非甾体消炎药诱导胃癌细胞凋亡的体外研究

目的明确非甾体消炎药(NSAIDs)诱导胃癌细胞凋亡情况和不同p53基因表型对NSAIDs诱导细胞凋亡的影响。方法通过MTT比色法检测NSAIDs对细胞生长活力的影响；应用丫啶橙染色、Annexin-V／PI双染色、共聚焦显微镜、TUNEL法检测细胞凋亡；应用流式细胞术进行凋亡细胞计数。结幂NSAIDs药物吲哚美辛(lndo)和阿斯匹林(Asp)对胃癌细胞株AGS(p53 ／ )、MKN28(p53-／-)均有显著的生长抑制作用，且呈时间依赖性增强：一定浓度的NSAIDs作用一定时间后，AGS、MKN28细胞均发生凋亡的形态学和生化学改变在相同作用条件下。AGS细胞凋亡率明显高于MKN28细胞。处理组MKN28细胞凋亡数量虽有所增多。但不具有统计学意义结论NSAIDs可诱导胃癌细胞凋亡。AGS细胞对NSAIDs更为敏感．lndo的凋亡诱导作用更为强烈。p53基因突变可能阻断了NSAIDs诱导的细胞凋亡．     

细小病毒H－1对正常仓鼠肝细胞DNA周期动力学的影响

健康成年金黄仓鼠腹腔内接种ＰＶＨ－１（５×１０６ｐｆｕ），ＦＣＭ动态检测肝细胞ＤＮＡ周期动力学变化，结果显示：ＰＶＨ－１接种后处于Ｇ０＋Ｇ１期的肝细胞与对照组动物相比无显著差异。Ｓ期肝细胞在第３天显著高于对照组动物（Ｐ＜０．０５），且在第７天时仍呈上升趋势，第１４天到３０天趋于正常水平。Ｇ２＋Ｍ期肝细胞在ＰＶＨ－１接种后第３０天升高（Ｐ＜０．０５）。结果提示，动物在ＰＶＨ－１接种后第３到第７天是病毒在肝细胞中的复制高峰，并阻滞仓鼠处于Ｓ期肝细胞分裂进入Ｇ２＋Ｍ期，但是这种阻滞作用较短暂、并可逆，在ＰＶＨ－１接种后１４～３０天自然消失。     

口服酪酸菌对肝硬化患者免疫紊乱的影响

初步探讨了口服酪酸菌对肝硬化患者免疫状态的影响。16例肝硬化患者服酪酸菌活菌制剂1g每日3次．3个月后血清免疫球蛋白G和A较服药前有明显下降(P<0.05)，提示通过口服酪酸菌制剂，调整肝硬化患者肠道菌群，可能减少有害抗原进入体循环，从而改善患者免疫紊乱状态。     

Bax-Bcl-2异源二聚体与胃癌细胞凋亡的关系

目的：明确Bax-Bcl-2异源二聚体与NSAIDs诱导胃癌细胞凋亡的关系。方法：以NSAIDs诱导胃癌细胞凋亡,并通过丫啶橙(AO)染色、共聚焦显微镜、流式细胞术、TUNEL法加以证实。应用Western blot方法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达,应用免疫沉淀-蛋白印迹法检测Bax-Bcl-2异源二聚体水平的改变。结果：NSAIDs药物吲哚美辛(indomethacin,indo)800 mmol/L和阿司匹林(aspirin,Asp)8 mmol/L作用24 h后,AGS细胞发生显著的凋亡(Indo 800 mmol/L作用24 h凋亡率(9．34±1．99)%,48 h(38．97±3．36)%,Asp 8 mmol/L 48 h凋亡率(17．60±3．30)%。随着药物作用时间的延长,Bax-Bcl-2异源二聚体水平逐渐增高,在6～48 h内均呈现增强趋势,Bax蛋白表达的增强在6～24 h最为明显,Bcl-2蛋白未检测到。结论：NSAIDs可诱导胃癌细胞AGS凋亡；Bax-Bcl-2异源二聚体可能具有促进细胞凋亡的作用,也可能是NSAIDs调控肿瘤细胞凋亡的一个重要作用点。     

非甾体消炎药诱导胃癌细胞凋亡及其机制的研究

目的：明确非甾体消炎药(NSAIDs)能否诱导胃癌细胞凋亡；明确不同的p53基因表型对NSAIDs诱导的细胞凋亡是否有影响；明确NSAIDs对细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达的调控。方法：通过MTT比色法检测NSAIDs对细胞生长活力的影响；应用丫啶橙(AO)染色、Annexin-V／PI双染色、共聚焦显微镜、流式细胞术检测细胞凋亡；应用RT-PCR、Western-blot方法检测bcl-2、bax基因及蛋白水平的改变。结果：NSAIDs药物吲哚美辛(Indo)和阿司匹林(Asp)对胃癌细胞株AGS(p53 ／ )、MKN28(p53-／-)均有显著的生长抑制作用，且呈时间／浓度依赖性增强；在相同作用条件下，AGS细胞的凋亡率明显高于MKN28细胞，处理组MKN28细胞凋亡数量虽有所增多，但与正常对照组相比不具有统计学意义；随着药物作用时间的延长，Bcl-2基因mRNA表达逐渐减弱，Bax基因及蛋白表达逐渐增强，在药物作用6～24小时改变最为明显。结论：一定浓度的NSAIDs作用一定时间后，可诱导胃癌细胞凋亡，这为NSAIDs的抗肿瘤应用增加了理论依据；NSAIDs不能诱导p53基因突变的MKN28胃癌细胞株发生显著的凋亡，p53基因突变可能阻断了NSAIDs的凋亡诱导效应；NSAIDs可能通过调控Bcl-2、Bax的基因及蛋白水平而诱导肿瘤细胞凋亡。     

幽门螺杆菌和非甾体抗炎药对胃上皮细胞增殖的影响

目的　从体外研究的角度探讨幽门螺杆菌 (Hp)和非甾体抗炎药 (NSAID)对胃上皮细胞增殖的影响及其相互作用。方法　胃癌细胞株AGS与Hp和 (或 )吲哚美辛、阿司匹林体外共培养 ,通过MTT比色法和WesternBlot法检测增殖细胞核抗原 (PCNA) ,观察Hp和NSAID对胃上皮细胞增殖的影响。结果　MTT比色法显示CagA阳性的标准Hp菌株NCTC116 37能明显促进胃上皮细胞增殖 ,吸光度 (A)值明显升高 (P <0 .0 5 ) ,而CagA阴性的标准Hp菌株NCTC12 90 8则未发现有促增殖作用 ,且Hp对上皮细胞生长的效应取决于Hp作用的密度 ,在低密度 (3.2× 10 4～ 4 .0× 10 6CFU/ml)时NCTC116 37促进胃上皮细胞生长 ,在高密度 (>2× 10 7CFU/ml)时则抑制其生长 (P <0 .0 5 )。吲哚美辛和阿司匹林均能抑制胃上皮细胞生长 (P <0 .0 5 ) ,并呈浓度依赖性。当Hp和NSAID共同作用于AGS细胞时 ,Hp的促生长作用被逆转 ,呈现出抑制细胞生长的效应 ,A值明显降低 (P <0 .0 5 )。PCNA的WesternBlot检测结果发现 ,Hp菌株NCTC116 37可明显促进细胞PCNA的表达 ,而吲哚美辛和阿司匹林则抑制其表达 ,当两者共同作用于AGS细胞时 ,PCNA的表达明显减弱。结论　Hp对胃上皮细胞的增殖效应与Hp的密度及菌株差异有关 ,CagA阳性的Hp易促进胃上皮细胞生长 ,NSAID可抑制其     

非甾体抗炎药对胃癌细胞凋亡的诱导及相关基因表达的调控

目的明确非甾体抗炎药(NSAID)对胃癌细胞凋亡的影响及凋亡相关基因表达的调控。方法应用MTT比色法检测NSAID对胃癌细胞生长活力的影响;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染色、AnnexinV/PI双染色、共聚焦显微镜、流式细胞术检测细胞凋亡;RTPCR、Westernblot法检测凋亡相关基因bcl2、bax表达水平的改变。结果吲哚美辛(Indo)和阿司匹林(Asp)对胃癌细胞株AGS均有生长抑制作用,且呈时间/浓度依赖性;在药物作用6～24h生长抑制率改变最为明显;NSAID使AGS细胞发生细胞凋亡的形态学改变,Indo800μmol/L作用24h凋亡率为9.34%±1.99%,48h为38.97%±3.36%;Asp8mmol/L48h凋亡率为17.60%±3.30%,Indo的凋亡诱导作用更为明显;随着药物作用时间的延长,bcl2mRNA表达逐渐减弱,bax基因及蛋白表达逐渐增强,在药物作用6～24h改变最为明显,Bcl2蛋白未检测到。结论NSAID可诱导胃癌细胞凋亡,为NSAID的抗肿瘤应用提供了理论依据;NSAID可能通过调控bcl2、bax的基因及蛋白水平而诱导凋亡。     

高糖环境HGF和TGF-β表达对肾成纤维细胞周期的影响

目的探讨HGF和TGF-β对高糖作用下的肾间质成纤维细胞周期的影响,以及作用机理.方法取肾肿瘤切除的正常极肾脏组织,贴壁法培养肾间质成纤维细胞.细胞分别培养于不同的葡萄糖培养液中,另设相同渗透压的甘露醇组.采用流式细胞仪检测细胞周期,MTT方法检测细胞增殖,RT-PCR方法对细胞表达HGF和TGF-β进行检测.结果高浓度葡萄糖作用早期,细胞增殖旺盛,然而随着高糖的持续刺激,细胞增殖发生停滞,同时诱导细胞发生肥大反应.同时观察到高糖作用的早期HGF表达升高,随着作用的持续时间延长,其表达量下降,而TGF-β出现持续的高表达,同时外源加入HGF可以抑制TGF-β的表达.结论高糖作用下的肾间质成纤维细胞早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞,出现肥大.这与HGF和TGF-β的表达差异相关.     

高糖环境HGF和TGF-β表达对肾成纤维细胞周期的影响

目的：探讨HGF和TGF－β对高糖作用下的肾间质成纤维细胞周期的影响，以及作用机理。方法：取肾肿瘤切除的政党极肾脏组织，贴壁法培养肾间质成纤维细胞。细胞分别培养于不同的葡萄糖培养液中，另设相同渗透压的甘露醇组。采用流式细胞仪检测细胞 ,MTT产殖，RT－PCR方法对细胞表达HGF和TGF－β进行检测。结果：高浓度葡萄糖作用早期，细胞增殖旺盛，然而随着高糖的持续刺激，细胞增殖发生停滞，同时诱导细胞发生肥大反应。同时观察到高糖作用的早期HGF表达升高，随着作用的持续时间延长，其表达量下降，而GF－β出现持续的高表达，同时外源加入HGF可以抑制TGF－β的表达。结论：高糖作用下的肾间质成纤维细胞早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞，出现肥大。这与HGF和TGF－β的表达差异相关。     

非甾体消炎药诱导胃癌细胞凋亡的体外研究

目的明确非甾体消炎药(NSAIDs)诱导胃癌细胞凋亡情况和不同p53基因表型对NSAIDs诱导细胞凋亡的影响.方法通过MTT比色法检测NSAIDs对细胞生长活力的影响;应用丫啶橙染色、Annexin V/PI双染色、共聚焦显微镜、TUNEL法检测细胞凋亡;应用流式细胞术进行凋亡细胞计数.结果NSAIDs药物吲哚美辛(Indo)和阿斯匹林(Asp)对胃癌细胞株AGS(p53+/+)、MKN28(p53-/-)均有显著的生长抑制作用,且呈时间依赖性增强.一定浓度的NSAIDs作用一定时间后,AGS、MKN28细胞均发生凋亡的形态学和生化学改变.在相同作用条件下,AGS细胞凋亡率明显高于MKN28细胞.处理组MKN28细胞凋亡数量虽有所增多,但不具有统计学意义.结论NSAIDs可诱导胃癌细胞凋亡,AGS细胞对NSAIDs更为敏感,Indo的凋亡诱导作用更为强烈.p53基因突变可能阻断了NSAIDs诱导的细胞凋亡.