Gal-PEG-PEI/psiRNA肝靶向性纳米基因载体对人胎肝细胞系L-02细胞的转染效率检测

目的：检测半乳糖-聚乙二醇-聚乙烯亚胺/小干扰RNA质粒（Gal-PEG-PEI/psiRNA）肝靶向性纳米基因载体对人胎肝细胞系L-02细胞的转染效率。方法：合成Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米复合物,采用纳米粒径仪测定复合物的粒径和zeta电位,用不同Gal-PEG-PEI氨基与psiRNA磷酸基比例（N/P）的Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米复合物转染L-02细胞,以Lipofectamine2000、非靶向性载体PEG-PEI/psiRNA和裸psiRNA转染为对照组,48 h后用流式细胞仪测定转染效率。转染前加入1 mg半乳糖观察其半乳糖竞争拮抗结果。结果：Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米复合物的粒径随N/P增大而减小,N/P≥1/15时达最小粒径,约为80 nm。Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米基因载体的转染率为（20.4±0.9）%,明显高于非肝靶向性载体PEG-PEI/psiRNA（P〈0.01）及裸psiRNA（P〈0.01）,但低于Lipofectamine 2000（P〈0.05）;加入竞争性拮抗剂半乳糖后Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米基因载体的转染率下降至（4.8±2.1）%,PEG-PEI/psiRNA介导的转染率则不受影响。结论：Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米基因载体可明显提高人胎肝细胞系L-02细胞的转染效率,且具有良好的肝细胞靶向性。     

生长抑素预防十二指肠损伤修补术后肠瘘的观察(附37例报告)

肠瘘是十二指肠损伤修补术后最常见的并发症，可引起一系列代谢障碍，导致营养不良或多器官功能衰竭，死亡率较高。本研究应用生长抑素预防十二指肠损伤修补术后肠瘘的发生，取得满意的效果，现报道如下。     

AFP-L3和AFP mRNA联合检测在肝癌治疗疗效观察和预后中的作用

目的探讨甲胎蛋白(AFP)异质体(AFP-L3)和AFP mRNA联合检测在肝癌(HCC)治疗疗效观察和预后中的作用。方法联合检测AFP-L3、AFPmRNA在HCC患者中表达情况。结果 HCC患者的AFP mRNA(368.65±5.28)和AFP-L3(195.84±3.31)蛋白表达量均明显高于肝硬化组和肝良性病变组(t=23.32、30.15、30.21、25.46,均P<0.01)。另外,HCC患者的AFP阳性率(69.35%)和AFP-L3阳性率(79.03%)明显高于肝硬化组和肝良性病变组(χ2=5.78、10.98、14.52、26.23,均P<0.05)。62例HCC患者中,术后AFP转阴48例,其中AFP-L3仍为阳性18例,其1、2、3年生存率分别为72.22%(13/18)、44.44%(8/18)、22.22%(4/18);另外30例患者AFP和AFP-L3均为阴性,其1、2、3年生存率分别为80.00%(24/30)、53.33%(16/30)、50.00%(15/30);AFP和AFP-L3均转阴者的3年生存率明显高于AFP转阴而AFP-L3未阴者(χ2=3.98,P<0.05)。结论测定患者AFP mRNA和AFP-L3蛋白水平可以鉴定良、恶性肝病,对于HCC的早期诊断及预后判断有重要的临床意义。     

肝靶向性Gal-PEG-PEI纳米载体介导psiRNA转染HepG2细胞效率的检测

目的 检测肝细胞靶向性Gal-PEG-PEI纳米基因载体介导psiRNA转染HepG2细胞的效率.方法 纳米粒径仪和透射电镜测定Gal-PEG-PEI/psiRNA复合物的粒径和形态,转染HepG2细胞,48 h后用流式细胞仪测定转染效率.转染前加入1 mg半乳糖观察其半乳糖竞争拮抗结果.结果 Gal-PEG-PEI/psiRNA复合物的粒径随N/P的增大而减小,最小粒径为81.1 nm;Gal-PEG-PEI载体的转染效率为(37.34±2.50)%,明显高于PEG-PEI、LipofectamineTM 2000及裸psiR-NA;加入竞争拮抗剂半乳糖后Gal-PEG-PEI的转染效率下降至3.60%.结论 Gal-PEG-PEI纳米基因载体对HepG2细胞有较高的转染效率,具有良好的肝细胞靶向性.     

肝细胞靶向性半乳糖-聚乙二醇-聚乙烯亚胺纳米基因载体的合成及其理化特性

背景：对聚乙二醇-聚乙烯亚胺进行半乳糖化修饰，可使其成为具有肝细胞靶向性的纳米基因载体半乳糖化聚乙二醇-聚乙烯亚胺[Galactosylated poly(ethylene glycol)-graft-polyethylenimine, Gal-PEG-PEI]。 目的：合成Gal-PEG-PEI，考察其基本理化特征，为下一步的转染研究提供参考。 设计、时间及地点：对比观察基因工程实验，于2007-10/2008-06在中山大学生物医学工程中心完成。 材料：两步法合成Gal-PEG-PEI。 方法：应用纳米粒径-zeta电位仪、透射电镜、凝胶阻滞实验和EB结合实验测定Gal-PEG-PEI与psiRNA复合物的理化性质，CCK-8法检测其细胞毒性，纳米复合物转染HepG2细胞并观察其转染效率。 主要观察指标：Gal-PEG-PEI/psiRNA的粒径、zeta电位及形态；包覆效率；细胞毒性实验结果；肝脏靶向性转染结果。 结果：Gal-PEG-PEI/psiRNA复合物的粒径随N/P的增大而减小，最小粒径为81.1 nm，而zeta电位随Gal-PEG-PEI中氨基与psiRNA磷酸基比例的增大呈上升趋势；Gal-PEG-PEI对siRNA质粒有较好的包覆效率。Gal-PEG-PEI载体的细胞毒性小于聚乙烯亚胺而其转染效率高于聚乙烯亚胺。 结论：成功合成Gal-PEG-PEI纳米基因载体，表现出良好的肝细胞靶向性，且细胞毒性较小。     

实时定量RT-PCR检测不同肝病患者外周血甲胎蛋白mRNA的表达水平

甲胎蛋白 (AFP)mRNA是肝组织的一个特异性表达基因 ,近年来发现其在部分肝癌患者外周血中呈阳性表达 ,引起了许多学者的关注[1,2 ] 。我们采用实时定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术对不同肝病患者的外周血AFPmRNA进行了定量检测 ,以探讨其在诊断肝癌微转移病灶的可行性。一、对象与方法1.对象 :111例肝病患者为新乡医学院第一附属医院普外科住院患者 ,男 74例 ,女 37例 ,平均年龄 4 2 7岁 ,均经血清学检测、B型超声、CT、病理学等确诊 ,其中原发性肝癌患者 5 6例 ,慢性活动性肝炎 17例、肝硬化患者 2 1例、肝血管瘤患者 5例、…     

荧光定量RT-PCR检测急性白血病患者外周血WT1基因的表达

目的　了解急性白血病患者外周血WT1基因的表达水平。方法　建立荧光定量RT -PCR方法 ,用PEABI 770 0PCR仪检测 114例急性白血病患者、2 6例非白血病患者和3 6例正常人外周血中WT1基因的表达水平。结果　 2 2例急性髓系白血病 (AML)和 15例急性淋巴细胞白血病 (ALL)初发患者WT1基因的表达量为 10 5～ 10 6拷贝 / μgRNA ,取得部分缓解的 2 6例AML和 19例ALL患者的表达水平为 10 2～ 10 4拷贝 / μgRNA ,而取得完全缓解的 17例AML和 13例ALL患者的表达水平为 0～ 10 2拷贝 / μgRNA。 结论　WT1基因在白血病外周血中有高水平的表达 ,可作为急性白血病疗效考核及监测微残留病的指标。     

局部联合应用尿激酶及肝素治疗急性下肢深静脉血栓形成

急性下肢深静脉血栓形成为血管外科常见病 ,约占下肢静脉系统疾病的 2 0 %。其治疗方式有手术取栓和药物溶栓二种 ,传统的溶栓治疗采用全身给药途径 ,但因受到药物剂量的限制 ,溶栓效果不明显而且容易发生凝血功能改变。 1999年 2月— 2 0 0 3年 11月我们对 34例急性期下肢深静脉血栓形成的患者采用局部联合应用尿激酶及肝素的方法 ,取得了明显效果 ,现报告如下。1　资料与方法1.1.　一般资料　本组 34例 ,男 2 3例 ,女 11例 ,年龄 2 3～ 71岁 ,平均 5 2 .7岁 ,病程 3h～ 8d ,平均 4 .2d。发病诱因 :手术 5例 ,分娩 3例 ,长期服用肾上腺皮质…     

肝癌患者外周血甲胎蛋白mRNA表达水平与肝外转移及预后的关系

目的　探讨肝癌患者外周血甲胎蛋白mRNA表达水平与肝外转移及预后的关系。方法　采用realtime PCR(RT PCR)技术 ,定量检测 5 6例肝细胞癌患者外周血甲胎蛋白mRNA的表达水平。结果　5 6例肝癌患者外周血甲胎蛋白mRNA的平均表达水平为 (346 4 4 .6± 94 90 5 .4 )copies/ μgRNA ,伴有肝外转移的 13例 10 0 %为阳性 ,平均水平为 (1385 6 9.2± 15 94 99.3)copies/ μgRNA。 结论　伴有肝外转移的肝癌患者外周血甲胎蛋白mRNA呈高水平表达 ,甲胎蛋白mRNA可作为诊断肝癌远处转移的重要指标之一。     

肝靶向性纳米载体介导psiRNA对HepG2细胞HLA-E干扰效率的检测

目的：检测肝细胞靶向性Gal-PEG-PEI纳米基因载体介导psiRNA干扰HepG2细胞HLA-E表达的效率。方法：分别用Gal-PEG-PEI/psiRNA、裸psiRNA、PEG-PEI/psiRNA、Gal-PEG-PEI/NC-psiRNA、Lipofectamine 2000/psiRNA转染HepG2细胞,同时以未转染的HepG2细胞为空白对照组,以Gal-PEG/NC-psiRNA（无义siRNA质粒）转染为阴性对照组。48 h后,Real-time RT-PCR检测HLA-EmRNA表达水平,Western blot法检测HLA-E蛋白表达水平。结果：Gal-PEG-PEI组对HLA-E的干扰效率为55%（mRNA水平）和62%（蛋白水平）,显著高于Lipofectamine 2000组、PEG-PEI组、裸psiRNA组和阴性对照组（P〈0.01）。结论：Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米粒具有良好的肝细胞靶向性,对HepG2细胞HLA-E有较高的干扰效率。