15个STR基因座的种属特异性研究

目的研究15个STR基因座对常见9种动物的种属特异性，探讨其在法医学中的应用价值。方法对9种常见动物肌肉组织的DNA进行PCR扩增，ABI310遗传分析仪进行DNA分型，测定15个STR基因座的种属特异性。结果用15对SIR基因座引物分别对9种常见动物肌肉组织的DNA进行PCR扩增检测CSFIPO，B8S1179，D19S433基因座时，9种动物均有PCR扩增产物；检测1321S11，197S820，D13S317，D16S539，TPOX，D18S51，D5s818，FGA，D3S1358基因座时，部分动物有PCR扩增产物，其中TPOX，D21S11基因座扩增产物片段长度明显与人的不同。这9种动物在D2S1338、vWA、TH01基因座均没有扩增产物。结论在15个STR基因座中，3个基因座只对人DNA有扩增产物，有较好的种属特异性；9个基因座对人和部分动物均有扩增产物，但产物的片段大小与人不同，在进行个人识别时，可以用其分析DNA的种属来源；3个基因座对人和动物均有扩增产物，且片段长度相近，在进行个人识别时，应先作DNA种属来源检查。     

X染色体STR基因座在法医鉴定中的应用

目的通过探讨太原地区汉族人群位于X染色体上的短串联重复序列DXS6804的遗传多态性,分析X染色体STR基因座在法医鉴定中的利与弊,以促进X染色体STR基因座在法医学实践中的应用。方法随机抽取太原无血缘关系汉族个体静脉血500μL,采集50例两代家系血进行突变观察;采集同一例健康男性尸体的心脏、肝脏、肌肉组织等进行同一性测定。乙二胺四乙酸抗凝,酚-氯仿法提取DNA,聚合酶链反应扩增,8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分型。基因座的等位基因频率采用直接计算法,与其他人群比较采用χ2检验。结果共检出5种不同的等位基因,基因多样性为0.7024。与不同地区及不同民族的等位基因频率分布进行了比较均有明显的差异。同一尸体血液,器官组织检测结果分型一致。50例两代家系观察未见突变。结论DXS6804基因座在太原地区汉族人群中有较好的多态性,X染色体STR基因座在法医鉴定中具有重要价值。     

家兔原发性脑干损伤的功能及病理特点研究

目的：研究不同损伤程度原发性脑干损伤的功能及病理变化特点。方法用家兔原发性脑干损伤分级模型,Ⅰ～Ⅳ组撞击能量逐渐增大,每组10只对照组5组。通过解剖肉眼观察、组织 HE 普通组织化学染色及电镜检测来研究原发性脑干损伤的病理学变化。结果Ⅰ组脑干损伤功能变化轻微,组织病理表现为局部散在蛛网膜下腔出血,软脑膜局部剥脱,脑干浅表层有少量点状出血,神经细胞水肿,髓鞘和轴索基本正常;Ⅱ组脑干损伤功能变化较明显,病理表现为蛛网膜下腔片状出血,脑干浅层少量点（片）状出血,神经细胞轻度肿胀和空泡化;Ⅲ组脑干损伤反应明显,表现为脑干厚层蛛网膜下腔出血,脑干浅层及深部多处点片状出血,神经细胞变性,轴索变性断裂、轴浆萎缩;Ⅳ组脑干损伤异常严重,出现长时间呼吸抑制,8／10动物死亡,病理表现为脑干被厚层蛛网膜下腔血肿包裹,脑干损伤累及全层,镜下可见多发性小出血灶,神经细胞仅残留的细胞核,髓鞘板层严重分层且断裂,轴索离断、崩解;对照组生理功能及病理无异常。结论随撞击能量增大,脑干损伤功能变化更明显,病理变化更严重,且损伤区域由浅层向深层变化。     

mRNA差异显示方法的建立及条件优化

目的 研究大鼠皮肤肌肉特异性基因的表达,探讨引物的不同、退火温度变化与扩增产物特异性之间的关系. 方法 12只健康雄性Sprague-Dawley大鼠分为正常对照组与实验组(挫伤4 h).分别提取总RNA,反转录成cDNA,通过不同引物、退火温度及反应体系进行PCR产物扩增,比较不同条件下差异条带的情况. 结果 总RNA量在2～4 μg时,扩增条带最亮;提高反转录温度有利于长片段cDNA的合成;使用TaKaRa公司带有T7启动子的Oligo dT12 NM和M13的随机引物时,可最大限度地减少非特异性条带;先使用低严谨的退火温度,再使用高严谨的退火温度可显著地增强差异条带重复性和敏感性. 结论 差异显示技术方法简便、灵敏、高效,适用于一般性的基因差异表达研究.     

大鼠皮肤和肌肉挫伤mRNA差异显示技术中总RNA的提取和检测

目的研究大鼠皮肤和肌肉挫伤总RNA提取对差异显示技术的影响。方法使用Invitrogen TRIzol Reagent提取总RNA,由于皮肤与肌肉所含的蛋白比较多,所以改进了传统的提取步骤,可以减少杂质的残留。结果改进的Invitrogen TRIzol Reagent提取的RNA呈现28SrRNA,18S rRNA和5S rRNA3条较清晰的条带,其A260/A280值可达1.913,具有很高的纯度。结论大鼠皮肤和肌肉mRNA差异显示技术中,皮肤与肌肉总RNA的质量是十分关键的因素,通过对传统方法进行改进,建立起较完善的大鼠皮肤和肌肉mRNA差异显示技术体系,为开展损伤时间的分子鉴定与功能基因的分离、克隆奠定基础。