空间生物技术在干细胞和组织工程学研究中的应用

随着空间技术的发展，国内外近年来有关研究表明、太空微重力、射线和重金属离子辐射对哺乳动物细胞生物学和发育生物学具有一定影响，提示太空环境的特性及特殊优势可以为干细胞生物学和组织工程学研究提供新的实验模型。     

人类羊膜细胞表达神经干细胞特异性蛋白研究

目的利用神经干细胞特异性标志蛋白鉴定人类羊膜组织中多分化潜能神经前体细胞的存在.方法利用免疫组织化学法检测人类羊膜组织和培养人类羊膜细胞中巢蛋白(nestin)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、musashi-1、波形蛋白(vimentin)和PSA-NCAM等神经干细胞特异性标志蛋白的表达.结果人羊膜组织中存在nestin/GFAP双阳性细胞,此外,还表达musashi-1、vimentin和PSA-NCAM等神经干细胞特异性标志蛋白;培养羊膜细胞中存在vimentin和PSA-NCAM阳性细胞,以及nestin/GFAP双阳性细胞.结论羊膜组织和培养羊膜细胞中有神经干细胞特异性标记蛋白的表达.     

纳米晶胶原基骨与人骨髓间充质干细胞的复合培养

目的：观察人骨髓间充质干细胞与纳米晶胶原基骨的复合培养，证实纳米晶胶原基骨是否可以成为组织工程的良好载体材料。 方法：实验于2003—07／2004—08在清华大学材料科学与工程系完成纳米晶胶原基骨的制备及处理，在中日友好临床医学研究所免疫室完成纳米晶胶原基骨与骨髓间充质干细胞复合培养。健康自愿献髓者3人，在中日友好医院骨坏死与骨循环实验室体检。应用仿生原理制备纳米晶胶原基骨，体外培养骨髓间充质干细胞并与材料复合，通过共聚焦显微镜和环境扫描电镜观察骨髓间充质干细胞与材料的复合情况。 结果：①共聚焦显微镜显示：在各层面扫描骨髓间充质干细胞均深入纳米晶胶原基骨的内部孔隙。②环境扫描电镜显示：第2天细胞贴附在多孔材料上，在纳米晶胶原基骨底部靠近培养板处细胞黏附明显较纳米晶胶原基骨上其他部位多，细胞也开始伸展，伸出伪足向材料微孔中长入，孔隙内见不到桥接的细胞连接细胞在整个材料及孔隙内表面贴附、伸展。第7天时细胞在材料上完全铺展。伪足向材料微孔中长入，在部分直径较小的孔隙中（70～150μm），细胞之间突起相互连接呈桥状。纳米晶胶原基骨临近培养板的一面有较多细胞生长，主要在材料的表面和材料的裂隙中，孔隙中较少。第14天，大量细胞在纳米晶胶原基骨表面和孔隙中生长，尤以孔隙中明显。细胞之间广泛存在突起连接，在孔隙中呈网状互相相连。 结论：纳米晶胶原基骨是良好的组织工程支架材料，易与骨髓间充质干细胞复合．适合种子细胞的贴附、生长、增殖和分化。     

PAI-1基因多态性对哮喘气道重塑影响的研究

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）基因启动子-675 4G/5G多态性对哮喘气道重塑的影响。方法慢性持续期哮喘患者（30例）和健康人（20名）分列为轻度哮喘组、中重度哮喘组和健康人组,用等位基因特异性PCR（ASO）法测定PAI-1启动子区域-675位点多态性,ELISA法测定血浆PAI-1、TGF-β1和MMP-9水平,高分辨率CT（HRCT）观察所有受试者肺部影像学特征,运用PickerPQ6000分析软件测定气道壁厚度（T）、气道壁面积（WA）,采用气道壁厚度/气道外径（T/D）和气道壁面积占气道总面积百分比（WA%）作为标化指标。结果PAI-1的4 G/4 G、4 G/5 G和5 G/5 G 3种基因型表达的TGF-β1、T和WA%差异有统计学意义（P〈0.05）。血浆PAI-1仅与血浆TGF-β1存在相关关系（r=0.335,P〈0.05）,与T、T/D、WA和WA%无相关关系（P〉0.05）。多元方差分析显示PAI-1基因多态性、血浆TGF-β1、血浆PAI-1水平与PAI-14G/5 G基因多态性的交互作用对气道重塑表型的影响有统计学意义（P=0.050,P=0.026,P=0.030）。结论PAI-1启动子4 G/5 G多态性可能是哮喘气道重塑的独立影响因素。     

软骨细胞在异体脱细胞软骨基质上的体外培养实验

目的 探讨脱细胞软骨基质对软骨细胞全外生长的影响。方法 以脱细胞异体兔耳软骨基质为支架材料，以脱细胞异体兔耳软骨膜为对照。体外种植兔耳软骨细胞进行常规培养，观察软骨细胞的生长状况和增殖情况。结果 软骨细胞进入脱细胞异体软骨基质构架裸露的空穴，生长旺盛。而在脱细胞异体软骨膜上，软骨细胞不易生长。结论支架材料的表面性状对细胞生长有显著影响，异体脱细胞软骨基质可提供适宜于软骨细胞生长的良好环境，有可能发     

Effect of Qingre Quyu Granule (清热祛瘀颗粒) on stabilizing plaques in the brachiocephalic artery of apolipoprotein E deficient mice

Objective： To investigate the effect of Qingre Quyu Granule （清热祛瘀颗粒, QRQYG） on stabilizing vulnerable plaques in apolipoprotein E （ApoE） defficient mice. Methods： Seventy-two male ApoE defficient mice were given a high-fat diet from 6 weeks of age. At the 16th week, all the mice were randomized into 3 groups： the QRQYG group, the simvastatin group, and the control group. Sixteen weeks after administration of 0.9 g/kg QRQYG, 3 mg/kg simvastatin or 10 mg/kg sodium chloride per day to the respective groups, the animals were euthanized. The pathological morphologic changes in the vulnerable plaques were evaluated, the matrix metalloprotease-9 （MMP-9） expression was measured by immunohistofluorescence, the soluble intercellular adhesion molecule 1 （ICAM-1） was determined by ELISA, the nuclear factor kappaB （NF-κB） subunit p65 was measured by quantitative RT-PCR, and, finally, thrombospondin-1 （TSP-1） was determined by the immunohistochemical method. Results： The plaque cross-sectional area in the brachiocephalic artery （23.7%, P0.01）, the lipid core of the plaque （43.1%±3.1%）, and the number of buried ？brotic caps of the plaque were significantly decreased in the QRQYG group compared to the control group （both P0.01）; furthermore, the thickness of the ？brotic cap of the plaque increased and the intra-plaque hemorrhage of the plaque decreased. The serum soluble ICAM-1 （27.1±5.1 μg/mL）, the protein expression of MMP-9 and TSP-1 and the p65 mRNA expression increased in the QRQYG group in comparison with the control group （P0.05 or P0.01）. Conclusion： QRQYG could stabilize the vulnerable plaque through inhibition of the inflammatory response.     

医务人员高暴露人群严重急性呼吸综合征隐性感染与工作强度和工种的相关性研究

目的　了解密切接触严重急性呼吸综合征 (SARS)患者的医护人员隐性感染的发生情况 ,及其与工作强度和工种之间的关系。方法　对北京中日友好医院密切接触SARS患者的 112 7名医务人员和 92名对照者的血清进行冠状病毒抗体 (IgG、IgM)酶联免疫吸附测定法 (ELISA)检测。并调查抗体阳性者周围密切接触者 313名的临床表现。结果　 112 7名SARS病区工作的医务人员 :男2 87名 ,女 84 0名 ;年龄 2 1～ 5 5岁 ,平均年龄 (34± 9)岁。对照组和医务人员上岗前所测冠状病毒抗体均为阴性 ,上岗后冠状病毒抗体阳性者共 2 9名 ,阳性率 2 5 7% (2 9/ 112 7)。特异性抗体的阳性率与工种和病区的关系结果提示 :抗体阳性的护士 2 1名 ,抗体阳性率占护士上岗人数的 3 4 6 % (2 1/ 6 0 7) ;医师、医技人员 6名 ,阳性率占其上岗人数的 1 4 1% (6 / 4 2 6 ) ;督导 2名 ,阳性率占其上岗人数的 2 86 %(2 / 70 )。ICU病区的 130名工作人员中抗体阳性者 10名 ,阳性率为 7 6 9% (10 / 130 ) ,占 2 9名抗体阳性者的 34 5 % (10 / 2 9) ;其他病区人员 19名 ,占 6 5 5 % (19/ 2 9)。 2 9名抗体阳性医务人员的周围密切接触者 313名 ,无一名发病或有临床症状。结论　密切接触SARS患者的医护人员有隐性感染的发生 ,隐性感染者从流行病学     

新生大鼠低氧缺血性脑损伤对脑组织病理形态和神经营养因子的影响

目的改进新生大鼠低氧缺血性脑损伤(HIBI)模型的制作方法,观察低氧缺血对脑组织病理形态和神经营养因子的影响。方法大鼠随机分为空白对照组(n=5)、假手术组(n=8)和HIBI模型组(n=19), HIBI模型制作中省去了经典Rice法中的麻醉步骤和动物手术后休息时间,观察HIBI后大鼠体重增长情况,行为能力表现以及脑组织病理形态学改变;比较HIBI 制模后3 d假手术组及HIBI组鼠脑匀浆beta-NGF和human-NT3的变化。结果(1)HIBI模型组体重增长明显落后于空白对照组和假手术组(P<0.01);(2)HIBI组全部出现不同程度的行为异常:84%翻身不能,63%肌肉颤动和/或头颤,抽搐者占42%,死亡率为21%。制模后3 d HIBI模型组大鼠的行为障碍和异常运动的发生率均明显低于制模当日(P <0.01);(3)HE染色可见HIBI模型组大鼠左侧大脑半球神经元损伤及神经胶质细胞增生;(4)制模后3 d鼠脑匀浆human-NT3含量较假手术组增加(P<0.05);β-NGF含量无明显变化。结论制作的新生大鼠HIBI模型更符合临床新生儿HIBI的自然病程。HIBI早期神经营养因子表达增加在神经保护机制中发挥重要作用。     

以高效液相色谱法测定苏合香中3个成分的含量

目的 建立苏合香中苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯含量的测定方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Kro-masil 100 AC18(150 mm×4.6 mm,5 μm).柱温40℃;以1%冰醋酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0ml/min;在232 nm(苯甲酸和苯甲酸苄酯)和280 nm(肉桂酸)波长下进行检测.结果 苯甲酸的线性范围为0.14532～2.9064μg(r=1.0000),平均回收率(n=6)为99.60%,RSD为1.8164%;肉桂酸的线性范围为0.00328～0.0656μg(r=1.0000),平均回收率(n=6)为101.8%,RSD为0.7052%;苯甲酸苄酯的线性范嗣为0.22192～4.4384μg(r=0.9998),平均回收率(n=6)为102.4%,RSD为0.8541%.结论 高效液栩色谱法简便可行,结果准确可靠,其测量结果可做为苏合香质量控制的参考.