固定剂对动脉管壁弹性蛋白染色的影响

血管壁的形态和弹性问题与临床联系较密切,而管壁中弹性蛋白(弹性纤维)的相对含量、立体构筑及代谢状况对维持血管尤其是动脉的正常结构及弹性回缩功能起着重要作用。在用图像分析技术对动脉管壁弹性蛋白进行定量分析时,为避免其它成份混染造成的测量误差,常采用特殊染色法单独显示弹性蛋白。     

血管石蜡切片起皱原因的探讨

采用常规石蜡包埋H.E染色法制作空腔器官特别是血管组织切片,有时会出现皱褶,甚至结构不完整。凌启波等认为阑尾组织因其密度的不同,若采用高浓度乙醇起始脱水,将导致切片出现皱褶。作者在常规制作人、狗、兔、大鼠股动脉石蜡切片中,发现兔和大鼠的动脉不出现皱褶,而人和狗的切片却易出现皱褶,尤以狗动脉外膜更易出现放射状皱褶。不同种属动物的动脉组织切片出现和不出现皱褶的原因尚未得到解释,为此作者进行了实验探讨。     

A20基因在动脉粥样硬化损伤中对内皮细胞的保护作用

目的　探讨A2 0基因抑制氧化型低密度脂蛋白 (oxidizedlowdensitylipoprotein ,oxLDL)诱导内皮细胞凋亡及相关机制。方法　逆转录 聚合酶链反应检测A2 0基因在oxLDL诱导内皮细胞中的表达。DOTAP脂质体转染pCAGGSEHA2 0和pMAMneo于原代培养的脐静脉内皮细胞 ,经G4 18筛选 ,A2 0表达经免疫荧光鉴定。原位末端标记法、原位杂交检测转染前后oxLDL诱导内皮细胞凋亡情况及同型半胱氨酸蛋白酶 (caspase 3)的表达情况。结果　A2 0基因在oxLDL诱导内皮细胞中不表达。oxLDL诱导内皮细胞凋亡达 2 6 % ,A2 0基因能显著抑制oxLDL诱导的内皮细胞凋亡情况及caspase 3的表达。结论　A2 0基因在动脉粥样硬化的防治中可能有一定作用     

异种抗原α-Gal在近交系版纳小耳猪椎间盘的表达

临床椎间盘突出症是骨科常见病之一,行髓核摘除术后由于纤维环的完整性被破坏, 其抵抗压力的功能受损.当椎体随承载后,椎间隙变窄塌陷,导致脊柱的内源性稳定因素被破坏,可引起或加重椎间关节和小关节的退行性改变,使脊柱的稳定功能下降.人工椎间盘可望解决这一难题.但目前在临床应用的人工椎间盘还存在以下问题:(1)假体活动度过大,稳定性不够.(2)有滑动核突出现象.(3)金属盖板缺乏表面处理,与骨表面的生物相容性欠佳 .故探索异种生物椎间盘移植是治疗椎间盘疾患的途径之一.目前近交系猪被认为是异种移植的最理想的供器官动物.探讨猪的椎间盘能否用作临床移植材料,首先需要解决人体对异种组织材料的免疫排斥反应.α-半乳糖基(α-Cal)是公认存在于除旧世纪灵长目以外的哺乳动物体内的异种抗原.本实验通过检测版纳小耳猪椎间组织中α-Cal的分布情况,为临床猪-人异种椎间盘移植提供依据.采用6头8-11月龄雄性近交系版纳小耳猪的椎间盘组织,常规福尔马林固定,石蜡包埋切片.以植物凝集素作为亲和物质,采用组织化学方法观察猪椎间盘组织中异种抗原的分布情况.椎间盘纤维环状软骨细胞及髓核软骨样细胞的核膜有染色阳性的棕黄色颗粒沉着.云南近交系版纳小耳猪椎间盘组织中有异种抗原存在,但抗原性较弱,可以成为临床损伤修复中良好的材料来源.     

骨磨片封片的探讨

磨制好的骨磨片 ,一般用浓缩后的中性树胶 ,采用空气封闭的方法显示骨小管、骨陷窝。但此法要求有一定的经验 ,掌握不好 ,会使骨磨片透明 ,导致骨磨片制作的失败。骨磨片通过镀银法显示的骨小管和骨陷窝 ,效果好 ,但制作周期长 ,骨磨片的厚度要求罗严 ,在后期的研磨过程中易破损。我们在工作中根据空气封闭的原理 ,在骨磨片的封片方法上进行了一些改变。现将操作方法介绍如下 :1 .取固定后的长骨一段 ,用细钢锯锯取约 1毫米厚的纵、横断面薄片 ,先后用粗、细磨石仔细研磨 ,随时镜检 ,直至骨磨片厚度大约在 1 0 0 μm左右 ,显微镜下能清晰的…     

核心结合因子α1对骨髓间充质干细胞成骨细胞标志基因表达的影响

目的探讨核心结合因子α1（core-binding factor α1，Cbfal）对骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells．MSCs）成骨定向分化的作用。方法抽取3月龄日本大白兔股骨骨髓。密度梯度离心获得MSCs，以Cbfal重组腺病毒转染第3代MSCs．3d后免疫荧光法观察目的基因的表达，并于1～7dMTT法检测其对细胞增殖的影响（Cbfal腺病毒处理组）。以正常培养组、单纯诱导组和对照腺病毒处理组作为对照．各组设置7、14d两个时间点进行观察。RT—PCR法半定量分析Cbfal腺病毒处理对MSCs碱性磷酸酶（alkaline phosphatase．ALP）、骨钙素（osteocalcin。OC）、骨桥蛋白（ostcopontin．OPN）和Ⅰ型胶原等多种成骨细胞标志基因的影响．同时观察Cbfal对MSCs成脂、成肌分化指标过氧化物酶体增殖物激活受体γ2和生肌决定因子的影响。结果①免疫荧光显示．转染Cbfal重组腺病毒后MSCs可以表达Cbfal；②各组MSCs增殖差异无统计学意义（P〉0．05）；③RT—PCR显示7、14d，Cbfal腺病毒处理组ALP、OC和OPN的表达均明显上调，Ⅰ型胶原的表达基本不变；④Cbfal使PPARγ、MyoD的表达受到抑制。结论Cbfal能明显促进MSCs成骨方向的分化。     

TGFβ1基因对血管内皮细胞细胞外基质表达及与基质黏附的影响

了解TGFβ1基因对血管内皮细胞表达细胞外基质蛋白及与基质黏附力的影响。用DOTAP脂质体转染p MAMneo TGFβ1于原代培养的脐静脉内皮细胞,经G4 18筛选,TGFβ1表达经免疫荧光鉴定。Western blot确定 型胶原、纤黏连蛋白的表达,微管吸吮系统确定内皮细胞与基质的黏附力。结果表明生理情况下的内皮细胞能表达少量的TGFβ1及胶原、纤黏连蛋白。经G4 18筛选,外源性TGFβ1在血管内皮细胞中稳定表达,能显著提高胶原、纤黏连蛋白纤维的表达及细胞与基质的黏附。说明TGFβ1在血管组织工程中促进内皮细胞的黏附具有一定的应用价值。     

锌指蛋白基因抑制氧损伤诱导的内皮细胞E-选择素的表达

目的：探讨外源性锌指蛋白基因A20对氧损伤诱导的内皮细胞E-选择素表达的影响。方法：DOTAP脂质体介导peDNA3．1EHA20质粒转染人脐静脉内皮细胞，经G418筛选，免疫荧光检测A20基因的表达，原位杂交、免疫组化分别检测过氧化氢诱导的内皮细胞E-选择素表达。结果：A20基因在经G418筛选后的内皮细胞中得到高效表达，过氧化氢能诱导人内皮细胞E-选择素高表达，而A20基因能抑制80％以上过氧化氢诱导的内皮细胞E-选择素表达，两者间相差显著。结论：A20基因能够显著抑制过氧化氢诱导的内皮细胞活化，有助于氧损伤的治疗。     

流体剪切力调节内皮细胞组织因子表达的初步探讨

目的探讨流体剪切力调节内皮细胞组织因子(tissue factor,TF)表达的机制。方法将脐静脉内皮细胞置于平行板流动腔中接受1．2 Pa(1 dyn／cm2=0．1 Pa)剪切力作用20 min后,采用凝胶电泳迁移率改变法(electorohoretic mobility shift analysis,EMSA)和蛋白免疫印迹分析(Western Blot,WB)检测转录因子Egr-1和Sp1在TF基因表达过程中的表达情况。结果 (1)静止组可见Sp1表达而无Egr-1表达;(2)剪切力组Sp1磷酸化水平和Egr-1表达水平均明显增高;(3)EMSA显示,对于Sp1／Egr-1结合位点,Egr-1对Sp1具有较强的竞争抑制作用。结论流体剪切力调节TF基因表达过程中,不同转录因子起着不同的作用:Sp1主要维持内皮细胞TF基因的基础表达;Egr-1竞争靶位点上的Sp1和磷酸化Sp1可能共同参与流体剪切力诱导TF基因表达。