HCV-C蛋白抗原在人肝细胞株中的表达和鉴定

目的:构建HCV-C蛋白基因的真核表达载体,并在正常人肝细胞HL-7702中表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中,扩增HCVcore基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人正常肝细胞HL-7702,用免疫组化染色(SP)法检测HCVC蛋白的表达,并通过Westernblot进行鉴定。结果:所克隆的HCV-C基因片段的大小为573bp,序列正确。成功地构建了pcDNA3.1(-)/core重组表达质粒。以其转染HL-7702细胞后,用SP免疫组化染色法检测到了C蛋白的表达。Westernblot显示,其相对分子质量(Mr)约为21000。结论:构建的真核表达载体pcD-NA3.1(-)/core在人肝细胞中能有效表达HCV-C蛋白,为以后相应抗体的制备打下了基础。     

HCV非结构蛋白3真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3的构建

目的：构建HCV NS3基因真核表达载体，为进一步研究和解析HCV NS3基因诱发不死化人肝细胞癌化的机制准备了条件。方法：将含HCV全长基因的pBRTM/HCV1-3011质粒转化感受态菌JM109并扩增；提取pBRTM/HCV1-3011质粒；从pBRTM/HCV1-3011质粒中PCR扩增出HCV NS3片段；并将其插入到克隆载体pMD18-T中，再与表达载体pcDNA3.1(-)重组，以得到重组的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3；最后限制性酶切鉴定HCV NS3表达载体。结果：从pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出的HCV NS3片段大小正确，经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列；凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3.1/NS3内。结论：成功地构建了HCV NS3基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白3蛋白酶抑制剂的研究进展

面对丙型肝炎的流行，至今缺少理想的治疗药物和方案，丙型肝炎病毒（HCV）的非结构蛋白3（NS3）蛋白酶是近年来抗丙型肝炎药物研究的重要靶点。作者综述了NS3蛋白酶抑制剂的作用机制和活性特点。     

量子点荧光成像在肿瘤诊治应用研究进展

量子点(quantum dot,QD),又名“人造原子”,是一种用原子人工合成的纳米材料,其在紫外光激发下可发出不同波长的荧光.QD直径小、发出的荧光峰窄、荧光亮度持久,具有取代有机染料用于肿瘤诊治的潜能.总结近年QD在荧光成像及肿瘤诊治方面的研究进展.方法 应用PubMed及中国知网(CNKI)数据库检索系统,以“quantum dots,fluorescence imaging,oncotherapy,tumor therapy,量子点,肿瘤治疗,肿诊断,荧光成像”为关键词,检索2005-01-2016-03的相关文献391篇.纳入标准:(1)可用于生物荧光成像的低毒化QD;(2)靶向识别的功能化QD.根据纳入标准最终分析31篇文献.结果 低毒化QD在细胞成像、活体靶向成像、淋巴结成像、活体肿瘤成像、活体肿瘤细胞示踪等荧光成像方面的研究,使正确定位淋巴结、利用QD深成像能力发现极小的肿瘤、乃至彻底切除肿瘤组织成为可能.功能化QD在肿瘤早期诊断和治疗上发挥更大作用,QD的药物靶向和QD介导的光热治疗肿瘤也有很好的临床应用前景.结论 QD在生物荧光成像及肿瘤诊疗中的潜力巨大,具有进一步探索开发利用于临床的价值.     

光热疗法在浅表肿瘤治疗中的应用

近年来,热疗因其安全有效而逐渐成为继手术、放疗、化疗及生物治疗后的又一肿瘤治疗手段。传统热疗应用于肿瘤治疗时仍有局限性,相比之下,金纳米颗粒辅助光热治疗可以靶向性地对病灶内的每单个细胞进行加热,提高热疗的精确性及可控性,实现了对肿瘤细胞选择性杀伤,但目前还处于实验研究阶段,有待于进一步完善。本文就光热疗法在浅表肿瘤中的应用及其展望做一综述。     

乳腺癌治疗中热疗的研究进展

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,也是引起女性死亡的重要病因;乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势。根据乳腺癌目前的发病趋势,预计到2030年,     

免疫金纳米笼子介导热疗诱导人乳腺癌细胞凋亡研究

目的：研究抗体修饰的金纳米笼子对乳腺癌细胞的光热杀伤作用。方法：由银（Ag）立方纳米晶与次氯金酸（HAuCl4）置换反应得到金纳米笼子,经Anti-CK19抗体修饰后制成具有生物靶向性的免疫金纳米笼子。将其链接细胞后,由激光照射,在荧光显微镜下观察免疫金纳米笼子光热杀伤乳腺癌细胞的效果,通过流式细胞仪检测其对乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231和MCF-7/TMA热疗效果的差异,用免疫组化方法检测热疗后细胞内Caspase-9蛋白的表达量,MMT比色法观察其细胞毒性。结果：免疫金纳米笼子可以通过光热作用来杀伤乳腺癌细胞;MCF-7细胞株对照组凋亡率为（0.056±0.007 8）%,实验组为（50.2±4.56）%,MCF-7/TAM细胞株对照组凋亡率为（0.006 3±0.005 4）%,实验组为（52.6±5.07）%,MDA-MB-231细胞株对照组凋亡率为（0.054±0.006 4）%,实验组为（49.0±4.81）%,差异无统计学意义,F=0.84,P=0.456;Caspase-9蛋白在37℃时表达水平为0.06±0.02,41℃表达水平为0.15±0.04,43℃表达水平为0.34±0.04,对照组光照后温度为34℃,表达水平为0.05±0.01,〈43℃时,随着温度的升高Caspase-9的表达量明显升高,F=14.914,P〈0.001;MMT法结果显示,高剂量免疫金纳米笼子可抑制乳腺癌细胞的增殖（F=5.774,P〈0.001）,且存在时间-效应（F=42.378,P〈0.001）和剂量-效应（F=76.440,P〈0.001）关系。结论：免疫金纳米笼子介导的光热疗法可以靶向杀伤乳腺癌细胞,上调Caspase-9的表达,是免疫金纳米笼子介导的热疗诱导乳腺癌细胞凋亡的机制之一。     

量子点-CKl9抗体荧光探针对乳腺癌细胞免疫荧光标记及毒性研究

目的：制备量子点-细胞角蛋白19抗体（cytokeratin,CKl9）荧光探针,利用其光学性质和特异性识别能力对乳腺癌细胞株MDA—MB231进行荧光标记,并探讨其细胞毒性。方法：用水热法合成CdTeS量子点,并将其与CKl9抗体连接。通过直接免疫荧光法,利用合成的量子点-CKl9抗体探针对乳腺癌细胞株MDA—M昏231进行荧光标记,并观察探针在细胞内的分布。分别采用流式细胞术和MTT法,检测探针作用后细胞凋亡情况和增殖变化。结果：量子点-CKl9抗体探针能与抗原特异性结合,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜示,该探针能有效对乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行特异性荧光标记,荧光主要位于细胞质和细胞膜,荧光清晰明亮,持续时间长。与对照组相比,量子点-CKl9抗体探针浓度≤2nmol／L时,对照组乳腺癌细胞株MDA_M辟231的凋亡率为（3．763±0．130）％,0．25nmol／L组为（3．760±0．161）％,0．5nmol／L组为（3．827士O．107）％,1nmol／L组为（3．947±0．081）％,2nmol／L组为（4．013±0．055）％。单因素方差分析结果显示,各剂量组与对照组比较,差异无统计学意义,F-3．023,P-0．071。量子点-CKl9抗体探针可抑制乳腺癌细胞MDA—M昏231增殖,F-133．407,P〈0．001;且存在时间-O：应（F-299．142,P〈0．001）和剂量-效应（F-9．105,P〈0．001）关系,随着探针浓度的增加和作用时间的延长,A值逐渐减小,但除了浓度2nmol／L作用48h外,其余各组的抑制率均〈7％。结论：成功制备了量子点-CKl9抗体荧光探针,该探针能有效对乳腺癌细胞株MDA-M昏231进行荧光标记,且具有良好的光学性质和较低的细胞毒性。     

丙型肝炎病毒核心蛋白在QSG7701细胞中的表达和鉴定

目的：进行丙型病毒肝炎核心蛋白真核表达载体的构建，并在人源肝细胞QSC7701中进行表达与鉴定。方法：从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM／HCV1—3011质粒中扩增出HCV核心（core）基因片段，构建peDNA3．1（-）／core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701，用免疫组织化学SP法检测丙型肝炎病毒核心蛋白的表达，再通过Western blot印迹法进行鉴定。结果：所克隆的core片段大小正确，序列正确；成功的构建了pcDNA3．1（-）／core重组表达质粒，瞬时转染QSG7701细胞，用SP免疫组化检测到了核心蛋白的表达，Western blot印迹法显示其分子量约为21000。结论：丙型病毒肝炎核心蛋白的真核表达载体pcDNA3．1（-）／core在人肝细胞中能有效表达HCV核心蛋白，从而为进一步研究和解析核心蛋白在肝细胞癌变机制中的所起的作用提供了良好的核心蛋白表达系统，同时也为开发丙型肝炎DNA疫苗提供了前期条件。