骨唾液酸蛋白在体外培养人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的角色

目的：骨唾液酸蛋白在骨矿化形成方面扮演重要角色，实验观察其是否能诱导体外培养的人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。方法：实验于2005—10／2006—12在解放军广州军区广州总医院医学实验科完成。①材料来源：选取在本院体检的健康志愿者2人，对本实验均知情同意。采用Ni-NTA亲和纯化技术，从本室构建的毕赤酵母GS115／pPICZaA-hbsp发酵上清中纯化重组人骨唾液酸蛋白。②实验方法：对健康志愿者进行髂骨穿刺抽取骨髓液，采用贴壁法培养得到骨髓间充质干细胞。设立4组：骨唾液酸蛋白组添加0．1nmol／L骨唾液酸蛋白；成骨诱导液组添加10nmol／L地塞米松、10mmol／L磷酸甘油、50mg／L抗坏血酸；联合组添加上述两组的所有试剂；空白对照组不添加任何处理因素；各组均处理细胞12d。⑧实验评估：光镜及电镜观察培养的细胞形态；以细胞计数法测定生长曲线，应用流式细胞仪分析细胞周期，采用免疫荧光细胞化学法和流式细胞分析检测干细胞标志物STRO-1的表达；生化试剂盒测定碱性磷酸酶活性；von Kossa染色法检测钙沉积。结果：①单个骨髓间充质干细胞为长梭形，经骨唾液酸蛋白处理后细胞大而扁平，原来密集的克隆分散开。②与空白对照组比较，骨唾液酸蛋白组引起细胞生长曲线右移，细胞Go／G，期比例平均增加12．09％（P〈0．01），S期比例减少65．92％（P〈0．01），STRO-1阳性细胞百分率下降26．54％（P〈0．01）。⑧与空白对照组比较，骨唾液酸蛋白组细胞碱性磷酸酶活性增加50．0％，成骨诱导液组增加59．5％，联合组增加71．43％，并且随着处理时间的延长，活性增加越显著。④空白对照组细胞vonKossa染色呈阴性，其余各组均呈阳性。其中联合组的黑色矿化结节体积最大、数目最多；骨唾液酸蛋白组的结节体积较小、数目较少；成骨诱导液组居中。结论：骨唾液酸蛋白对人骨髓间充质干细胞有促进成骨分化和矿化作用，且与成骨诱导液联用效果更佳。     

兔下尿路缺血模型的制备与改进

有研究表明下尿路缺血在下尿路疾病病程中发挥重要作用[1-3].通过球囊损伤髂动脉内膜研究人员成功制造了兔下尿路缺血模型以研究其在下尿路疾病中作用机制[4],但该方法存在一定缺点.我们对兔下尿路缺血模型进行改进并与原模型对比观察.     

安可梦口服液对慢性疲劳小鼠免疫调节功能的影响

目的:探讨中药复方制剂安可梦口服液治疗慢性疲劳综合征的作用机制。方法:选用BALB/c小鼠,应用强制冷水游泳加进食时电击复合应激因素建立慢性疲劳动物模型,除正常组(n=12)外,成模小鼠分为4组:模型组、复方阿胶浆组犤50g/(kg·d)复方阿胶浆灌胃犦、安可梦口服液小剂量组和大剂量组犤分别以25g/(kg·d)和50g/(kg·d)安可梦口服液灌胃犦,每组12只。正常及模型组灌胃生理盐水0.5mL。各组灌胃2次/d,连续14d。对各组动物白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)、干扰素、自然杀伤细胞的活性进行了检测。结果:模型组的IL-2、干扰素、自然杀伤细胞活性比正常组显著降低,差异有显著性(q=12.88,P<0.01);安可梦口服液大、小剂量组的IL-2、干扰素、自然杀伤细胞活性与模型组比较均有显著升高,差异有显著性(q=10.06,8.28;P均<0.01),且作用优于复方阿胶浆组(q=6.68,2.12;P<0.05～0.01)。结论:提高和调整机体低下的IL-2-干扰素-自然杀伤细胞免疫调节网水平,可能是安可梦口服液发挥滋补肝肾、健脾养心、安神定志功效,治疗慢性疲劳综合征的机制之一。     

缺血性老年大鼠部分脑区及小脑内源性神经生长因子的变化

背景：神经生长因子(nerve growth factor，NGF)在神经元的生长、存活、分化、保护神经元的退行性改变及神经损伤的自我保护与修复中具有重要作用，目前NGF保护神经元的分子病理学机制还有许多需要深入探讨的。目的：观察脑缺血老年大鼠部分脑区及小脑内源性神经生长因子的变化。设计：完全随机对照实验研究。地点与材料：本研究的地点为广州军区广州总医院实验科：材料为36只SD大鼠2～2．5年龄，雌雄不限。干预：用夹闭两侧颈总动脉法建立不完全性脑缺血动物模型，将SD大鼠随机分成正常对照组(A组)、假手术组(B组)、缺血30min再灌注6h(C组)、12h(D组)、24h(E组)、48h(F组)、7d(G组)和14d(H组)，用免疫组织化学ABC染色法检测部分脑区神经元及小脑NGF的表达。在透射电镜下观察各组神经元超微结构变化。主要观察指标：各组神经元NGF表达定性及定量观察。结果：除A、B组外，各组顶叶皮质神经元均有NGF表达，其中E组和G组中量表达，神经元数量分别为(58．4&;#177;9．18)mm^2和(56．2&;#177;10．87)mm^2；除A组、B组、F组和H组外各组海马均有少量表达，神经元数量C组为(28．8&;#177;6．42)mm^2、D组(30．4&;#177;12．12)mm^2、E组(24．2&;#177;5．18)mm^2、G组(15．6&;#177;4．39)mm^2；小脑均没有表达；再灌注超过48h组海马神经元和小脑蒲肯野细胞损伤较重，顶叶皮质神经元轻度水肿；结论：老年大鼠在受到缺血性脑损伤时，内源性NGF在大脑皮质和海马有部分表达，小脑始终没有表达。内源性NGF对脑组织具有一定的保护作用，早期注射外源性NGF可能对脑组织损伤后修复具有重要意义。     

SPF级Balb/c小鼠脏器质量、脏器系数、血常规、血生化指标的测定与比较

背景：实验动物重要基础数据的标准化测定,是实行动物标准化监督管理的重要依据。 目的：测定SPF级Balb/c小鼠主要脏器质量、脏器系数、血常规、血生化指标,并进行比较。 方法：取18 g左右Balb/c小鼠240只,雌雄各半,饲养1周后,精确称量体质量和主要脏器质量,计算脏器系数,并检测血常规及血生化指标。 结果与结论：雌性与雄性Balb/c小鼠比较：①肺、脾、双肾、心、膀胱质量差异有显著性意义(P < 0.01或 P < 0.05)。②肺、脾、双肾、膀胱脏器系数差异有显著性意义(P < 0.01或 P < 0.05)。③白细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞百分比、红细胞、血红蛋白、红细胞平均血红蛋白浓度、红细胞分布宽度、嗜酸性粒细胞百分比差异有显著性意义(P < 0.01或 P < 0.05)。④总蛋白、白蛋白、白球比、血糖、肌酐、尿酸、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、铁、磷、尿素氮差异有显著性意义(P < 0.01或 P < 0.05)。说明性别对SPF级Balb/c小鼠主要脏器、主要脏器系数、血常规、血生化指标有影响。     

伽玛刀照射癫痫大鼠海马神经元超微结构及线粒体计量分析

目的观察低剂量伽玛刀照射对癫大鼠海马神经元超微结构的影响。方法建立大鼠青霉素局灶性癫动物模型,将58只SD大鼠分为对照组、癫模型组和伽玛刀照射组。对大鼠行伽玛刀照射,照射中心剂量24 Gy、周边剂量12 Gy、等剂量曲线50%,术后3 h～60 d取靶区海马,透射电镜观察并采用图像分析系统对线粒体形态进行计量分析。结果对照组细胞结构基本正常;癫模型组可见神经元细胞器明显空化,线粒体体密度、数密度、比表面和嵴膜密度较对照组明显减少(均P<0.05),线粒体平均体积和平均截面积较对照组明显增大(均P<0.05)。伽玛刀照射组早期线粒体的平均体积、平均截面积、数密度、比表面与对照组相比差异显著(均P<0.05),中期和晚期线粒体各项参数与对照组相比差异不显著。结论大鼠癫发作早期线粒体形态结构变化明显,低剂量伽玛刀照射对神经元修复起重要作用。     

锂-匹罗卡品颞叶癫癇模型的建立及苔藓纤维出芽的动态变化

目的 研究锂-匹罗卡品颞叶癫癇模型大鼠致癇后NFDA2性发作的行为学特点及海马结构病理改变的动态变化.方法 将所有Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,实验组大鼠腹腔依次注射氯化锂、匹罗卡品诱发癫癇持续状态(SE)后,观察其自发性癫癇发作(SRS),分别于SE后1周至10周5个不同时间点取材,Nissl染色和Timm染色分别观察海马神经元损伤及苔藓纤维出芽 (MFS)的变化.结果 注射匹罗卡品后84%的大鼠可诱发出SE,经过10～20 d的缄默期后,可观察到Ⅰ～Ⅲ级的反复SRS,病理学检查可见海马神经元的损伤及齿状回内分子层MFS.结论 锂-匹罗卡品颞叶癫癇模型与人类颞叶癫癇有类似发作特点及病理改变,是一种理想的颞叶癫癇动物模型.     

SPF级Balb/c小鼠脏器质量、脏器系数、血常规、血生化指标的测定与比较

背景：实验动物重要基础数据的标准化测定,是实行动物标准化监督管理的重要依据。 目的：测定SPF级Balb/c小鼠主要脏器质量、脏器系数、血常规、血生化指标,并进行比较。 方法：取18 g左右Balb/c小鼠240只,雌雄各半,饲养1周后,精确称量体质量和主要脏器质量,计算脏器系数,并检测血常规及血生化指标。 结果与结论：雌性与雄性Balb/c小鼠比较：①肺、脾、双肾、心、膀胱质量差异有显著性意义(P < 0.01或 P < 0.05)。②肺、脾、双肾、膀胱脏器系数差异有显著性意义(P < 0.01或 P < 0.05)。③白细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞百分比、红细胞、血红蛋白、红细胞平均血红蛋白浓度、红细胞分布宽度、嗜酸性粒细胞百分比差异有显著性意义(P < 0.01或 P < 0.05)。④总蛋白、白蛋白、白球比、血糖、肌酐、尿酸、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、铁、磷、尿素氮差异有显著性意义(P < 0.01或 P < 0.05)。说明性别对SPF级Balb/c小鼠主要脏器、主要脏器系数、血常规、血生化指标有影响。     

不同种属骨髓间充质干细胞体外培养特性的比较研究

目的比较体外培养条件下不同种属骨髓间充质干细胞(BMSC)的生物学特性。方法采用贴壁法和离心法,对小鼠、大鼠、家兔和人BMSC进行分离培养。采用光镜和电镜观察细胞形态,MTT法测定生长曲线,免疫荧光细胞化学法和流式细胞仪分析表面分子Stro-1的表达,并通过试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性、免疫组化检测骨钙素表达以及Von Kossa法显示钙盐沉积等手段评价BMSC对成骨诱导液(10 nmol/L地塞米松,10 mmol/L磷酸甘油和50 mg/L抗坏血酸)的反应性。结果贴壁法细胞得率是离心法的10余倍。各种属BMSC光镜下形态不同,电镜下形态相似;生长曲线基本一致。人原代贴壁细胞Stro-1阳性率为(91.4±8.3)%,小鼠为(83.5±6.2)%。在成骨诱导液中,小鼠BMSC向脂肪细胞分化,家兔BMSC死亡,大鼠和人BMSC可被成功诱导为成骨细胞。BMSC在培养中有自发分化现象。结论小鼠、大鼠、家兔和人BMSC可在体外被大量扩增,所得到的细胞是以低(未)分化细胞为主、不同分化程度的细胞混合物。不同种属BMSC在形态学和对同一诱导液的反应性上存在差异。     

SD大鼠苯中毒模型的建立与检测

目的：建立SD大鼠苯中毒模型。方法：苯溶液多点皮下注射。结果：模型鼠血液学变化符合人苯中毒国家诊断标准变化趋势。结论：该方法建立的SD大鼠苯中毒模型可用于苯中毒疾病研究。