反转录病毒载体介导猪MHCⅡ分子在猪骨髓细胞中的表达

目的构建猪MHC Ⅱ分子的反转录病毒表达载体，建立产生病毒颗粒的包装细胞株，体外转导小型猪骨髓细胞并观察目的基因的表达情况，为研究小型猪转导同种异体MHC Ⅱ分子对于肝脏移植特异性免疫耐受的诱导提供实验基础和实验材料。方法利用基因重组技术将目的基因SLA-DRB^dd、SLA-DQA^dd和SLA-DQB^dd克隆到反转录病毒载体pLNCX2上，通过脂质体转染包装细胞AmphoPack^TM-293细胞，从G418筛选阳性克隆细胞培养上清中获得了有感染性的病毒颗粒；并对体外培养的猪骨髓细胞进行了感染，采用Nothern杂交和逆转录．聚合酶链反应（RTPCR）等方法检测了目的基因在骨髓细胞中的表达。结果经过酶切和测序验证已成功构建了MHC Ⅱ分子的反转录病毒表达载体，在转染AmphoPack^TM-293细胞后可以产生有感染性的重组病毒颗粒，稳定的CFM-GFG418抗性率为6％～11％，RT结果显示抗性细胞中有目的基因的RNA转录产物存在，而转染空载体的对照组没有。结论重组有目的基因的逆转录病毒载体pLNCX2经过包装细胞AmphoPack^TM-293产生的病毒颗粒可以有效地将猪MHC Ⅱ分子转导入猪的骨髓细胞并获得长期稳定的表达。     

缺氧预适应抑制内皮细胞冷缺氧/温复氧损伤

目的 研究缺氧预适应对内皮细胞冷缺氧／温复氧损伤的作用及可能机制。方法 培养的内皮细胞ECV-304分成4组，A组，对照组；B组，冷缺氧／温复氧（A／R）组95％N2／5％a=）2缺氧装置中用4℃UW液保存24h；C组，缺氧预适应组（APC），内皮细胞在缺氧前遭受4个循环短时间缺氧／复氧；D组，缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）抑制组：缺氧预适应前，细胞培养液中加入5μmol／L的HIF-1α抑制剂NS398，余同C组。缺氧结束后，各组37℃5％CO2 95％空气中复氧6h。分别以逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法、Western blot法检测各组HIF-1α mRNA和蛋白表达，内皮细胞保护作用通过细胞存活率（台盼蓝拒染法）、LDH释出率及ICAM-1的表达判定。结果 缺氧预适应明显上调HIF-1α mRNA和蛋白表达，显著抑制冷保存内皮细胞缺氧／复氧损伤，表现为更高的细胞存活率，更少的LDH释出和ICAM-1的表达。而HIF-1α抑制剂可逆转这种保护作用。结论 缺氧预适应能有效地抑制冷保存内皮细胞缺氧／复氧损伤，这种细胞保护作用可能是通过HIF-1α介导的。     

肝移植病人术后急性肾功能衰竭18例临床分析

目的:探讨影响肝移植术后发生急性肾功能衰竭的原因及处理方法。方法:回顾性分析我院91例肝移植病人中发生与未发生术后急性肾功能衰竭病人的临床资料,采用单因素分析和Logistic回归模型进行多因素分析。结果:肾衰组病人1年生存率低于对照组;与术后发生早期急性肾功能衰竭的有关因素包括术前血清肌酐、总胆红素、总手术时间、术中出血量、输血量、术中输液总量、术中尿量。术前血清肌酐高和术中尿量是术后早期急性肾功能衰竭发生的独立影响因素。移植术后发生急性肾功能衰竭的病人ICU留置时间延长,术后住院时间延长,住院费用升高。结论:肝移植术后有较高的急性肾功能衰竭发生率,对术后少尿、血清肌酐水平升高的病人及早实施肾脏替代等治疗能有效降低其发病率和死亡率。     

伴有食道静脉曲张的早期肝癌的治疗

肝细胞肝癌伴有食道静脉曲张的治疗,对外科医生仍是一个难题,因为大多数此类病人存在进展期肝硬化。这类病人常随着肿瘤进展发生食道曲张静脉破裂出血,而肝脏手术也常导致短暂的门脉高压。为了提高肝脏手术的疗效,预防食道曲张静脉破裂出血是重要的。目前硬化剂治疗作为对食道静脉曲张的治疗已被广泛接受,逐渐取代手术治疗。作者报告22例肝癌伴有食道静脉曲张的病人,经过积极肝切除术,术中行断流术、围手术期行硬化剂治疗或先后行两种治疗,对照37倒小肝癌不伴食道静脉曲张病人行肝切除术的疗效。病例和方法:研究组(A组)22例,肝癌伴有食     

金纳多对非协调性异种大鼠肝移植缺血再灌注损伤的防治作用

目的 探讨金纳多对非协调性异种肝移植缺血再灌注损伤的防治作用。方法 对豚鼠和ＳＤ大鼠非协调性异种肝移植进行金纳多（银杏黄酮配糖体）注射液防治的分析,实验分为术前、术后金纳多治疗组和对照组,观察异种肝移植后肝脏和心脏的病理变化及肝脏门脉血流变化。结果 肝移植术后,两组的肝脏和心脏病理变化相似,肝内小血管腔内血小板、中性粒细胞聚集和纤维蛋白沉着造成广泛血栓,引起血管阻塞和组织梗死。心肌细胞破坏,心肌纤     

非协调性异种肝移植后再灌注障碍及超微结构变化的观察

目的：探讨非协调性异种肝移植供肝再灌注障碍与超急性排斥反应的可能关系。方法：应用改良缝合法建立豚鼠至大 肝移植动物模型,观察供肝再灌注６０分钟内门脉灌注和肝脏组织超微结构的变化。结果：移植６０分钟供门脉灌注明显减少;肝细胞的线粒体明显肿胀,线粒体嵴破坏、结构率乱,内质网扩张、脱粒,肝细胞狄氏间隙地血窦内可见到血小板和粒细胞粘附、聚集和血栓形成,部分内皮细胞消失。受体心肌细胞肿胀,肌原纤维排列率乱、     

肝癌综合治疗进展

原发性肝癌是我国最常见的恶性消化道肿瘤之一,每年约有26万人发病,其中11万人死于肝癌,且发病率还在上升[1]。由于组织大规模定期普查高危人群,广泛开展肝癌的早期发现、早期诊断、早期治疗,使肝癌手术切除率显著提高。随着对肿瘤认识的不断加深,在肿瘤的治疗中综合治疗已经愈来愈占重要的地位,合理而有计划的综合治疗取代了传统的单一治疗。目前肝癌的治疗主要是以手术切除为主,辅以介入疗法、化疗、免疫疗法和中医疗法,根据肝癌的不同发展阶段应用不同模式的综合治疗方法进行治疗,可取得最佳的疗效。1　肝癌的一期手术切除对于手术可以切…     

应用MELD与CTP评分预估乙型肝炎患者肝移植后早期临床结果的比较分析

目的 探讨术前终末期肝病模型(MELD)评分和Child-Turcotte-Pugh(CTP)评分预估乙型肝炎患者肝移植后早期临床结果 的价值.方法 以31例接受首次肝移植、原发病为慢性乙型肝炎、肝硬化的患者为对象,术前对其进行MELD评分和CTP评分,并计算术前1个月和术前即时MELD评分的差值(△MELD).均采用背驮式肝移植术式.观察患者的术中情况,统计受者术后6个月存活率以及各类并发症的发生率,分析3种评分与它们的相关关系.结果 31例中,MELD评分<25分者21例,≥25分者10例;△MELD值<5分者23例,≥5分者8例;术前CTP评分为A级者5例,B级者5例,C级者21例.术前MELD评分<25分者和≥25分者的6个月存活率分别为85.7%和50.0%(P<0.05);△MELD值<5分者和≥5分者的6个月存活率分别为91.3%和25.0%(P<0.01);CTP分组中,A、B、C级间6个月存活率的差异无统计学意义.MELD评分<25分者和△MELD值<5分者的手术耗时明显短于评分较高者(P<0.05,P<0.01),其术中少浆血的需要量也显著减少(P<0.01);在术中大出血和低血压的发生率上,△MELD值<5分者明显低于≥5分者(P<0.01;P<0.05).术前MEID评分<25分者术后败血症和腹腔感染发生率明显低于≥25分者(P<0.05,P<0.05);△MELD值<5分者术后急性肾功能衰竭、胆漏、败血症和腹腔感染发生率明显低于≥5分者(P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.01).经多因素回归分析,仅有△MELD值与受者术后存活率呈负相关.结论 术前MELD评分能较好地预测慢性乙型肝炎患者肝移植术后的早期临床结果 ;术前MELD评分≥25分和△MELD≥5分,患者肝移植后的存活率低,并发症的发生率较高,预后较差.     

锰苯甲酸卟啉干预活性氧在小肝移植物缺血再灌注损伤中的作用及其意义

目的 观察锰苯甲酸卟啉(MnTBAP)对SD大鼠小肝移植物模型缺血再灌注损伤的治疗及保护作用.方法 采用二袖套法建立供肝/标准肝体积比(GV/SV)≤30%的小肝移植物大鼠模型,将大鼠随机分为A:假手术组(n=24),B:对照组(n=24),C:MnTBAP治疗组(n=24),于复流后3、6、12、24 h各取6只处死取材,检测各组大鼠肝组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA表达、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、肝功能指标和肝细胞凋亡间的状态.结果 与假手术组比较,对照组肝组织TNF-α mRNA及MDA、MPO含量显著升高(P<0.01),肝丙氨酸转氨酶(ALT)活性显著升高(P<0.01),肝细胞凋亡明显增多(P<0.01);而MnTBAP治疗组的肝组织MDA、MPO含量较对照组显著降低(P<0.05),肝细胞凋亡减少,且在术后6、12、24 h,肝TNF-α mRNA表达均下降(P<0.05),血清ALT水平也明显降低(P<0.01).结论 MnTBAP可以抑制中性粒细胞的呼吸爆发,降低肝组织TNF-α mRNA表达、减轻细胞膜损伤程度,对缺血肝损伤有良好的保护作用.     

外科系统内的院内感染致病菌谱及其抗生素耐药情况

目的：研究外科系统内的院内感染的病原菌谱及其对常用抗生素的耐药性情况，以指导临床用药。方法：采用Vitek-Ams System和Kirby-Bauer法，对外科276例次院内感染标本进行细菌培养并测定其对多种抗生素的耐药性。结果：共有121例次院内感染标本细菌培养阳性，得到致病菌181株。结论：细菌谱和耐药性的监测对控制外科院内感染有重要意义。