经纤支镜取材肺癌细胞培养的研究

目的探讨经纤支镜活检取材并进行原代肺癌细胞培养的方法,以提高培养成功率.方法 30例经纤支镜活检肺癌组织进行原代细胞培养,对肿瘤组织形态与原代细胞培养成功率相关性进行分析.结果 30例经纤支镜取材肺癌细胞培养病例,原代培养成功17例,占总例数的56.67%.纤支镜下呈菜花样生长肺癌组织培养成功率84.62%(11/13);肿瘤沿管壁生长管腔狭窄表面有或无突起的培养成功率分别为66.67%(2/3)和37.5%(3/8);球状肿块质硬培养成功率16.67%(1/6),菜花状与其他采用确切概率法比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论经纤支镜活检肺癌组织体外原代细胞培养简单易行,阳性率可达56.67%,且原代培养成功率与纤支镜下肿瘤组织形态相关.     

含氮二膦酸盐/IL-2诱导肿瘤患者外周血γδT细胞增殖的作用

目的探讨药物（含氮二膦酸盐联合IL-2，N-BP／IL-2）诱导实体肿瘤患者外周血γδT细胞增殖作用。方法采用流式细胞仪测定103例肿瘤患者和43例健康人外周血总T细胞绝对值、御细胞绝对值和相对值，测定患者外周血经药物体外刺激后御细胞增殖指数和用药前后患者外周血总T细胞、γδT细胞绝对值和相对值。结果肿瘤患者和健康人外周血总T细胞绝对值、御细胞绝对值和御细胞相对值的中位数，分别为1306细胞/μl和1522细胞/μlP=0．003），64细胞/μl和162细胞/μl（P〈0．001），5％和11％（P〈0．001）。24例经药物体外扩增试验阳性的肿瘤患者治疗前后体内外周血总T细胞绝对值、γδT细胞绝对值和御细胞相对值的中位数，分别为1283细胞/μl和1552细胞/μl（P=0．001），54细胞/μl和107细胞/μl（P〈0．001），6％和8％（P=0．008）。全部肿瘤患者中外周血γδT细胞对药物体外诱导增殖反应阳性患者的百分率为68．9％。结论肿瘤患者外周血γδT细胞计数显著低于健康人。不同肿瘤患者外周血γδT细胞对药物刺激增殖的反应性不同。N-PB／IL-2在体内有显著增加御细胞数量的药理作用。体外增殖试验可作为N-PB／IL-2治疗患者的参考。     

脐带血单个核细胞体外诱导成CIK细胞及其抗肿瘤效应的实验研究

目的:探索建立CIK细胞的原代培养方 法并阐明其生物学特性,为该细胞在肿瘤生物过 继免疫治疗中的运用奠定基础。方法:通过加入 4种细胞因子(IFN γ、IL 2、IL 1及OKT3)将脐带 血单个核细胞(CBMNCs)诱导成CIK细胞;利用 流式细胞仪测定细胞表型、细胞增殖情况及细胞 周期的分布;利用改良的MTT法测定效应细胞 的体外细胞毒活性。结果:四种细胞因子的联合 运用,可诱导出大量的CIK细胞,其相对百分率 增长了163倍(从0.14%到22%),增殖高峰位 于第10～12天,针对K562、Hela和YTMLC肿瘤 细胞株,CIK细胞在效靶比为64∶1时的杀伤活 性分别为78.57±3.48、77.7±1.90和81.2± 1.51,在32∶1时分别为62.00±2.31、60.83± 2.80和64.07±2.87,在16∶1时分别为51.43± 2.51、52.87±2.91和54.10±3.11,均显著高于 LAK细胞及CBMNCs,P=0.001;而在效靶比为 8∶1(25.10±2.66、21.4±1.55和28.77±3.56) 及4∶1(17.10±2.10、11.93±1.86和9.49±2.92) 时与后两者差异无统计学意义,P=0.083。结 论:1)脐带血可作为诱导CIK细胞的重要来源 2)联合运用细胞因子能诱导出大量的CIK细胞 其增殖高峰位于培养的第12天,适宜在此期进 行临床运用;3)CIK细胞较LAK细     

糖尿病肾病患者血清血管内皮生长因子影响因素分析

目的　分析影响 2型糖尿病肾病 (DN)患者血清血管内皮生长因子 (VEGF)水平的因素。方法　采用双抗夹心ELISA法检测 12 2例糖尿病患者血清VEGF水平并与 4 0例健康体检者的血清VEGF水平作对比分析。使用SPSS10 0统计软件包对糖化血红蛋白 (GHbAlc)、血糖、尿白蛋白 (UALB)和肌酐 (Cr)等影响因素进行统计比较分析。结果　非糖尿病肾病 (NDN)组和糖尿病肾病组患者血清VEGF水平明显高于正常对照组(P =0 0 33;P =0 0 0 0 ;P =0 0 0 0 ) ;DN组患者血清VEGF水平明显高于NDN组 (P =0 0 2 0 ;P =0 0 0 0 ) ;糖尿病肾病患者血清VEGF水平受糖化血红蛋白、尿白蛋白等因素影响 (P =0 0 0 0 ;P =0 0 0 0 )。结论　糖尿病患者血清VEGF水平明显升高 ,糖尿病肾病患者血清VEGF水平受糖化血红蛋白、尿白蛋白等因素的影响 ,且随尿白蛋白的增加而增高 ,高水平的血清VEGF有可能参与糖尿病肾病的发生、发展过程 ,并在一定程度上反映病情的严重程度。     

两种外周血单个核细胞采集方法体外诱导CIK细胞的比较

目的比较两种外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)采集方法诱导的细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)扩增效率、细胞表型、杀伤肿瘤细胞的活性及其回输至肿瘤患者体内的免疫调节作用.方法 12例肿瘤患者共进行36次CIK细胞体外诱导、扩增,其中6例患者共18次扩增采用血细胞分离机采集PBMCs,另外6例患者共18次培养采用Ficoll密度梯度分离50 mL外周血方法采集PBMCs.结果采用血细胞分离机或Ficoll分离法采集PBMCs经体外诱导获得CIK(分别为A-CIK和F-CIK)细胞数分别为7.47×109(3.7-13.6×10)9和6.37×109(3.8-11.8×10)9.培养至14 d时,>90%的A-CIK和F-CIK细胞表型为CD3+,其中CD3+CD56+,NKG2D+细胞及细胞内TH1细胞因子均显著升高.效靶比为60:1时,A-CIK和F-CIK细胞对Daudi、K562及293的杀伤活性分别为(49.1±17.8)%和(55.3±11.5)%、(67.6±24.1)%和(58.1±17.6)%、(36.4±11)%和(33.7±14.8)%.给肿瘤患者回输自体A-CIK或F-CIK细胞14 d后,外周血中CD3+、CD8+及CD3+、CD56+细胞以及PBMCs内IFN-γ均显著升高.结论采集肿瘤患者50 mL外周血分离的PBMCs足以制备临床治疗使用的CIK细胞.     

肿瘤术后免疫抑制与肿瘤转移

0引言对大多数实体瘤来说,手术仍然是目前最有效的治疗方式.从长远着想,肿瘤必须切除以清除肿瘤转移的主要来源;但就短期来看,手术过程实际上可能会促进肿瘤的转移.手术可能促进肿瘤转移这一观点是数十年前被提出来的,当时一些外科医师注意到某些肿瘤患者在手术后短期内会很快发生转移[1].从那时开始这一假说便被反复修正但并未得到广泛认可[2-3].近年来,随着临床肿瘤学、肿瘤生物学和肿瘤免疫学等学科的迅速发展,现在已经到了重新评价这一假说的时候了.本文将对围手术期细胞免疫抑制及其相关机制、免疫治疗预防术后肿瘤转移的研究进展进行讨论.     

骨髓间充质干细胞预防手术后肿瘤肺转移动物模型研究

背景与目的:近年来研究发现,肿瘤患者术后髓系抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)较术前升高,且其促肿瘤血管生成和肿瘤生长作用增强,骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)可抑制MDSCs活化与增殖.但围手术期MDSCs的变化与肿瘤术后转移的关系及BMSCs能否通过抑制MDSCs预防手术后肿瘤转移尚不清楚.该研究拟探讨围手术期MDSCs变化与手术后肿瘤转移的相关性及BMSCs对围手术期MDSCs和手术后肿瘤转移的影响.方法:C57BL/6小鼠经尾静脉注射LLC细胞后分为4组:对照组(C组)、麻醉组(A组)、麻醉后开腹组(AL组)及麻醉后开腹并肝叶切除组(ALH组).AL组小鼠手术后分为2组:术后无治疗组(AL1组)和术后给予同系BMSCs治疗组(ALB组).流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中Gr-1+CD11b+细胞的含量;第14天计数小鼠肺表面转移灶.小鼠骨髓细胞体外诱导MDSCs体系中加入BMSCs共培养的方法探讨BMSCs对MDSCs生成的影响.结果:与C、A组相比,AL和ALH组小鼠肺转移灶显著增多(P<0.01);且ALH组较AL组显著增多(P<0.05).手术后AL和ALH组小鼠PBMCs中Gr-1+CD11b+细胞与C、A组相比显著升高;与AL组比较,ALH组Gr-1+CD11b+细胞显著升高.第14天,AL及ALB组小鼠肺表面转移灶数量分别为38.00±9.57和6.54±1.49,差异有统计学意义(P<0.01).ALB组小鼠PBMCs中Gr-1+CD11b+细胞与AL1组相比明显降低.小鼠骨髓细胞体外诱导MDSCs体系中加入BMSCs可显著抑制MDSCs的活化和增殖.结论:手术应激诱导MDSCs并促肿瘤肺转移形成,BMSCs可以抑制MDSCs的生成进而抑制手术后肺转移形成.     

肺癌免疫治疗临床研究进展

肺癌的恶性程度高、临床治疗效果差,因此迫切需要探索更为有效的治疗方法.免疫治疗作为一种极具发展前景的治疗方式有望为肺癌的治疗带来新的希望.近年来,越来越多的临床研究结果表明,免疫治疗应用于肺癌可以获得显著的临床疗效.随着对肿瘤特异性免疫反应的了解、肿瘤相关抗原的鉴定以及对肿瘤微环境的调控,必将进一步提高免疫治疗的疗效.本文就肺癌的过继细胞治疗和疫苗治疗的进展进行综述.     

细胞荷载溶瘤病毒治疗肿瘤的研究进展

静脉注射的溶瘤病毒可被免疫系统完全排除而不能发挥其抗肿瘤作用。研究表明,溶瘤病毒用细胞包装后可以有效避免病毒被机体免疫系统清除,同时,病毒和载体细胞的生物学活性不受影响;另外采用具有肿瘤细胞、肿瘤基质或肿瘤解剖定位靶向性的细胞载体,可以将病毒准确地输送至肿瘤病灶,有效发挥溶瘤病毒的抗肿瘤效应。本文将对细胞荷载溶瘤病毒治疗肿瘤方面的研究进展做一综述。