补充维生素D3对英夫利昔单抗治疗克罗恩病临床缓解的影响

目的:回顾性研究英夫利昔单抗(IFX)治疗过程中补充维生素D3对克罗恩病患者临床缓解的影响。方法:通过检索温州医科大学附属第二医院临床资料数据库,筛选2014年1月至2020年1月于消化内科接受IFX治疗的73例初发型中重度克罗恩病患者,其中血清25羟维生素D[25(OH)D]水平<50 nmol/L即维生素D缺乏者5...     

乌司奴单抗双静脉诱导治疗复杂性肛瘘型克罗恩病的疗效分析

目的分析乌司奴单抗(UST)双静脉诱导治疗复杂性肛瘘型克罗恩病(PFCD)的疗效。方法回顾性分析2022年1月至2023年3月就诊于温州医科大学附属第二医院并确诊为复杂性PFCD患者的临床资料。所有患者分别于第0、8周给予足量UST(6 mg/kg)单次静脉输注后, 每隔8周单次皮下注射UST 90 mg维持治疗。第8、16、22～26周采用肛周疾病活动指数(PDAI)评估肛瘘临床结局, Harvey-Bradshaw指数(HBI)评估整体活动度。第22～26周采用Van Assche指数(VAI)评估肛瘘影像结局, 简化克罗恩病内镜评分(SES-CD)评估肠道结局事件。比较UST治疗前后上述指标的差异。依据是否采用UST一线治疗将PFCD患者分为一线UST治疗组与非一线UST治疗组, 比较两组之间肛瘘应答率和缓解率、肠道应答率和缓解率以及整体活动度应答率和缓解率的差异。结果共纳入60例PFCD患者, 男46例, 女14例, 年龄[M(Q1, Q3)]25.0(20.8, 30.0)岁。第8、16、22～26周的肛瘘临床应答率[41.7%(25/60)、55.0%(33/60)、63....     

FCGR3A基因变异对克罗恩病发病风险及英夫利昔单抗临床应答的影响

目的：探讨FCGR3A(rs396991、rs4656317)基因变异对克罗恩病(CD)发病风险及英夫利昔单抗(IFX)临床应答的影响。方法：收集2012年1月至2021年1月温州医科大学附属第二医院育英儿童医院确诊的225例CD患者和476名性别、年龄相匹配的正常对照者,应用基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱技术检测FCGR3A(rs396991、rs4656317)的基因型,并进行连锁不平衡(LD)和单倍型分析。225例CD患者中,98例初发型活动期CD患者[克罗恩病活动指数(CDAI)≥150分]于第0、2、6周给予IFX(5 mg/kg)静脉注射诱导缓解,随后每隔8周注射相同剂量的IFX。第14周时,依据CDAI和CD简化内镜评分(SES-CD)分为应答组和无应答组,回顾性分析FCGR3A基因变异对IFX临床应答的影响。结果：CD组中rs396991的变异等位基因C频率高于正常对照组(39.33%vs. 31.83%,P=0.006)。CD组中rs4656317的变异等位基因C和变异基因型GC+CC频率均高于正常对照组(45.33%vs. 36.55%,P=0.002;71.1...     

Tim-3调控巨噬细胞极化在克罗恩病发生发展中的作用

目的：基于生物信息学技术探索T细胞免疫球蛋白黏蛋白3（Tim-3）基因在克罗恩病（CD）肠组织中的表达、临床意义及可能机制。方法：从公共基因表达数据库（GEO）中下载CD的表达谱芯片GSE112366、GSE75214、GSE16879 和GSE186582。GEO2R在线工具进行数据处理和分析。首先观察Tim-3 在正常组织、活动期CD和缓解期CD肠组织的mRNA表达水平,利用Spearman秩相关分析观察活动期CD患者肠组织Tim-3表达水平与CD简化内镜（SES-CD）评分的关系。随后分析CD患者肠组织Tim-3的表达水平在英夫利昔单抗（IFX）或乌司奴单抗（UST）治疗前后的差异,并利用受试者工作特征（ROC）曲线评估第0周CD患者肠组织Tim-3 的mRNA表达水平对生物制剂临床疗效的预测价值。Cibersort在线工具估算各数据集中CD患者肠组织M0、M1和M2 型巨噬细胞比例,并进行肠组织Tim-3 表达与巨噬细胞比例的相关性分析。收集温州医科大学附属第二医院育英儿童医院12 例活动期CD患者和15 名性别年龄匹配的健康对照者,采用免疫荧光方法测定肠组织中Tim-3、CD68的表达水平和CD68+ Tim-3+巨噬细胞的数量。最后收集6例活动期CD患者和8 名健康对照者,采用荧光定量PCR法测定肠组织中Tim-3 和M1、M2相关细胞因子的mRNA表达水平。结果：在4个数据集中均发现,与正常肠组织相比,Tim-3的mRNA表达水平在活动期CD患者肠组织中显著增高。活动期CD患者较缓解期CD患者肠组织中Tim-3的mRNA表达水平亦显著升高。活动期CD患者肠组织Tim-3的mRNA表达水平与SES-CD评分呈正相关（r =0.39,P ＜0.001）。IFX/UST治疗后CD患者肠组织Tim-3的mRNA表达水平较治疗前降低。此外IFX应答组与无应答组相比,肠组织Tim-3的mRNA表达水平较低。治疗第4～6 周,ROC曲线分析显示第0 周活动期CD患者肠组织Tim-3 表达水平对IFX疗效具有预测价值（AUC=0.70,P =0.04）。Cibersort分析发现肠组织Tim-3的mRNA表达水平与活动期CD患者肠组织中M0及M1型巨噬细胞浸润水平显著正相关（P＜0.05）。免疫荧光结果显示CD患者炎性肠黏膜中CD68 和Tim-3 表达均高于健康对照者（P ＜0.05）。此外,CD68+ Tim-3+双阳性巨噬细胞比例在CD患者炎性部位亦明显增多。荧光定量PCR结果显示CD患者肠组织Tim-3 mRNA表达水平较健康对照者高（P ＜0.05）,且CD患者肠组织Tim-3 mRNA表达水平与M1型巨噬细胞相关细胞因子TNF-α和IL-1β的表达呈正相关。结论：Tim-3 可能通过影响M1型巨噬细胞极化在CD发生发展中扮演重要角色,且可能预测早期IFX疗效。     

葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎小鼠中TRAIL-R基因敲除对Th17细胞凋亡的影响

目的：采用葡聚糖硫酸钠（DSS）构建实验性结肠炎小鼠模型,探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的受体基因敲除（TRAIL -R -/-）对结肠炎症及Th17细胞凋亡的影响。方法：将C57BL/6品系小鼠分为4组：TRAIL -R -/-结肠炎组、TRAIL -R -/-对照组、野生型（WT）结肠炎组、WT对照组,每组各9只。结肠炎组饮用3.5%的DSS,对照组饮用清水。7 d后,从临床表现和组织病理学上评估小鼠结肠炎的严重程度。取外周血单个核细胞（PBMCs）和结肠黏膜固有层单个核细胞（LPMCs）,采用流式细胞术检测Th17细胞占CD4+T细胞的比例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、Western blot和酶联免疫吸附测定（ELISA）检测视黄酸相关孤儿受体（ROR-γt）和IL-17A的mRNA和蛋白表达水平。采用TUNEL荧光染色技术及激光共聚焦显微镜观察结肠组织中Th17细胞的凋亡率。通过比色法检测结肠组织中凋亡蛋白酶Caspase 3、Caspase 8和Caspase 9的活性。结果：DSS诱导后,TRAIL -R -/-小鼠较WT小鼠发生了更为严重的结肠炎。TRAIL -R -/-结肠炎小鼠PBMCs中Th17 细胞的比例（P ＜0.01）,以及ROR-γt和IL-17A的mRNA和蛋白表达水平均显著高于WT结肠炎小鼠（均P ＜0.05）。TRAIL -R -/-结肠炎小鼠LPMCs中Th17细胞的比例（P ＜0.01）,以及ROR-γt和IL-17A的mRNA和蛋白表达水平均显著高于WT结肠炎小鼠（均P ＜0.05）。与WT结肠炎小鼠相比,TRAIL -R -/-结肠炎小鼠的结肠组织中Th17细胞的凋亡率（P ＜0.01）以及Caspase 3和Caspase 8的酶活性均显著降低（均P ＜0.01）。结论：DSS诱导后,TRAIL -R -/-小鼠的结肠炎症较WT小鼠更为严重,原因可能是Th17细胞凋亡减少,其数目和活性增高所致。     

死亡受体4和5的基因多态性与溃疡性结肠炎易感性的相关性

目的 探讨死亡受体4和死亡受体5基因多态性与UC易感性的关系.方法 收集362例UC患者和490名健康对照者,采用微测序技术(SNaPshot)检测死亡受体4(rs20575,rs13278062)和死亡受体5(rs1047266)3个位点的基因型,采用卡方检验和Fisher确切概率法比较各位点等位基因和基因型频率的分布差异,非条件Logistic回归分析死亡受体4和死亡受体5基因多态性与UC患者临床病理特征的关系.结果 UC组中死亡受体4(rs20575)突变等位基因G和基因型CG+GG的频率高于健康对照组[3.18％(23/724)比1.63％(16/980),x2=4.439,OR=1.977,95％CI:1.037～3.769,P=0.035;6.08％(22/362)比3.27％(16/490),x2 =3.863,OR=1.917,95％CI:0.992～3.705,P=0.049].重度UC患者死亡受体4(rs20575)的突变等位基因G和基因型CG+GG的频率高于轻中度UC患者[8.00％(8/100)比2.40％(15/624),OR=3.530,95％ CI:1.456～8.560,P=0.008;16.00％(8/50)比4.49％(14/312),OR=4.054,95％CI:1.605～10.243,P=0.004].死亡受体4(rs13278062)的突变等位基因和基因型频率在UC组与健康对照组间差异均无统计学意义(P均＞0.05).重度UC患者死亡受体4(rs13278062)的突变等位基因T和基因型GT+TT的频率均低于轻中度UC患者[23.00％(23/100)比36.06％(225/624),OR=0.530,95％CI:0.323～0.868,P=0.011;42.00％(21/50)比61.22％(191/312),OR=0.459,95％CI:0.250～0.841,P=0.010].死亡受体5(rs1047266)突变等位基因和基因型频率在UC组和健康对照组间差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 死亡受体4(rs20575)位点突变等位基因G携带者罹患UC的危险性增加,死亡受体4(rs13278062)基因突变可能影响UC的病情严重程度,而死亡受体5(rs1047266)基因多态性与UC无关联.     

补充维生素D对乌司奴单抗治疗克罗恩病临床疗效影响的回顾性分析

目的回顾性分析补充维生素D对乌司奴单抗(UST)治疗克罗恩病患者临床疗效的影响。方法通过检索温州医科大学附属第二医院临床资料数据库, 收集2021年5月至2023年2月接受UST一线治疗的71例中、重度活动期克罗恩病患者资料。采用哈维-布拉德肖指数(HBI)评估克罗恩病疾病活动度, 简化克罗恩病内镜评分(SES-CD)评估克罗恩病肠道炎症严重度。依据UST治疗的同时是否补充维生素D(400 U/d)将克罗恩病患者分为补充组(41例)和未补充组(30例)。再依据基线血清25-羟维生素D[25(OH)D]水平, 将克罗恩病患者分为维生素D缺乏组(<20 μg/L, 42例)和不缺乏组(≥20 μg/L, 29例)。主要观察终点是UST治疗第24周时补充组与未补充组之间临床缓解(HBI评分≤4分)率和黏膜愈合(SES-CD评分≤2分)率的差异。次要观察终点是UST治疗第8周时补充组与未补充组之间临床应答(HBI评分较第0周下降≥3分)率和生物化学缓解[C反应蛋白(CRP)≤5 mg/L]率的差异。采用多元线性回归模型分析血清25(OH)D水平与克罗恩病患者临床病理特征的关系, 采用多因...     

SEC1基因敲除对实验性结肠炎小鼠严重程度和肠道菌群的影响

目的 探讨一种小鼠α-(1,2)-岩藻糖基转移酶SEC1基因敲除(SEC1-/-)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的结肠炎小鼠中结肠炎症和肠道菌群的影响。方法 采用CRISPR/Cas9技术构建SEC1-/-C57BL/6小鼠,通过连续口服3%葡聚糖硫酸钠5天构建实验性结肠炎模型,设置SEC1-/-结肠炎组(14只)、野生型结肠炎组(15只)和野生型对照组(6只)共3组。通过疾病活动度评分和体质量变化评估结肠炎严重程度,收集小鼠升结肠内粪便样本,采用高通量16s-rDNA测序技术检测粪便菌群组分,通过生物信息分析比较肠道菌群组分的差异。组间比较采用方差分析、独立样本t检验或秩和检验。结果饮用DSS第7天,与野生型结肠炎组比较,SEC1-/-结肠炎小鼠体质量显著下降(77.9%±4.7% vs 87.0%±6.2%,P<0.05),而疾病活动指数显著升高(7.3±2.8 vs 9.4±2.6,P <0.05)。野生型结肠炎小鼠Simpson指数显著低于对照组小鼠(0.83 vs 0.91,P<0.05),但两组小鼠肠道菌群OTU个数、Shannon和chao1指数比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。与野生型结肠炎组比较,SEC1-/-结肠炎组肠道菌群的OTU个数显著增多(305 vs 194,P<0.05),Shannon和chao1指数均显著增加(4.71 vs 4.09;332 vs 207;P均<0.05),乳酸杆菌属(28.95 vs 2.23)、梭菌属(0.13 vs 0.01)和糖单胞菌属(1.82 vs 0.09)的丰度均显著增多(P均<0.05)。结论 SEC1基因敲除使葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎小鼠模型严重程度加重,并影响结肠炎小鼠的肠道菌群组成。     

调节性B细胞和调节性T细胞与英夫利昔单抗治疗克罗恩病临床疗效的关系

目的探讨外周血调节性B细胞(Breg细胞)和调节性T细胞(Treg细胞)与英夫利昔单抗治疗克罗恩病临床疗效的关系。方法 2017年1月至2019年6月期间,在温州医科大学附属第二医院收集32例活动期克罗恩病患者和33名性别、年龄相匹配的健康对照者。取空腹静脉血5 ml,分离外周血单个核细胞(PBMCs),经多色流式细胞术检测PBMCs中Breg细胞(CD3-CD19+IL-10+B细胞)占B细胞的比例,以及Treg细胞(CD4+CD25+Foxp3+T细胞)占CD4+T细胞的比例。克罗恩病患者于第0、2、6周静脉注射英夫利昔单抗(5 mg/kg)诱导缓解,其后每隔8周给予相同剂量的英夫利昔单抗维持治疗。于第14周再次检测PBMCs中Breg细胞比例和Treg细胞比例,并与第0周进行比较。同时,克罗恩病患者分别于第0周和第14周检测C反应蛋白(CRP)、白细胞计数、血小板计数、血细胞沉降率辅助评估英夫利昔单抗疗效。结果英夫利昔单抗治疗前,克罗恩病组与健康对照组之间整体比较,PBMCs中Breg细胞比例较高[(3.15±1.17)%比(2.64±0.38)%,P=0.024],Treg细胞...     

剖宫产术后子宫瘢痕处妊娠的MRI表现

目的探讨剖宫产术后子宫瘢痕处妊娠的MRI表现特征及诊断价值。方法搜集经临床证实剖宫产术后子宫瘢痕处妊娠患者12例,均行MRI扫描,回顾性分析其MRI表现。结果 12例中3例妊娠囊黏附于子宫前下壁,9例植入子宫前下壁,前壁变薄,其中3例明显前凸,呈反"3"或"C"字征。妊娠囊呈类圆形或卵圆形10例,2例形态不规则,边界较清晰。在T1WI呈等、低信号,可混杂斑片状高信号,在T2WI及STIR序列上呈混杂高信号,病灶周围可见环形线状低信号包膜带,包膜完整4例,呈典型环征3例,完整孕囊1例;包膜不完整8例,不规则环征4例,囊中囊2例,不规则混杂信号2例。结论结合剖宫产史、临床表现及血HCG值等临床资料,MRI能明确诊断剖宫产术后子宫瘢痕处妊娠,对病情评估及治疗有重要参考价值。