表达;2周时可见大量绿色荧光表达,荧光强度较1周时明显增强(P＜0.01);4周时荧光强度较2周有所减弱(P＜0.05),但仍有较强表达;随着病毒转导滴度提高,荧光强度明显增加(P＜0.05).结论 腺相关病毒载体能够有效介导Zs Green转染大鼠心肌组织,并长期稳定表达.     

有氧运动锻炼对心肌梗死后大鼠氧化应激及心肌重塑的影响

目的 探讨早期有氧运动对心肌梗死(心梗)后大鼠心肌超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以及心肌重塑的影响.方法 通过结扎大鼠冠状动脉左前降支制作急性心梗模型,1周后将存活大鼠随机分为耐力运动组(E组)和未运动组(N组),另设假手术组(S组).运动组行游泳锻炼6周.6周后超声检测各组大鼠心功能,并检测心肌SOD、MDA及光镜和电镜下心肌形态结构.结果 与假手术组相比,运动组和未运动组心肌SOD明显下降,MDA明显上升,SOD/MDA明显下降,心肌结构紊乱,心功能明显下降;而运动组较未运动组.心肌SOD明显上升,MDA明显下降,SOD/MDA明显上升,心肌形态结构有所改善,心功能好转.结论 早期有氧运动锻炼可提高心梗后大鼠心肌抗氧化能力,改善心室重构.保护心功能.     

MicroRNA-21在缺血再灌注损伤早期大鼠心肌的表达及抗细胞凋亡作用

目的：观察microRNA-21(miR-21)在缺血再灌注损伤(I/R)早期大鼠心肌的表达及对细胞凋亡的影响。方法：SD大鼠随机分为对照组(冠状动脉注射转染空白对照病毒rAAV9-ZsGreen),miR-21组(冠状动脉注射转染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21),Sham组(仅开胸挂线),I/R组(进行I/R处理),I/R+miR-21(转染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21后再进行I/R处理)。用Realtime-PCR检测大鼠miR-21水平,免疫组织化学及Western印迹方法检测Bcl-2, Bax,caspase-3水平并计算Bcl-2/Bax比值。结果：冠状动脉注射rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21可使miR-21表达增加4.43倍(P<0.001);与Sham组比较,I/R组大鼠缺血区miR-21水平下调(P<0.05),而非缺血区miR-21升高(P<0.05);与Sham组比较,I/R组再灌注1,2,6 h miR-21水平进行性下降(P<0.05),在同一时间点I/R+miR-21组较I/R组miR-21表达升高(P<0.05);与Sham组比较,再灌注6 h时I/R及I/R+miR-21组Bcl-2增高、caspase-3增高、Bcl-2/Bax降低(P<0.05),与I/R组比较,I/R+miR-21组Bcl-2下调、caspase-3下调、Bcl-2/Bax增高(P<0.05)。结论：I/R早期大鼠心肌缺血区miR-21表达下降,细胞凋亡增加,过表达miR-21可改善细胞凋亡。     

9型重组腺相关病毒转染microRNA-21前体在大鼠心肌的转染效率及安全性

目的 研究含荧光标记ZsGreen的9型重组腺相关病毒(rAAV9)转染目的基因microRNA-21前体(pre-miR-21)至大鼠心肌的转染效率、表达时间及安全性.方法 用冠脉注射方法转染PBS及rAAV9-Zs-Green-pre-miR-21 1.0×1010 vg/只、1.0×1011 vg/只、1.0 x 1012vg/只至SD大鼠心肌,倒置荧光显微镜观察心肌组织荧光表达并计算转染效率,Realtime PCR方法测定miR-21表达,超声心动图观察大鼠心功能.结果 冠脉注射后7 d PBS组未见绿色荧光,余各组大鼠心肌均可观察到少量绿色荧光表达,第14天达高峰,之后呈下降趋势.14d高病毒量组较其他中、低病毒量组转染效率明显高[(73.7±8.4)％ vs (39.6±4.8)％,(P＜0.001)];[(73.7±8.4)％ vs (24.1±4.2)％,(P＜0.001)].14d miR-21表达在低、中、高病毒量组较PBS组分别增加1.51倍、2.89倍及4.43倍.rAAV9转染后对大鼠心功能无影响(P＞0.05).结论 rAAV9-Zs-Green-pre-miR-21可以有效、持久、安全地在大鼠心肌表达.     

125例房颤病因分析

【目的】探讨心房颤动（房颤）的病因及防治措施。【方法】对本院内科1 623例住院病人中发生房颤的125例患者的临床资料进行回顾性分析。【结果】内科住院病人房颤总发生率为7.7%（125/1 623）。房颤的病因构成比依次是冠心病、高心病、风心病、肺心病,甲亢性心脏病,特发性房颤等。60岁以上的患者占69.6%（87/125）。进行复律治疗13例,抗凝或抗血小板治疗82例。18例患者曾患脑卒中。【结论】房颤病因中冠心病和高心病占主要地位,预防房颤应重点降低冠心病、高血压的患病人数。     

上调miR-133a表达水平对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的:观察上调微小RNA-133a(miR-133a)的表达水平对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的影响。方法:以同源正常血压Wistar-Kyoto(WKY)大鼠为正常对照组,另将SHR随机分为SHR组、SHR+腺相关病毒(AAV)组和SHR+携带miR-133a的腺相关病毒(miR-133a-AAV)组。通过冠脉灌注法将miR-133a-AAV转染至SHR大鼠的心脏,监测大鼠的尾动脉压,Masson染色观察心肌胶原沉积情况,real-time PCR检测心肌组织中miR-133a的表达水平,免疫组化法和Western blot法检测心肌组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白表达水平。结果:与WKY大鼠相比,SHR的尾动脉压明显升高,心肌组织中miR133a表达水平降低,TGF-β1和CTGF蛋白表达水平升高,出现心肌纤维化;上调SHR心肌miR-133a的表达水平后,心肌纤维化程度明显减轻,TGF-β1和CTGF蛋白表达水平降低。结论:上调心肌组织中miR-133a的表达水平,对高血压导致的大鼠心肌纤维化有改善作用,其机制可能与抑制心肌组织中TGF-β1和CTGF蛋白表达有关。     

强化瑞舒伐他汀对急性ST段抬高型心肌梗死患者8-OHdG和ESM-1水平的影响及预后观察

目的:观察并探讨强化瑞舒伐他汀治疗急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI),患者8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和内皮细胞特异性分子1(ESM-1)的水平变化及预后。方法:入选行直接PCI的急性STEMI患者116例,随机分为强化他汀组(瑞舒伐他汀术前20mg,术后20mg/d)和常规他汀组(瑞舒伐他汀术前10mg,术后10mg/d)。观察两组患者入院即刻和术后24h、第4天、第7天8-OHdG和ESM-1的水平变化。随访比较两组患者术后30d内主要不良心脏事件(MACE)和不良反应的差异。结果:两组患者8-OHdG和ESM-1水平在术后24h均明显上升,在术后第4天、第7天均呈下降趋势,强化他汀组较常规他汀组下降更明显(P0.05);入院即刻8-OHdG水平与ESM-1水平呈正相关(r=0.562,P0.05)。强化他汀组肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)峰值水平均低于常规他汀组(P0.05)。两组患者在MACE事件以及不良反应上比较均差异无统计学意义。结论:强化瑞舒伐他汀在STEMI患者治疗中能够更加迅速降低氧化应激反应并改善血管内皮功能,从而保护心肌、稳定动脉粥样硬化斑块。     

自发性高血压大鼠心肌组织microRNA-133a与TGF-β1蛋白表达的改变及意义

 目的：观察microRNA-133a（miR-133a）与转化生长因子-β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）蛋白在自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）心肌组织中的表达改变和关系。方法：取12只18周龄雄性自发性高血压大鼠为SHR组,12只18周龄雄性Wistar-Kyoto （WKY）大鼠为对照组,通过无创血压测量分析系统测大鼠尾动脉血压,Masson染色检测心肌胶原容积分数（collagen volume fraction,CVF）和血管周围胶原面积比率（perivascular collagen area ratio, PVCA）,实时荧光定量PCR检测miR-133a表达水平,免疫组化和Western blotting法检测心肌TGF-β1蛋白表达。结果：与对照组比较,SHR组的收缩压和舒张压明显升高（P<0.01）,心肌CVF和PVCA明显升高（P<0.01）,TGF-β1蛋白表达水平明显升高（P＜0.01）,miR-133a表达水平明显降低（P<0.01）,SHR组心肌miR-133a表达水平为对照组的（23.9±4.6）%;SHR组心肌组织miR-133a与TGF-β1蛋白表达水平呈负相关（r=-0.791, P<0.01）。结论：SHR心肌组织miR-133a表达下调,伴随TGF-β1蛋白表达升高和胶原合成增加。miR-133a与TGF-β1可能参与SHR大鼠的心肌纤维化。     

急性心肌梗死患者氧化应激水平与院前延误时间及早期预后的相关性研究

目的探讨急性心肌梗死患者血清8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)与胸痛起病到就诊时间即院前延误时间(PDT)及早期预后的关系。方法 69例行急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的急性ST段抬高性心肌梗死患者,按PDT分为≤6 h组和>6 h组。检测入院时及PCI术后24 h血清8-OHdG、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,2周后,行超声心动图检查,检测左室射血分数(LVEF)。另设胸痛患者20例为对照组,行冠状动脉造影排除冠心病,检测入院时及冠状动脉造影术后血清8-OHdG水平。结果心肌梗死患者入院时及PCI术后24 h血清8-OHdG水平均显著高于对照组(P<0.01),PCI术后24 h血清8-OHdG、CK-MB水平较入院时明显升高(P<0.05);与PDT≤6 h组比较,PDT>6 h组血清8-OHdG、CK-MB水平显著升高(P<0.01),LVEF明显降低(P<0.05);PDT≤6 h组及PDT>6 h组8-OHdG水平与LVEF呈负相关(r值分别为-0.543和-0.594,P<0.01)。结论急性心肌梗死患者的血清8-OHdG水平与PDT相关,并在评估心功能方面有重要临床意义。     

腺相关病毒载体介导ZsGreen基因通过3种转染途径在心肌组织转染效果的比较

目的：采用腺相关病毒（Adeno-associated virus,ＡＡＶ）-9为载体,比较３种转染方法对ZsGreen基因在大鼠心肌组织表达的影响。方法：30只雄性SD大鼠随机分为尾静脉（Tail vein,TV）注射组、心肌（Intramyocardium,IM）注射组、冠脉（Intra－coronary,IC）灌注组,采用相应方法在体转染携带报告基因ZsGreen的腺相关病毒-9型（Adeno-associated virus 9-ZsGreen,AAV9-ZsGreen）。2周后荧光显微镜下观察绿色荧光在大鼠ＩＭ组织的表达情况。结果：TV组ＩＭ有少量绿色荧光分布;IM组绿色荧光表达主要局限在ＩＭ注射位点,注射点周边有少量分布;IC组大量绿色荧光在ＩＭ广泛均匀表达。IM及IC组荧光强度均显著高于TV组（P＜0.01）,IC组荧光强度高于IM组（P＜0.01）。结论：IC灌注法可使ＡＡＶ介导的外源基因在ＩＭ组织高效、广泛、均匀表达,优于TV注射法及ＩＭ注射法。