“真假悟空”之早复极与心肌梗死

《西游记》中孙悟空法力高强,然而漫长取经路上竞遇到六耳猕猴变化的假悟空,一时两人难辨真假,就连观音大士也难以相鉴.无独有偶,在我们日常的工作中,也会遇到一些难以鉴别的心电图,如早期复极综合征（旱复极）与急性心肌梗死（心梗）.     

重组人N末端脂多糖结合蛋白对脂多糖致伤小鼠保护作用的初步研究

目的　初步观察重组人N末端脂多糖结合蛋白 (tLBP)对细菌脂多糖 (LPS)致伤小鼠的保护效应。　方法　选用雄性昆明小鼠 70只 ,随机分为致伤组 1(2 1只 ) :腹腔内注射LPS 10 0ng;保护组 1(2 1只 ) :腹腔内注射 10 0ngLPS 40mgtLBP;对照组 (8只 ) :腹腔内注射等渗盐水。于注射后15、30min及 1、3、6、12、2 4h测定 3组动物血清丙氨酸转氨酶 (ALT)及肿瘤坏死因子α(TNF α)的含量 ,并观察其肝、肺组织的病理学改变。另设致伤组 2及保护组 2各 10只 ,分别腹腔内注射LPS 4 0 0ng及4 0 0ngLPS 40mgtLBP,观察伤后 2 4h内动物的死亡数。　结果　保护组 1与致伤组 1血清ALT含量分别于伤后 12、6h到达峰值 ,各为 (41.0 0± 4 .5 8)、(99.5 0± 6 2 .6 3)U L,前者的升高幅度显著低于后者 (P <0.0 1);两组血清TNF α含量均于伤后 3h到达峰值 ,各为 (35 .96± 7.33)、(42 .4 9± 4 .79)fmol ml,保护组 1的升高幅度低于致伤组 1。与致伤组 1比较 ,保护组 1肝细胞变性程度明显减轻 ,未见肝细胞散在坏死病变 ;肺组织充血有不同程度减轻 ,肺泡腔内、支气管内炎性渗出明显减弱。致伤组2伤后 2 4h死亡 9只 ,保护组 2死亡 3只。　结论　初步认为重组人tLBP具有一定的生物学活性 ,对LPS致伤小鼠具有一定保护作用。     

两种兔源内毒素结合蛋白的分离、纯化及其体外生物学活性的对比研究

目的　从烧伤合并内毒素血症致多器官损害家兔血清中分离纯化内毒素结合蛋白 ,并初步对比研究它们的生物学活性。方法　兔血清蛋白质通过二步离子交换层析 (Bio Rex 70Resin、Mono Q)及凝胶过滤分离纯化 ,并经流式细胞分析实验、绵羊红细胞凝聚实验、氨基末端氨基酸残基测序等方法鉴定 ,再将所获蛋白质作用于体外培养的人单核细胞 (U937) ,观测其分泌TNFα等细胞因子的生物效应。结果　获得两种具有促进内毒素 (LPS)与外周血单核细胞 (PBMC)结合的蛋白质 ,其中一种相对分子质量为 6 0× 10 4 ,其N端 10个氨基酸序列为TNPGLITRIT ,证实为兔内毒素结合蛋白 (LBP) ;另一种蛋白质相对分子质量为 4 8× 10 4 ,其N端 10个氨基酸序列为GSQGTFTSEE ,与NCBI蛋白质库中的氨基酸序列进行比较 ,未发现相同序列 ,命名为p48。结论　p48与LBP具有相似的生物学功能 ,p48的生物学活性稍弱于LBP。提示体内除LBP外 ,p48也同样起着介导LPS的毒性作用。这可能是近年国外研究中阻断LBP的活性后 ,机体毒性反应并无明显减轻的原因之一。     

常染色体三体型胎儿的产前诊断及病理分析

目的探讨不同染色体核型异常胎儿的合并畸形的类型,为孕妇提供选择妊娠结局的科学依据,为可出生胎儿分析在生长发育过程中可能出现的生物学现象,同时,为超声影像学诊断染色体病胎儿提供临床资料。方法经腹羊膜腔穿刺抽取羊水或胎儿脐静脉血进行细胞培养染色体核型分析,常规G显带分析,病理分析。结果 40例染色体异常核型中中孕羊水异常31例;中晚孕脐静脉血染色体异常29例（其中羊水已发现异常20例）,在发现的染色体核型异常40例中21三体27例（嵌合型2例,易位型1例）;18三体12例;13三体1例;其中20例在知情同意的原则下进行了病理尸解,13例21三体尸解中发现2例合并唇腭裂;2例合并十二指肠畸形;3例合并心脏畸形。6例18三体尸解中除共有的握拳手式外,2例合并室间隔缺损及脑室异常;3例合并肾脏或输尿管畸形,1例13三体为心脏多发畸形伴视网膜发育不良。结论常染色体三体型胎儿可选择终止妊娠。本文染色体三体型尸解中不但有常见的心脏及泌尿系统畸形,还有2例唇腭裂及2例十二指肠畸形,提示超声发现的出生后可骄正并正常生存的畸形胎儿,一定要排除染色体三体型的可能。     

内毒素结合肽表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

应用PCR技术,从含人NH@LBP cDNA的质粒中扩增出93bp的内毒素结合肽(endotoxin binding peptide,EBP)基因片段,插入原核融合蛋白表达质粒Pinpoint Xa3的多克隆位点构建成表达质粒,转化大肠杆菌DH5α,筛选得到阳性重组子Pinpoint Xa3-EBP并进行酶切鉴定及序列分析.异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白的表达,经SDS-PAGE及Westen blot鉴定得到分子量约为16.5kD的生物素化EBP融合蛋白,为进一步研究其内毒素拮抗效应打下良好基础,并为内毒素结合肽的研究提供了一条新的途径.     

一种新型兔源内毒素结合蛋白的分离纯化及体外生物活性的初步研究

目的　分离纯化一种新型的内毒素结合蛋白 ,并初步观察其生物学特性。　方法　建立兔烧伤合并内毒素血症模型 ,采其血清 ,经二步离子交换层析及凝胶过滤分离纯化 ,并经流式细胞仪分析、绵羊红细胞凝聚试验、氨基末端氨基酸残基测序等方法鉴定。将所获蛋白质作用于体外培养的人单核细胞 (U937) ,观测其分泌TNFα等细胞因子的状况。　结果　所获蛋白质的分子量为 48kDa( 48× 10 3) ,其N端 10个氨基酸序列为GSQGTFTSEE ,与美国国立图书馆蛋白质库中有关兔的氨基酸序列进行比较 ,未发现相同序列 ,暂命名为P48。它具有与内毒素结合蛋白相似的功能 ,能促进极低浓度的脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)与外周血单核细胞 (PBMC)结合 ,并促进U937分泌TNFα。　结论　从兔血清中能够分离纯化出带有生物学活性的新型内毒素结合蛋白P48,它具有与脂多糖结合蛋白 (lipoplysaccharidebindingprotein ,LBP)相似的生物学活性 ,并可促进炎症反应的发生。     

兔源内毒素结合蛋白的提取纯化及体外生物学活性研究

目的　从烧伤合并内毒素血症损伤兔的血清中分离纯化出内毒素结合蛋白 (Lipopolysaccharide BindingProteinLBP) ,以研究LBP在烧伤复合内毒素血症中的作用。方法　兔血清中蛋白质通过二步离子交换层析 (Bio Rex 70Resin、Mono Q)及凝胶过滤来分离纯化 ,并经流式细胞分析实验、绵羊红细胞凝聚实验、氨基末端氨基酸残基测序等方法鉴定 ,再将LBP作用于体外培养的人单核细胞 (U93 7) ,观测其分泌TNFα等细胞因子的状况。结果　获得一种分子量为 60× 10 3蛋白质 ,其N端 10个氨基酸序列为TNPGLITRIT ,与NCBI蛋白质库中有关兔的氨基酸序列进行比较 ,发现其与LBP的序列相同 ,它能促进脂多糖 (LipopolysaccharideLPS)与外周血单核细胞 (PBMC)结合 ,并能促进U93 7在极低浓度的LPS用下分泌TNFα。结论　从血清中分离纯化带有生物活性、全长LBP是可行的 ,LBP能促进极低浓度的LPS与单核细胞结合 ,介导炎性因子的分泌 ,从而促进炎症反应的发生。     

人乳腺癌组织中Tbx3基因表达变化及其意义

目的　探讨Tbx3基因在乳腺癌发生发展过程中的作用。方法　收取新鲜乳腺癌和癌旁乳腺组织各44例,以Tripure试剂提取细胞总RNA,以RT PCR法检测两种组织中Tbx3基因的表达水平,并比较其表达状况与乳腺癌相关临床病理因素之间的关系。结果　Tbx3基因在乳腺癌组织中的表达显著强于癌旁乳腺组织(P<0 01),与患者的年龄、肿瘤大小无关,但随着临床分期的进展、出现腋窝淋巴结转移、肿瘤浸润程度增加和组织学级别的增高,该基因的表达明显增强。结论　高表达的Tbx3基因可能在乳腺癌发生发展过程中起促进作用,并可能是乳腺癌进展中关键性转变的标志性基因之一。     

人源抗NH-LBP Fab抗体的制备和初步鉴定

目的：构建人源抗脂多糖结合蛋白氨基端片段（NH-LBP）Fab抗体的原核表达载体, 并制备高稳定性Fab抗体.方法：用PCR方法, 从可溶性表达抗NH-LBP抗体的重组质粒pComb3H-Fab中扩增出VH链和VL链基因序列, 分别构建表达质粒pET-28a（＋）-VH和pET-28a（＋）-VL, 并于工程菌BL21（DE3）star中分别表达及TALON柱芯亲和纯化, 将抗体片段VH和VL共同复性, 通过二硫键形成Fab抗体, 再采用ELISA法初步鉴定其与NH-LBP的结合力.结果：扩增出VL链和VH基因片段长约为650 bp和700 bp, 经BL21star表达出相对分子质量（Mr）约为28　000和30　000的目的蛋白, 共同折叠后所获得Fab抗体与NH-LBP具有较高的结合力.结论：成功地制备抗NH-LBP Fab抗体, 为临床抗炎研究提供了条件.     

抗人脂多糖结合蛋白氨基端片段抗体dsFv VL链的构建、表达和鉴定

目的将抗人脂多糖结合蛋白氨基端片段(NH-LBP)抗体的Fv L链引入半胱氨酸(Cys),并表达、纯化。方法应用mega-primer PCR方法,在抗NH-LBP单克隆Fab抗体的轻链基因骨架区中引入编码Cys的基因序列,将目的序列放入载体pET-28a( ),于工程菌BL21star(DE3)中表达及TALON柱芯亲合纯化,通过ELISA法初步鉴定其与NH-LBP的结合力。结果dsFv VL链的Thr21替换为Cys,扩增出基因片段长约为650bp,经BL21star(DE3)菌表达出相对分子质量约为28×103的目的蛋白,与NH-LBP具有一定的结合力。结论抗体轻链中成功引入了Cys。