MDR1 siRNA对胰腺癌细胞株BxPC-3耐药性影响的实验研究

目的：观察阻断多药耐药基因1（MDR1）表达后胰腺癌细胞对化疗药物敏感性的变化,探索提高胰腺癌化疗疗效的新方法。方法：采用RNA干扰技术．构建MDR1 siRNA重组质粒．脂质体介导转染人胰腺癌细胞株BxPC-3,并筛选稳定转染细胞克隆,RT-PCR和Western印迹法检测MDR1 mRNA和蛋白的表达变化。将细胞接种于裸鼠,观察移植瘤对化疗药物吉西他滨敏感性的变化。结果：转染MDR1 siRNA质粒后胰腺癌细胞株BxPC-3 MDR1 mRNA与蛋白表达水平明显降低。体内实验结果显示,将转染前后的细胞接种于裸鼠,转染组移植瘤对化疗药物吉西他滨更为敏感（P〈0．05）。结论：通过RNA干扰技术,可在转录和翻译水平降低MDR1在胰腺癌细胞株BxPC-3中的表达,并能提高细胞对化疗药物的敏感性。     

胰腺癌多药耐药细胞株BxPC-3/ADM的建立及耐药机制的初步探讨

目的 构建胰腺癌多药耐药细胞株BxPC-3/ADM,通过动态监测诱导耐药过程,探讨其耐药的可能机制.方法 逐步增加阿霉素浓度对BxPC-3细胞进行诱导,在不同的阿霉素诱导浓度,MTT法检测细胞对多种化疗药物的耐药指数,RT-PCR和Western印迹法检测细胞MDR1和MRP mRNA和蛋白的表达.结果 成功构建多药耐药细胞株BxPC-3/ADM;在0.05 μg/ml至8 μg/ml阿霉素诱导浓度,细胞对5-Fu、MMC和Gem的耐药指数无明显增加;在16 μg/ml浓度3种化疗药物的耐药指数有较明显上升,同时伴有MDR1 mRNA表达的明显增加;至32 μg/ml 5-Fu和Gem的耐药指数未再有继续上升,而MMC的耐药指数则继续上升,同时MDR1 mRNA表达未再增加,而MRP mRNA表达则明显增加.Western印迹实验显示MDR1和MRP蛋白表达变化与mRNA表达变化趋势一致.结论 MDR1基因在诱导早期的耐药中起主导作用,在后期则和MRP基因协同发挥作用.     

加贝酯对金黄地鼠胆囊及Oddi括约肌收缩的影响

加贝酯(Gabexate Mesilate)是一种非肽类蛋白水解酶抑制剂,临床上广泛应用于治疗各种胰腺炎,但它对胆囊及Oddi括约肌的收缩有无抑制作用,能否用于胆囊炎、胆石症发作时的治疗,目前尚不清楚.我们通过离体实验,观察了加贝酯对金黄地鼠胆囊及Oddi括约肌收缩的影响.     

剖腹术后局部布比卡因灌注和静脉吗啡滴注止痛的随机临床试验

虽然静脉吗啡注射可减轻手术后疼痛 ,但伴有严重的副作用 ,诸如恶心、呕吐、过度镇静和呼吸抑制。病人止痛控制系统 (patient controlled analgesia system,PCA)仍有一定的副作用。作者在伤口处持续灌注布比卡因 ,观察术后疼痛指数、术后用量和并发症 ,并与持续静脉滴注吗啡作对照。新加坡综合医院结肠直肠外科于 1999～ 2 0 0 0年共施行 70例结肠切除术 ,随机分成 0 .5 %布比卡因皮下伤口持续灌注 (通过 ON- QTM疼痛处理系统 ,美国 Ethicon出品 )或间歇静脉吗啡滴注 (通过 PCA系统 )。6 0小时内按需给吗啡 1～ 3mg/h。在布比卡因组给 …     

羧基肽酶B激活肽和阴离子胰蛋白酶原用作早期预测急性胰腺炎的严重度

早期预测急性胰腺炎的严重度有助于及时处理病人 ,已知血尿中存在的激活肽和某些胰酶原与其疾病的严重度相关。作者观察羧基肽酶 B激活肽 (CAPAP)与阴离子胰蛋白酶原 (AT)在这方面的价值。取瑞典 Lund大学医院外科于 1997～ 1999年收治的 6 0例急性胰腺炎病例作为研究对象 ,测定血尿CAPAP和 AT值 ,并与临床表现、B超、CT扫描评定的严重度进行比较。在 6 0例中 ,12例评定为重症胰腺炎 ,因有一个或多器官衰竭 ,4 8例评定为轻症胰腺炎。AT采用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定 ,而 CAPAP用放射免疫法检测。用 Mann- Whitney U试验比较…     

小干扰RNA阻断MBD1基因对胰腺癌抑癌基因表达的影响

目的 观察阻断MBD1基因对胰腺癌抑癌基因表达的影响,探讨MBD1基因在胰腺癌发生发展中的作用.方法 设计并合成2条MBD1小干扰RNA(siRNA)序列,克隆进入pGCsi-U6/Neo/绿色荧光蛋白(GFP)构建重组质粒.重组质粒和空质粒转染人胰腺癌细胞系BxPC-3,将3组细胞(转染MBD1-siRNA重组质粒组、转染空质粒组和未转染组)接种于裸鼠,8周后取移植瘤行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MBD1基因和甲基化相关抑癌基因的表达情况.结果 成功构建MBD1-siRNA重组质粒并稳定转染胰腺癌细胞系BxPC-3,转染组中MBD1基因表达明显低于空质粒组和未转染组,而CDH1、RASSF1A、TIMP3、P14ARF、Rb等甲基化相关抑癌基因的mRNA水平转染组(179.7±8.1、155.6 4±10.0、256.7 ±15.7、199.0±7.9、210.1 q±9.4)要高于空质粒组(21.0±6.8、22.0±2.7、99.4±10.3、86.0±5.4、15.0 ±4.9)和未转染组(11.4±6.0、15.3±1.9、110.7±14.1、74.3±4.8、17.4±7.8,均P<0.05).结论 通过RNA干扰技术,可降低MBD1在胰腺癌中的表达,上调抑癌基因的转录,MBD1介导的转录抑制作用可能在胰腺癌的发生发展中起重要作用.     

回肠肛管贮存袋手术

回肠肛管贮存袋手术 ( IAP)已广泛应用于溃疡性结肠炎和家族性结肠息肉病患者 ,作者观察 IAP加作或不加作转流性回肠造口的远期效果 ,患者均于 1989～ 1996年住入波士顿哈佛医学院炎性肠道疾病中心 ,共施行 IAP 130例 ,计男 66例 ,女 64例 ,12 7例为溃疡性结肠炎 ( UC) ,3例为家族性结肠腺瘤性息肉病( FAP)。 10 4例接受激素治疗 ,平均 2 2 0 mg氢化考的松 ,其中 6例还用了巯嘌呤。平均年龄 34 .1± 11.9岁( 13～ 70岁 ) ,平均随访 75± 2 0个月 ( 4 3～ 119个月 )。10 2例未加做转流性回肠造口 ( DI) ,余 2 8例因不适宜一期手术而加…     

胰十二指肠切除术中肝动脉变异的临床特征研究

胰十二指肠切除术中,如果误切变异的肝动脉,可引起所供应区域的肝梗死、肝功能异常,甚至肝脓肿,影响病人的康复.该文总结华山医院胰腺癌诊治中心相关病例如下.     

应用图象分析仪检测胆囊良恶性病变细胞核DNA的含量

近年来,自动图象分析仪(AIA)较广泛地应用于实体瘤及某些癌前期病变的研究,并在病理形态学诊断困难时作参考。我们运用AIA技术对慢性胆囊炎、胆囊肌腺增生症、胆囊腺瘤及胆囊癌的细胞核DNA含量进行检测。 材料与方法     

甲基化CpG结合域蛋白1在胰腺癌组织中的表达和意义

目的：检测甲基化CpG结合域蛋白I（MBD1）蛋白在胰腺癌组织中的表达，并探讨其临床意义。方法：应用S-P免疫组织化学法检测38例胰腺癌、17例胰腺癌旁组织、8例胰腺良性肿瘤、3例慢性胰腺炎和6例正常胰腺组织中MBD1蛋白的表达。结果：MBD1在胰腺癌组织、正常胰腺组织、胰腺良性肿瘤、胰腺癌旁组织中的表达阳性率分别是76．32％（29/38）、16．67％（1／6）、25．0％（2／8）、29．41％（5／17），3例慢性胰腺炎标本中未见表达；胰腺癌阳性表达率明显高于正常胰腺、慢性炎症、良性肿瘤和癌旁对照组织（P〈0．05）。MBD1表达水平的高低与病人的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度和TNM分期无显著性差异（P〉0．05）；而与淋巴结转移密切相关，有淋巴结转移者胰腺癌组织MBD1的表达阳性率为92．31％（24／26），高于无淋巴结转移者的41．67％（5／12）（P〈0．01）。结论：胰腺癌中MBD1呈高水平表达，并与胰腺癌的高转移侵袭活性有关，其机制可能与MBD1介导抑制多个甲基化相关抑癌基因的表达有关。MBD1的转录调控机制有待进一步研究。