阻断Rac1对转化生长因子-β诱导视网膜色素上皮细胞行为改变的作用研究

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞间质样转分化(EMT)过程中Rac1在其细胞学行为改变中的作用.方法 人RPE-19细胞分为空白组、TGF-β1组、TGF-β1+NSC23766组、NSC23766组.所有实验于加入TGF-β1前2h给予NSC23766以封闭Rac1受体.免疫荧光、蛋白免疫印迹法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;细胞划痕、侵袭及凝胶收缩实验,观察NSC23766对细胞迁徙、侵袭、凝胶收缩作用.结果 TGF-β1组细胞中α-SMA荧光表达较空白组、TGF-β1+ NSC23766增强,差异有统计学意义(F=825.314,P=0.003);细胞划痕实验结果显示,TGF-β1组细胞间距小于TGF-β1+ NSC23766组,差异有统计学意义(P24h=0.04,P48h =0.001);与空白组细胞间距比较,差异无统计学差异(P=0.278).细胞侵袭实验结果显示,TGF-β1组穿过纤维膜的细胞数与空白组、TGF-β1+ NSC23766组、NSC23766组穿过纤维膜的细胞数比较,差异无统计学意义(F=0.371,P=0.055).凝胶收缩实验结果显示,TGF-β1组能明显增加细胞的促凝胶收缩能力,组间差异有统计学意义(F=40.473,P=0.014),TGF-β1组相对TGF-β1+ NSC23766组,差异有统计学意义(P=0.022).结论 Rac1在TGF-β1诱导RPE细胞凝胶收缩改变中发挥作用;NSC23766可通过调控Rac1活化抑制RPE细胞学行为的改变.     

视网膜修复与再生的研究进展

视网膜退行性疾病,如年龄相关性黄斑变性、视网膜色素变性等,均是由视网膜细胞变性凋亡而引起.视网膜细胞损伤后难以自我修复.近年来研究者们通过视网膜移植、组织工程学、基因修复、药物保护及视觉假体等方法对视网膜进行修复或促进其再生.     

褪黑素对抑制过氧化氢诱导大鼠白内障形成的实验研究

目的  探讨褪黑素（MLT）对过氧化氢诱导大鼠白内障形成的抑制作用。方法  体外取出发育正常的Wistar大鼠晶状体,按随机原则分为3组：A组为空白对照组,B组为过氧化氢（H2O2）处理组,C组为在B组的基础上加入不同浓度的MLT,使MLT终浓度分别为10（C1组）、30（C2组）、50（C3组）、100（C4组）、200（C5组）μmol/L。体外培养24h后,观察各组晶状体的混浊程度,采用Image Pro Plus（IPP）6.0软件分析晶状体下黑色条带的平均光密度值;酶标仪测定各组晶状体组织的蛋白含量、还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、总抗氧化能力（T AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）含量。结果  裂隙灯下观察可见,各组晶状体混浊程度不同,C组晶状体平均光密度值高于B组（P＜0.05）,即C组晶状体透明性高于B组。C组晶状体组织中的GSH、T AOC、SOD及CAT含量高于B组（P＜0.05）,而MDA含量低于B组（P＜0.05）。结论  褪黑素可提高氧化损伤晶状体的抗氧化能力,有效抑制体外过氧化氢诱导大鼠白内障的形成。     

牛磺酸熊脱氧胆酸对高糖环境下晶状体上皮细胞的保护作用

目的    探讨牛磺酸熊脱氧胆酸（TUDCA）对高浓度葡萄糖诱导的人晶状体上皮细胞（hLECs）凋亡的作用及信号转导机制。方法    hLECs在不同浓度葡萄糖培养液中培养24h,诱导建立hLECs凋亡模型,并采用不同浓度TUDCA（0.2、0.5、1.0、2.0mmol/L）进行干预。MTT法检测细胞增殖情况;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学改变;Annexin V FITC/PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot技术检测细胞葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的表达。结果    不同浓度葡萄糖培养细胞24h后,随着葡萄糖浓度的增加,细胞增殖抑制率亦升高（P<0.01）。高浓度葡萄糖（250mmol/L）培养24h可抑制hLECs的增殖活性,显著诱导hLECs凋亡（P<0.01）,加入TUDCA共同培养后, hLECs凋亡率则显著降低（P<0.01）,高浓度葡萄糖所引起的细胞GRP78蛋白表达也明显受到抑制（P<0.05）。结论    内质网应激参与了高浓度葡萄糖诱导的hLECs凋亡,TUDCA可通过内质网应激途径抑制hLECs的凋亡,对hLECs产生保护作用。