实验室意外微创伤引起的获得性寄生虫感染

该文对国内、外由微小创伤引起的实验室获得性寄生虫感染病例进行了综述，分析了感染的可能途径和原因，并对感染后一些有效的处理方法进行了总结。     

醋酸锌对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化影响的研究

目的　研究醋酸锌对原代培养的大鼠胚胎肢芽细胞形态、细胞相对蛋白含量、细胞集落形成率以及肢芽细胞生长发育的影响。方法　取SD大鼠胚胎肢芽组织,分别加入不同浓度的醋酸锌进行体外原代微团培养。用光学显微镜观察细胞形态,在倒置相差显微镜下计数细胞集落数,同时用Folin-酚法检测细胞蛋白含量。结果　当锌浓度为0.05mmol/L时,对肢芽细胞生长和集落的形成无显著影响,而当锌浓度增至0.1mmol/L时,表现出显著促进作用,锌浓度大于1.0mmol/L时则呈现抑制作用,且影响的程度随着锌浓度的增加而增强。醋酸锌对大鼠胚胎肢芽细胞的半数分化抑制浓度(ICD50)为1360.9μg/mL。结论　醋酸锌对胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响呈现双向效应,即低浓度促进,高浓度抑制。     

带PTD的小鼠Foxp3 PRD缺失突变体对小鼠脾混合淋巴细胞反应的影响

目的：构建和表达带蛋白转导结构域（protein transduction domain,PTD）的Foxp3（forkhead boxP3）PRD缺失突变体（PTD-ΔPRD）融合蛋白,并探讨其对脾混合淋巴细胞反应的影响。方法：应用PCR技术扩增获得小鼠ΔPRD片段核酸序列,将其分列插入到带PTD的pET28a-PTD和pET28a-PTD-eGFP原核表达载体中,并在大肠埃希菌Rosetta（DE3）中表达融合蛋白,利用镍柱获得并复性融合蛋白;Western印迹鉴定目的蛋白表达的正确性、流式细胞术和Western印迹检测融合蛋白穿膜进入小鼠T淋巴细胞瘤株EL-4细胞中的能力、双向混合淋巴细胞反应分析融合蛋白对T淋巴细胞增殖的影响。结果：融合蛋白可在大肠埃希菌Rosetta（DE3）中表达,并获得了大量纯化的融合蛋白。流式细胞术和Western印迹显示融合蛋白穿越细胞膜进入EL-4细胞核中,混合淋巴反应初步证明融合蛋白具有抑制T淋巴细胞增殖的功能。结论：成功表达小鼠PTD-ΔPRD Foxp3融合蛋白,该融合蛋白能有效进入细胞核内,抑制T淋巴细胞增殖。     

实验室意外微创伤引起的获得性寄生虫感染

该文对国内、外由微小创伤引起的实验室获得性寄生虫感染病例进行了综述,分析了感染的可能途径和原因,并对感染后一些有效的处理方法进行了总结。     

原核表达的含PTD—eGFP不同分子质量融合蛋白穿膜能力的比较

目的: 评价HIV-1 TAT蛋白转导结构域(PTD)携带的不同分子质量融合蛋白的穿细胞膜能力.方法: 诱导表达、纯化含PTD-eGFP的不同分子质量的融合蛋白,与细胞共育后,通过流式细胞术、激光共聚焦评价融合蛋白穿膜能力.结果: 诱导表达、纯化获得3种含PTD-eGFP的不同分子质量的融合蛋白.流式细胞术和激光共聚焦方法分析发现3种融合蛋白均具有高效穿膜能力.结论: PTD介导融合蛋白的穿膜能力与分子质量无直接关系.     

PTD-Foxp3融合蛋白的表达、纯化及其生物学功能初步研究

目的:构建带HIV-1 TAT转录因子的穿膜序列(Protein transduction domain,PTD)的pET28a-PTD-Foxp3原核表达载体,表达纯化PTD-Foxp3融合蛋白,并研究其生物学作用.方法:利用基因重组技术构建pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达融合蛋白,经Ni2 分离柱纯化pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白.流式细胞术检测融合蛋白穿越细胞膜进入小鼠T淋巴细胞瘤株EL-4细胞中的能力,并通过混合淋巴细胞反应初步分析融合蛋白抑制T细胞活化增殖的生物学作用.结果:成功地构建了pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白表达载体,表达并纯化了pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白.通过流式细胞术分析证实pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白能有效地进入细胞内;同时经混合淋巴细胞反应证明该融合蛋白能明显抑制T细胞的活化增殖能力.结论:成功表达具有生物学活性的PTD-Foxp3融合蛋白,为进一步研究PTD-Foxp3融合蛋白免疫抑制功能和构建表达人PTD-Foxp3融合蛋白,最终应用于临床疾病的治疗奠定了基础.     

PTD-mFoxp3抑制小鼠皮肤移植排斥反应的研究

目的:研究带有蛋白穿膜结构域的小鼠Foxp3融合蛋白(mouse Foxp3 fusin protein combining with transduction domain, PTD-mFoxp3)对小鼠脾淋巴细胞活化增殖能力和皮肤移植排斥反应的影响.方法:取健康C57BL/6小鼠脾淋巴细胞,在体外经刀豆蛋白A(concanavaline A, ConA)活化,并分别给予环孢素A(cyclosporine,CsA)、不同浓度的PTD-mFoxp3,mFoxp3,PTD-GFP和培养基处理,检测脾淋巴细胞增殖指数.在此基础上进行从Balb/c小鼠到C57BL/6小鼠的皮肤移植试验,将40只C57BL/6受体小鼠随机分为4组,每组10只,分别以PTD-mFoxp3,CsA,0.9%氯化钠注射液(NS),PTD-GFP于手术当天开始连续腹腔注射8天为干预手段.术后第9天各组随机取2只移植小鼠,采集皮片标本,进行组织学检查.其余的8只用于观察移植皮瓣的存活时间.结果:PTD-mFoxp3和CsA相似,与其他处理方法相比明显抑制ConA活化的小鼠脾淋巴细胞增殖指数(P<0.05).PTD-mFoxp3组,CsA组移植物的存活时间较各对照组显著延长(P<0.05);病理检查显示PTD-mFoxp3组和CsA组移植物淋巴细胞浸润明显轻于各对照组.结论:PTD-mFoxp3能抑制ConA活化的T淋巴细胞的增殖,且具有抑制小鼠皮肤移植排斥反应的作用.     

意外微小创伤引起实验室获得性寄生虫感染

本文对国内外由于微小创伤而引起的实验室获得性寄生虫感染的病例进行综述，分析可能的感染途径和原因，并对感染后一些有效的处理方法进行总结。     

两种方式制备的原核表达含TAT蛋白转导域融合蛋白穿膜能力比较

目的:联合应用多种技术评价不同方式制备的TAT转导结构域-eGFP-目的蛋白的穿膜效率及亚细胞定位情况,以期建立有效、稳定的高效穿膜蛋白制备方法。方法:诱导表达、纯化包涵体形式融合蛋白,分别进行直接脱盐和透析复性,并与细胞共育,然后通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹法评价融合蛋白穿膜能力。结果:通过透析复性制备的融合蛋白穿膜效率极低;而纯化后直接脱盐的融合蛋白经流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹等方法分析,表明均具有高效穿膜能力。结论:两种方式制备的融合蛋白均能穿膜,但透析复性制备的蛋白穿膜效率低,且不易定位于细胞核中,影响进一步对该目的蛋白在胞核中生物学行为的研究;而脱盐的变性蛋白具有高效的穿膜效率。